經(jīng)肝動脈灌注臍帶間充質(zhì)干細胞治療失代償期肝硬化臨床觀察

摘要：目的 觀察人臍帶間充質(zhì)干細胞治療失代償期肝硬化患者的臨床效果。方法 失代償期乙型肝炎肝硬化患者35例， 經(jīng)肝動脈灌注人臍帶間充質(zhì)干細胞2×107個。患者在移植前及移植后2、4、12、24w分別檢測血清ALT、AST、TBIL、白蛋白（ ALB） 、凝血酶原時間（ PT） 和凝血酶原活動度（PTA）水平變化。同時觀察臨床癥狀的改善情況及術(shù)后的不良反應。結(jié)果 35例接受人臍帶間充質(zhì)干細胞移植的肝硬化患者術(shù)中術(shù)后無明顯不良反應發(fā)生。移植后，患者臨床癥狀改善明顯，食欲不振、乏力、腹水等減輕甚至消失；血清學檢測：術(shù)后24w ALT、AST、TBIL、凝血酶原時間（ PT）較術(shù)前明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；術(shù)后24w白蛋白（ ALB）和凝血酶原活動度（PTA）水平較術(shù)前明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05） 。結(jié)論 人臍帶間充質(zhì)干細胞移植治療失代償期肝硬化安全可行， 可不同程度改善肝硬化患者臨床癥狀、肝功能和凝血功能。

關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細胞； 失代償期肝硬化； 肝動脈灌注； 移植

失代償期肝硬化是各種肝病的終末期病變，臨床上最有效的治療措施是肝移植，但由于其治療費用昂貴、供體來源困難及移植后的免疫排異反應等副作用限制了其臨床大規(guī)模應用。

目前，干細胞研究在醫(yī)學領(lǐng)域取得了令人矚目的成就。間充質(zhì)干細胞屬于多能干細胞，具有橫向的分化能力，在一定條件下可分化成干細胞[1，2]等，臍帶血有含有豐富的間充質(zhì)干細胞，且其免疫原性弱，間充質(zhì)干細胞原始，擴增力強，因此臍血間充質(zhì)干細胞的作用日益突出，可以作為各種系統(tǒng)性疾病的替代細胞，也為終末期性的肝臟疾病治療提供了新的思路。

本次研究采用臍帶間充質(zhì)干細胞（ MSCs） 對失代償期肝硬化進行治療， 取得了顯著的療效， 現(xiàn)臨床分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2010年7月～2012年12月住院的失代償期肝硬化患者35例，男性26例，女性9例，年齡25～68歲，平均（46±6.1）歲；乙肝炎后肝硬化21例， 乙肝炎與酒精性混合肝硬化4例， 酒精性肝硬化5例，膽汁性肝硬化 3例，肝豆狀核變性所致肝化2例；Child-Pugh 分級： A 級4例，B 級20例， C 級11例。術(shù)前均行腹部B 超和（或） CT 檢查，26例并發(fā)腹水。所有病例均符合失代償期肝硬化的診斷標準，術(shù)前、術(shù)后均給予內(nèi)科保守治療。實驗室檢查包括血清ALT、AST、TBIL、ALB、凝血酶原時間（PT） 、凝血酶原活動度（PTA）。所有治療患者均在知情同意情況下簽訂《知情同意書》。

1.2 臍帶間充質(zhì)干細胞移植 術(shù)前查凝血功能、電解質(zhì)、肝腎功能、心電圖、血常規(guī)、 B超或CT等，采用由深圳市北科細胞工程研究所提供的分離臍帶間充質(zhì)干細胞2×107個， 導管室內(nèi)，患者取平臥位，常規(guī)消毒后，進行局部麻醉，右股動脈穿刺，后置入5 F動脈鞘，對肝功能及腸系膜動脈進行造影，導管連接肝固有動脈，緩慢注入臍帶間充質(zhì)干細胞液20mL，結(jié)束后用10mL生理鹽水對管腔進行沖洗。術(shù)后24h動態(tài)心電監(jiān)護，密切注意患者的病情變化，每30～60min測血壓、呼吸、脈搏1 次，注意患者有無腹脹痛、惡心、頭暈、出冷汗、心慌及大便顏色等情況。必要時可預防性使用抗生素。

