血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C、D在宮頸癌中的表達(dá)及意義

摘要：目的 檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C（VEGF-C）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D（VEGF-D）在正常宮頸組織組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、宮頸癌非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)，并分析其與宮頸癌的關(guān)系。方法 免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)33例宮頸癌組織（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）、57例宮頸癌組織（非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）中VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)，以30例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、30例正常宮頸組織作為對(duì)照組。結(jié)果 VEGF-C、VEGF-D在正常宮頸組織組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組及宮頸癌組織組中的表達(dá)量依次增高（P<0.05）；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C、VEGF-D在組織中的表達(dá)較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組均明顯升高（P<0.05）；Ⅱ期較Ⅰ期相比VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)增高（P<0.05）。結(jié)論 VEGF-C、VEGF-D通過促進(jìn)宮頸癌內(nèi)淋巴管形成，與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

關(guān)鍵詞：宮頸癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，淋巴轉(zhuǎn)移是宮頸癌最常見的轉(zhuǎn)移方式，宮頸癌在早期就可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否存在不但影響治療方案的選擇，并且對(duì)患者的預(yù)后影響很大。研究表明血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C（vascularendothelialgrowthfactorC，VEGF-C）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D（vascularendothelialgrowthfactorD，VEGF-D）是目前已確認(rèn)的淋巴管生長(zhǎng)因子，其可以特異性的促進(jìn)腫瘤組織新生淋巴管形成[1]。關(guān)于VEGF-C、VEGF-D在宮頸癌組織的表達(dá)及其臨床意義的研究報(bào)告較少，本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)VEGF-C、VEGF-D在正常宮頸組織組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、宮頸癌非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)情況，進(jìn)一步分析比較各組之間的差異，為宮頸癌的早期診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的及時(shí)發(fā)現(xiàn)與治療提供新的臨床思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 病例選自本院婦科及本市婦幼保健院婦科2007年有完整臨床資料的存檔宮頸癌病理組織蠟塊90例，患者術(shù)前未行任何治療，90例宮頸癌按FIGO臨床分期標(biāo)準(zhǔn)分I期58例，Ⅱ期32例；鱗癌55例，腺癌35例；高分化29例，中分化28例，低分化33例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者57例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例。宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervialintraepithelialneoplasia，CIN）Ⅲ30例。正常宮頸組織30例。患者年齡34～65歲，平均47.5歲。

1.2方法 采用免疫組織化學(xué)SP法。兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGF-D多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司。蠟塊連續(xù)組織切片成4μm厚，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，VEGF-C和VEGF-D免疫組化染色。每批切片均設(shè)有陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，用已知陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3結(jié)果 判斷所有切片均有兩位高年資病理醫(yī)師單獨(dú)閱片評(píng)價(jià)。VEGF-C、VEGF-D陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：VEGF-C、VEGF-D定位于細(xì)胞漿及胞膜上，胞漿成透明或無色者為陰性，胞漿或（和）胞膜呈深棕色或棕黃色顆粒為陽性。每例取10個(gè)高倍（×400）視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，以陽性細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞總數(shù)>10%為陽性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS11.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料采用%表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

VEGF-C、VEGF-D蛋白主要表達(dá)于癌細(xì)胞，陽性顆粒呈彌漫性或小灶性分布，間質(zhì)中少量表達(dá)。癌組織VEGF-C、VEGF-D蛋白高表達(dá)，癌周組織中VEGF-C、VEGF-D呈低表達(dá)，癌組織顯著高于癌周組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且兩組中表達(dá)均高于宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、正常宮頸組織組（P<0.05）。癌組織中VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)與臨床分期相關(guān)，Ⅱ期明顯高于Ⅰ期，差異顯著（P<0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C、VEGF-D的陽性表達(dá)率為72.7%、63.6%明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的49.1%、45.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。病理分級(jí)高分化、中分化和低分化組癌組織中VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

目前已知的腫瘤轉(zhuǎn)移途徑中，淋巴轉(zhuǎn)移是宮頸癌轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，它關(guān)系到治療方案的選擇，而淋巴管的生成是發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的必要條件。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一種糖蛋白細(xì)胞因子，是由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生及分泌的血管生成因子[2]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）及其受體在血管生成過程中發(fā)揮著重要作用[3]，其特異性的作用于內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，介導(dǎo)正?；虿±淼难芎土馨凸苌?。VEGF-C、VEGF-D是VEGF家族新成員，它是一種高度保守的分泌性糖蛋白，腫瘤淋巴管生成主要受VEGF-C、D/VEGFR-3的調(diào)控[4]。VEGF-C、VEGF-D的促淋巴管生成作用和宮頸癌之間存在一定的關(guān)系。

VEGF-C是首先被發(fā)現(xiàn)的促淋巴管生長(zhǎng)因子，最初由Joukov等從人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3的cDNA文庫中克隆并分離出來的。在惡性腫瘤中，VEGF-C主要產(chǎn)生于癌細(xì)胞。臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞中的VEGF-C可誘導(dǎo)淋巴管生成，促進(jìn)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的發(fā)生。在人類多種原發(fā)惡性腫瘤組織中，VEGF-C的表達(dá)與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)[5]。研究顯示VEGF-C的表達(dá)在人類乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、睪丸癌、食管癌、胃癌、甲狀腺癌中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。本試驗(yàn)中，研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C在宮頸癌組織中的表達(dá)均明顯升高，與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、正常宮頸組織組相比，差異顯著（P<0.05）。VEGF-C蛋白淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)要高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF-C的表達(dá)，Ⅱ期比Ⅰ期高，差異顯著（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

