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    試論趨化因子CXCR4在卵巢腫瘤干細(xì)胞活動(dòng)中的作用

    2014-12-31 00:00:00燕鋒張靜燕霞
    醫(yī)學(xué)信息 2014年12期

    摘要:目的 通過(guò)研究卵巢干細(xì)胞中趨化因子受體在腫瘤干細(xì)胞系中侵襲、轉(zhuǎn)化中的作用,探討治療卵巢腫瘤的新方法。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR方法檢測(cè)趨化因子的活動(dòng)表達(dá),同時(shí)通過(guò)體外微孔隔離室觀察趨化因子受體在卵巢腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移活動(dòng)中作用。結(jié)果 趨化因子受體CXCR4在卵巢癌細(xì)胞中呈陽(yáng)性,通過(guò)封閉CXCR4可以抑制趨化因子CXCL12族對(duì)腫瘤遷移的促進(jìn)作用。結(jié)論 卵巢腫瘤干細(xì)胞中趨化因子受體的活躍程度直接和腫瘤生長(zhǎng)活動(dòng)相關(guān),發(fā)揮趨勢(shì)因子的沉默作用可以減緩卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。

    關(guān)鍵詞:卵巢腫瘤;CXCL12;CXCR4

    女性卵巢腫瘤發(fā)病率越來(lái)越高已經(jīng)成為一個(gè)趨勢(shì),這既和現(xiàn)代人的生活、工作習(xí)慣改變相關(guān),也和我們面臨的環(huán)境日益惡化有關(guān)。眾多的卵巢腫瘤患者診療資料表明:卵巢癌細(xì)胞非常容易發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移。而更進(jìn)一步的醫(yī)學(xué)研究也發(fā)現(xiàn),卵巢癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的速度和患者身體體質(zhì)以及卵巢腫瘤干細(xì)胞中的趨化因子受體表達(dá)的高低有密切聯(lián)系。本文主要探討唯一一個(gè)在卵巢腫瘤干細(xì)胞上特異表達(dá)的趨化因子CXCL12族及其特異性受體CXCR4在卵巢癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移中所起的作用。

    1資料與方法

    1.1培養(yǎng)卵巢腫瘤干細(xì)胞 將CAOV-3卵巢細(xì)胞株和Anglne細(xì)胞株接種在含10%胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中,并在37°C、5%CO2以及飽和濕度環(huán)境中培養(yǎng)24h。

    1.2建立CXCR4穩(wěn)定表達(dá)體系 取培養(yǎng)基細(xì)胞,用磷酸鹽緩沖液沖洗兩次,使用SIGMA Trizol試劑盒提取卵巢腫瘤干細(xì)胞總RNA,再進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄生成聚合酶鏈反應(yīng)物(RT-PCR),取2.5μL的PCR物在1.5%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳,用溴化一啶進(jìn)行染色,最后通過(guò)紫外光檢測(cè)儀觀察PCR的合成結(jié)果,采用免疫熒光標(biāo)志流式細(xì)胞術(shù)對(duì)卵巢腫瘤干細(xì)胞CXCR4的表達(dá)進(jìn)行分析。

    1.3分組檢測(cè)CXCR4趨化因子的趨化活性 腫瘤干細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)至75%~95%融合時(shí),再用磷酸鹽緩沖液清洗兩遍,并將多細(xì)胞組合在無(wú)血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)成單細(xì)胞懸液,接著將腫瘤干細(xì)胞接種在不同的Transwell侵襲小室內(nèi)。在每孔小室的上室加0.2mL的單細(xì)胞懸液,下室加0.4mL的無(wú)血清培養(yǎng)液。通過(guò)添加不同趨化因子以及改變趨化因子的不同濃度,將卵巢腫瘤干細(xì)胞分為五組進(jìn)行培養(yǎng),各組具體趨勢(shì)因子分布及濃度見(jiàn)表1。

    在培養(yǎng)結(jié)束后,將五組樣本分別用磷酸鹽緩沖劑再?zèng)_洗兩次,并采取措施抹去未侵襲的細(xì)胞,在無(wú)菌風(fēng)干的情況下用0.1%結(jié)晶紫進(jìn)行染色20min,再用自來(lái)水沖洗。將干細(xì)胞切片隨機(jī)記錄5個(gè)視野的侵襲、轉(zhuǎn)移細(xì)胞數(shù),進(jìn)行平均統(tǒng)計(jì)。

