1例用玻片凝集法鑒定老年患者血型錯誤的原因分析

摘要：目的 生理鹽水玻片凝集法測定老年患者血型，交叉配血發(fā)現(xiàn)血型鑒定錯誤，查找原因。方法 玻片法，試管法，正定型，反定型，生理鹽水交叉配血實(shí)驗；方法學(xué)原理：根據(jù)紅細(xì)胞膜表面有無A抗原和（或）B抗原，將血型分為A，B，AB，O型4種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗，通過正反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正定型是指用標(biāo)準(zhǔn)抗A抗B分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或（和）B抗原；反定型，是指用標(biāo)準(zhǔn)的A型、B型細(xì)胞來測定血清中有無抗A和（抗B）。結(jié)論 可以通過試管凝集法檢測發(fā)現(xiàn)老年體弱患者血中較弱的抗原，從而正確鑒定血型，合理交叉配血，可為臨床手術(shù)，外傷失血等合理輸血提供有力的醫(yī)療保障。

關(guān)鍵詞：血型鑒定；玻片法；試管法；注意事項

筆者曾在基層醫(yī)院遇到過1例88歲的老年患者，因摔倒后30min診斷為\"股骨骨折\"收住院，遵醫(yī)囑進(jìn)行手術(shù)前驗血備血。立即抽取患者血液3.0ml，以 1500轉(zhuǎn)/min離心分離血清，用生理鹽水凝集法（玻片法）鑒定患者ABO血型，鑒定結(jié)果：患者紅細(xì)胞懸液與抗A與抗B血清均不發(fā)生凝集（紅細(xì)胞均勻散在）判定為O型RH（+），與O型獻(xiàn)血者血液交叉不符（次側(cè)管出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集和溶血現(xiàn)象），同型血相輸主側(cè)和次側(cè)均不應(yīng)凝集。查找原因發(fā)現(xiàn)，老年患者由于ABO血型抗原性較弱，用玻片法鑒定出現(xiàn)假陰性（本應(yīng)為B型，老年人的紅細(xì)胞應(yīng)與A型血清抗B抗體發(fā)生凝集），結(jié)果出現(xiàn)假O型（老人紅細(xì)胞與A和B血清均不凝集，出現(xiàn)紅細(xì)胞均勻散在現(xiàn)象）與O型獻(xiàn)血者交叉出現(xiàn)：次側(cè)管凝集和溶血的異型血型交叉配血現(xiàn)象），改用試管法鑒定該老年患者真正血型為B型（+），與B型獻(xiàn)血者交叉配血結(jié)果相符（即主側(cè)管和次側(cè)管紅細(xì)胞均無凝集無溶血現(xiàn)象），通過嚴(yán)格篩選了B型RH（+）的B型懸浮紅細(xì)胞3.0U與患者進(jìn)行血液交叉配合血型相符，未出現(xiàn)輸血不良反應(yīng)?；颊甙踩冗^手術(shù)關(guān)，終年94歲。

1 實(shí)驗方法和步驟

1.1操作方法

1.1.1用生理鹽水玻片凝集法鑒定 將貯存于-4℃冰箱的抗A和抗B標(biāo)準(zhǔn)血清取出放置至室溫，將以上抽取的患者紅細(xì)胞用0.9%的生理鹽水反復(fù)洗滌數(shù)次，制備成紅細(xì)胞懸液備用。分別取患者的紅細(xì)胞懸液各1滴加到載玻片上，再分別加入抗A標(biāo)準(zhǔn)血清1滴和抗B標(biāo)準(zhǔn)血清1滴，RH抗D血清1滴，10min后觀察結(jié)果。該患者被鑒定為O型RH（+）（即抗A側(cè)和抗B側(cè)紅細(xì)胞均不出現(xiàn)凝集，紅細(xì)胞呈游離散在現(xiàn)象）。