VEGF-D是由Achen等在1988年通過計(jì)算機(jī)同源搜索發(fā)現(xiàn)并鑒定的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，與VEGF-C結(jié)構(gòu)功能相似，在正常組織中少見表達(dá)，多由腫瘤細(xì)胞及腫瘤基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。Stacker等[6]在小鼠腫瘤異種移植模型中證實(shí)VEGF-D能夠誘導(dǎo)腫瘤內(nèi)淋巴管形成，腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的VEGF-D能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Hu等[7]追蹤觀察69例結(jié)直腸癌患者顯示腫瘤組織VEGF-D蛋白表達(dá)呈較高水平，其表達(dá)水平與淋巴轉(zhuǎn)移及患者低生存率相關(guān)，認(rèn)為VEGF-D的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)。本試驗(yàn)中，研究發(fā)現(xiàn)VEGF-D在宮頸癌組織中的表達(dá)均明顯升高，與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、正常宮頸組織組相比，差異顯著（P<0.05）。VEGF-D蛋白淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)要高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF-D的表達(dá)，Ⅱ期比Ⅰ期表達(dá)要高，相比差異顯著（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Van[8]等發(fā)現(xiàn)VEGF-C、VEGF-D在宮頸病變不同階段表達(dá)有顯著正相關(guān)性。Haiko等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在從子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變進(jìn)展為子宮頸浸潤(rùn)癌的過程中，VEGF-C、VEGF-D表達(dá)不同，因此推測(cè)其可能還參與了宮頸癌變過程中的促淋巴管生成表型的轉(zhuǎn)變，使得子宮頸癌早期即可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。本研究顯示，在癌旁組織和不同宮頸癌試驗(yàn)中，在正常宮頸組織組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組、宮頸癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在宮頸癌Ⅰ期和Ⅱ期中，VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)和宮頸病變程度呈正相關(guān)。本研究顯示，VEGF-D在宮頸疾病組織中的表達(dá)與VEGF-C呈高度正相關(guān)，二者在宮頸癌癌變過程中表達(dá)逐步增強(qiáng)，并與宮頸癌分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究顯示，VEGF-D同VEGF-C一樣在宮頸癌新生淋巴管形成中發(fā)揮作用，誘導(dǎo)宮頸癌新生淋巴管形成，促進(jìn)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

腫瘤的抗血管生成治療已用于臨床并取得較好療效，但是僅抗血管治療具有局限性，VEGF-C及VEGF-D還有促進(jìn)淋巴管生成的作用，腫瘤淋巴管生成是腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的重要途徑，隨著腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移機(jī)制的進(jìn)一步闡明，阻斷VEGF-C及VEGF-D介導(dǎo)的生物治療可能成為治療腫瘤的新靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃輝，蔣宏玲，劉美蓮，等.VEGF-CVEGFR-3與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，10：02.

[2]任慶蘭，吳永忠.抑制mdrl基因?qū)m頸癌放射增敏的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2010，19（07）486-489.

[3]DingKY，BaiX，RuanCG，etal.Effectofvascularendothelialgriwtgfactor-C onthecellgrowthandg

iogenesisinNB4cellxenografttumor[J].ZhonghuaXueYeXueZaZhi，2011，32（2）：94-98.

[4]RouzautA，IrigoyenM，MontuengaLM.Lymphangiogenesisandlungcancer[J].J Thorac Onco，2007，2（5）：384-386.

[5]向作林，曾韶沖，湯釗遒，等.趨化因子受體4核陽性以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C和細(xì)胞角蛋白19的表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系研究[J].中華腫瘤雜志，2010，32（5）：344-349.

[6]StackerSA，CaesarC，BaldwinME，eatl.VEGF- Dpromotesthemetastaticspreadoftumorellsviathely

mphatics[J].NatMed，2009，7（2）：186-189.

[7]Hu WG，LiJW，F(xiàn)engB.VascularendothelialgrowthfactorsC and Drepresentnovelprogrognosticm

arkersincolorectalusingquantitativeimageanalysis[J].European Surgical Research，2007，39（4）：229-238.

[8]VanTrappenPhilippeO.SteeleD.LoweDG.etal.Expressionofvascularendothelialgrowthfactor（VE

GF）-CandVEGF-D.andtheirreceptorVEGFR-3.duringdifferentstagesofcervicalcarcinogenesis[J].JPathol.2003.201（4）：544-547.

[9]HaikoP，MakinenT，KeskitaloS，et al.DeletionofvascularendothelialgrowthfactorC（VEGF-C）and VEGF-DisnotequivalenttoVEGFreceptor3deletioninmouseembryos[J].MolCellBiol.2008，28（15）：4843-4850.

編輯/哈濤