    2結(jié)果

    2.1 CXCR4的表達(dá)情況 流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示在CAOV-3卵巢細(xì)胞株存在表達(dá)中等量的CXCR4趨化因子,在RT-PCR的檢測(cè)表明,該細(xì)胞存在一定程度的CXCR4分子轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象。在Anglne細(xì)胞株中則不存在CXCR4表達(dá)。

    2.2 CXCR4趨化因子表達(dá)不同對(duì)CAOV-3卵巢腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)化作用的影響。在B組,當(dāng)在下室添加一定濃度的CXCL12趨化因子時(shí),腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的數(shù)量比A組(對(duì)照組)明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在C組,當(dāng)CXCL12濃度明顯增加時(shí),侵襲和轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞數(shù)量比B組又明顯增加了,也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而在D組和E組,由于在上室分別添加了CXCR4中和抗體以及CXCR4拮抗劑AMD3100,明顯抑制了卵巢腫瘤干細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移趨勢(shì),在進(jìn)一步的比較中(E組),加入CXCR4拮抗劑AMD3100時(shí),卵巢腫干細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的趨勢(shì)抑制更加明顯(P<0.05),見(jiàn)表2。

    3討論

    腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移抑制是腫瘤治療研究的重點(diǎn),通過(guò)尋找與腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)的趨化因子也成為當(dāng)前腫瘤治療藥物研制的關(guān)鍵。由于腫瘤發(fā)生部位的不同,不同趨化因子受體在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用也就不盡相同。通過(guò)對(duì)卵巢腫瘤干細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的檢測(cè),我們可以發(fā)現(xiàn),趨化因子受體(CXCL12族和CXCR4)在腫瘤干細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用[1]。

    趨化因子的作用主要在于趨化細(xì)胞的遷移。例如淋巴結(jié)中的趨化因子(Ltn)會(huì)通過(guò)與組織中的抗原提呈細(xì)胞相互作用監(jiān)視病原體的入侵;血管中有些趨化因子(CCR7)會(huì)提供一些關(guān)鍵信息促成細(xì)胞生成;而炎癥趨化因子(Il8)的作用則是趨化白細(xì)胞從血循環(huán)系統(tǒng)到組織的感染或是損傷部位。顯然,卵巢腫瘤干細(xì)胞中的趨化因子也影響了腫瘤細(xì)胞的活動(dòng)規(guī)律[2]。

    CXCR4是白細(xì)胞受體中的一種,在人體免疫系統(tǒng)的細(xì)胞調(diào)整中發(fā)揮重要作用。國(guó)外的醫(yī)學(xué)研究表明,80%的卵巢腫瘤組織中存在趨化因子CXCL12的受體CXCR4的表達(dá),95%以上的卵巢腫瘤腹水中有CXCL12,正常的卵巢組織細(xì)胞中則不存在。本例中的對(duì)比檢測(cè)結(jié)果也證明了這一結(jié)論。

    腫瘤細(xì)胞的惡性程度最直接、最準(zhǔn)確的判斷標(biāo)準(zhǔn)就是細(xì)胞的侵襲以及轉(zhuǎn)移程度。本文通過(guò)培養(yǎng)不同組別的卵巢腫瘤干細(xì)胞,檢測(cè)的結(jié)論是:CXCL12能明顯促進(jìn)CAOV-3細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,而當(dāng)加入CXCR4中和抗體或是CXCR4拮抗劑時(shí),這種侵襲和轉(zhuǎn)移的程度有著明顯的減緩。顯然,趨化因子CXCL12和CXCR4在卵巢腫瘤的發(fā)展過(guò)程中有著重要影響。

    4結(jié)論

    CXCR4、 CXCL12族趨化因子的相互作用會(huì)促進(jìn)卵巢腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移速度,雖然通過(guò)抑制趨化因子受體CXCR4的表達(dá),并不肯定就能阻止腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散,但給未來(lái)治療卵巢腫瘤的藥物研究提供了一條新的思路。

    參考文獻(xiàn):

    [1]黃文,李仲均,黃素然,等.CXCR4在卵巢上皮性癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)及臨床意義[J].國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào),2013(12):1752.

    [2]宋淑亞,崔研因.CXCR4抑制劑與血液系統(tǒng)腫瘤的治療[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2013(15):2306.

    編輯/孫杰

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