1.3 觀察指標 術(shù)后住院期間及出院后的觀察期所選擇的病例均未使用保肝藥物及輸注人血白蛋白等， 術(shù)后觀察患者臨床癥狀、體征和不良反應； 術(shù)后2w、4w、12w和24w復查肝功能、PT、PTA和腹部B超。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料采用t檢驗； 計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 臍帶間充質(zhì)干細胞移植后患者身體狀況的改善情況 移植后2w， 35例患者食欲改善33例， 體力好轉(zhuǎn)28例， 腹脹減輕29例。

2.2 臍帶間充質(zhì)干細胞移植術(shù)后肝功能及凝血功能指標改變情況 移植前后對比，血清白蛋白變化最為明顯，于第4w即可見升高，第24w明顯升高，統(tǒng)計學P<0.05；干細胞移植后，凝學酶原時間第12w下降最明顯，統(tǒng)計結(jié)果顯示P<0.05?？偰懠t素水平、ALT、AST術(shù)后均有下降，統(tǒng)計學結(jié)果P<0.05。凝血酶原活動度（PTA）術(shù)后有升高，統(tǒng)計學結(jié)果P<0.05，有統(tǒng)計學意義（見表1）。

注：** 治療前與治療后肝功能及凝血指標相比，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。

2.3 移植完成后B超檢查患者腹水情況 并發(fā)腹水者26例， 術(shù)后14d患者無明顯腹水減輕； 術(shù)后6個月內(nèi)患者腹水增多1例， 腹水顯著減少15例， 腹水消失10例。

2.4 移植后不良反應的發(fā)生情況 35例患者未見發(fā)熱、白細胞下降、肝區(qū)疼痛等不良反應和并發(fā)癥。

3 討論

肝硬化（liver cirrhosis） 是一種以慢性肝病，其特征有肝組織纖維化、再生結(jié)節(jié)及假小葉形成，我國的終末期肝硬化發(fā)病率高，危害嚴重，目前尚無有效的臨床治療辦法，主要是對癥治療[3]。

人臍血間充質(zhì)干細胞（ human umbilical cord blood，HUBC） 是指位于胎盤近胎兒側(cè)血管及臍帶內(nèi)的血液， 其包括造血干細胞（ hematopoietic stem cells， HSCs ） 和間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells， MSCs）。從成體干細胞（adult stem cel1），廣泛存在于人體組織和器官的一個高度的自我更新和分化潛能的中胚層來源的MSC基質(zhì)[4，5]。

近年來， MSCs 移植治療肝硬化成為醫(yī)學研究熱點。通過研究發(fā)現(xiàn)， 在適宜條件下，MSCs 可在體外分化成為靶細胞[6]。間充質(zhì)干細胞在一些細胞因子如成纖維、表皮等細胞生長因子刺激下，通過其特殊的信號通路分化形成表型、形態(tài)均類似于干細胞，且具有干細胞功能的細胞，如分泌白蛋白、尿素的形成、糖原的儲存、低密度脂蛋白的攝取等[7，8] 。

MSCs 通過產(chǎn)生細胞因子對免疫功能進行調(diào)節(jié)，抑制免疫細胞炎性反應、增殖等，減緩干細胞的死亡速度，從而達到減輕肝硬化程度的目的[9] 。同時改善肝細胞，細胞中的肝細胞的刺激增殖的功能。部分臨床及動物實驗證明，MSCs 通過對膠原蛋白沉積和轉(zhuǎn)化生長因子的抑制作用，來抑制肝臟細胞的纖維化[10]。

本研究行肝動脈介入移植MSCs治療失代償期肝硬化患者，臨床初步觀察表明， 移植后第4w患者體內(nèi)白蛋白含量較治療前有顯著恢復， 第24w隨訪結(jié)果顯示白蛋白持已續(xù)恢復到正常水平。期間未對患者行輸注白蛋白及血漿相關(guān)治療。胸內(nèi)腹水消退。患者癥狀明顯改善。肝功能結(jié)果在術(shù)后第4w有顯著改善， 第24w的結(jié)果仍表明肝功能及凝血指標呈現(xiàn)持續(xù)恢復趨勢， 可推斷近期干細胞對肝功能的修復有顯著效果。本研究通過臨床證實了MSCs 的移植對改善肝功能有良好效果， 這與試驗結(jié)果相同[9]。雖然通過干細胞移植來治療肝硬化已有了很大進展， 但其作用機理還有待進一步得研究。其最佳劑量和最佳途徑有待確定， 長期療效及不良反應還需通過多中心、隨機、對照臨床試驗來證實。

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編輯/許言