1.1.2交叉配血 取O型獻(xiàn)血者血液3.0ml，1500轉(zhuǎn)/min離心分離血清，同樣用0.9%的生理鹽水洗滌獻(xiàn)血者紅細(xì)胞制成紅細(xì)胞懸液。取試管2支，分別用玻璃蠟筆注明主側(cè)和次側(cè)。主側(cè)管加入患者的血清4滴，獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞懸液4滴，次側(cè)管加入獻(xiàn)血者的血清4滴，患者的紅細(xì)胞懸液4滴，分別輕輕搖勻，平衡后放入離心機(jī)以1500轉(zhuǎn)/min離心1～2min，取出試管觀察結(jié)果：主側(cè)管無凝集，無溶血，次側(cè)管有凝集，微溶血現(xiàn)象與同型血交叉不符，查找原因用試管法鑒定發(fā)現(xiàn)該患者血型為B型RH（+），而不是O型RH（+）。

1.2解決辦法 用已知的A型獻(xiàn)血者與患者血液用試管法鑒定血型。即取2支試管，1支試管加入患者的血清2滴，A型獻(xiàn)血者洗滌后的紅細(xì)胞懸液（含A抗原）2滴；第2支試管加入患者洗滌的懸浮紅細(xì)胞2滴，A型獻(xiàn)血者的血清（含有抗B抗體）2滴，以同樣方法離心10min后觀察結(jié)果顯示：第1管紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集，推斷與A抗原發(fā)生凝集反應(yīng)的 血清中含有抗A抗體（B型和O型人的血清中才含有抗A抗體），但O型與以上O型獻(xiàn)血者做血型交叉結(jié)果不符，故排除O型的可能；第2管紅細(xì)胞凝集，推斷與抗B抗體發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細(xì)胞上含有B抗原（B型和AB型的紅細(xì)胞上含有B抗原），取B型和AB型紅細(xì)胞懸液分別與抗B血清與抗A血清試管法鑒定，發(fā)現(xiàn)與抗B血清有少量凝集與抗A血清不凝集，故排除 AB型，RH血型均為陽性，綜上所述可以得出結(jié)論，該患者真正血型為B型。因為老年患者抗原性較弱，用玻片法沒有發(fā)現(xiàn)弱凝集，用試管法離心后發(fā)現(xiàn)弱凝集。

在10多年以前，很多基層醫(yī)院連一個專業(yè)的檢驗員都沒有，更談不上做血型亞型，RH血型鑒定，凝膠微柱法等等的檢測條件，靠的就是細(xì)心和經(jīng)驗累積。本人在基層醫(yī)院工作了20年從未發(fā)生過輸血醫(yī)療事故，也帶過不少的非專業(yè)和專業(yè)的學(xué)員，糾正過學(xué)員鑒定血型的錯誤，現(xiàn)總結(jié)一點(diǎn)經(jīng)驗與基層的同仁們共享。

1.3鑒定血型交叉配血一定要注意以下幾點(diǎn)

1.3.1紅細(xì)胞標(biāo)本問題 ①未加入抗體和血清；②實(shí)驗室溫度（37℃以下凝集力減弱）；③未識別溶血；④血清與紅細(xì)胞比例不當(dāng)；⑤離心速度與時間不夠；⑥使用失效或錯誤試劑；⑦實(shí)驗器皿不干凈；⑧一些疾病致紅細(xì)胞的抗原性太弱，應(yīng)用抗A和抗B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期的凝集反應(yīng)；⑨使用未洗滌的紅細(xì)胞標(biāo)本，其表面黏附的血漿或血清中含有針對抗A抗B試劑中染色劑或其他成分的抗體，出現(xiàn)假陽性；⑩紅細(xì)胞抗原性減弱或消失。

1.3.2血清標(biāo)本的問題 ①小的纖維凝集的紅細(xì)胞凝塊被誤認(rèn)為是血液凝集，如使用血漿標(biāo)本或未完全除去纖維蛋白的血清標(biāo)本；②血清中不正常濃度和比例的蛋白質(zhì)成分或高分子蛋白增多可引起非特異性凝集，如緡錢狀紅細(xì)胞的非特異性凝集；③血清中含抗A，抗B以外的其他紅細(xì)胞抗體；④患者接受了ABO血型不同的骨髓移植；⑤血清中抗體減弱或消失。

2 原因分析和處理

2.1重新采集標(biāo)本，以避免采集，標(biāo)記，污染等錯誤。

2.2查詢患者以往病史，輸血史，用藥史，骨髓移植史。

2.3徹底洗滌標(biāo)本或試劑紅細(xì)胞。

2.4室溫孵育30min后，離心觀察結(jié)果，以檢測弱的抗原抗體反應(yīng)。

2.5以自身紅細(xì)胞做對照，以確定自身抗體的干擾。

2.6非正常高濃度的抗A，抗B可引起前帶現(xiàn)象。

3 ABO正反定型不符及處理

3.1抗體太弱或消失 如新生兒，老年人，應(yīng)注意患者的年齡和診斷辦法：將血清稀釋，或用2.5%EDTA處理可消除。

3.2患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大分子藥物等原因，可發(fā)生類似凝集現(xiàn)象，如緡錢狀凝集，辦法將血清用生理鹽水稀釋3倍。

3.3冷自身抗體存在 所有試劑及細(xì)胞37℃孵育判定結(jié)果。

3.4自身免疫性溫型抗體 37℃反應(yīng)比室溫強(qiáng)，血清能凝集自身和其他各型紅細(xì)胞，若紅細(xì)胞上吸附這種自身抗體，在自身或其他人血清中，均可出現(xiàn)凝集，正定型被誤認(rèn)為AB型，反定型被誤認(rèn)為O型，辦法：用遞增溫度（22℃，37℃，45℃），洗滌紅細(xì)胞后再做血型鑒定。

3.5正定型注意 更換新批號抗血清或?qū)?shí)驗有懷疑時，要設(shè)陽性、陰性對照及進(jìn)行血清效價的測定 紅細(xì)胞懸液濃度過高或離心力過大，可造成假凝集，出現(xiàn)似凝集非凝集外觀，注意洗滌紅細(xì)胞，顯微鏡下仔細(xì)觀察，采取加溫措施排除由于冷凝集素引起的假凝集致血型判定錯誤。

3.6反定型要注意 不用玻片法，有的患者由于各種疾病等原因，血清中抗體較弱，凝集力不明顯，必須經(jīng)過離心使紅細(xì)胞緊密接觸以便于結(jié)果觀察。

3.7引起正反定型不一致的常見原因有 標(biāo)準(zhǔn)血清效價太低、親和力不強(qiáng)。紅細(xì)胞懸液配制過濃、過淡，抗原比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，出現(xiàn)似凝集非凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞上抗原減弱。受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗A、抗B抗體，或其效價過低。受檢者血清中蛋白紊亂或?qū)嶒炇覝囟冗^高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。細(xì)菌污染、血清中有不規(guī)則抗體，低月齡兒、老年人、免疫力低下的人群血清中的抗A、抗B效價太低甚至缺乏，出現(xiàn)正反定型不符。

4 注意事項

工作中如出現(xiàn)以上情況，必須注意以下幾點(diǎn)。

4.1工作時思想要高度集中，不與他人閑談分散注意力，弄錯標(biāo)本，加錯血清和紅細(xì)胞，導(dǎo)致血型鑒定結(jié)果錯誤，發(fā)生輸血事故。

4.2必要時應(yīng)合分析用抗人球法、酶法、聚凝胺法或延長反應(yīng)時間，改變反應(yīng)溫度等多種方法綜合分析。試劑種類盡量的齊全，以備特殊情況時用。

4.3要及時更新輸血專業(yè)知識，有較強(qiáng)的工作責(zé)任心和事業(yè)心，工作不足5年以上，臨床經(jīng)驗不足者不能獨(dú)立上崗，獨(dú)立發(fā)輸血配血報告書，必須要在檢驗科主任的帶教下進(jìn)行輸血前的各項驗血備血的檢驗操作，操作中注意每個細(xì)節(jié)的操作正確性。

4.4標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后用，否則出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象，用畢立即旋緊蓋子放回-4℃～8℃度冰箱直立保存，以免標(biāo)準(zhǔn)血清溢出交叉污染及其效價降低。注意標(biāo)準(zhǔn)A、B 血清一定不能與待鑒定的紅細(xì)胞懸液直接接觸交叉污染致血型鑒定錯誤，定期檢測標(biāo)準(zhǔn)血清效價。多次停電后的標(biāo)準(zhǔn)血清不再使用。

4.5室溫在20℃～24℃左右進(jìn)行，以免出現(xiàn)冷凝集，用空調(diào)或地暖管加溫。

4.6玻片法時間不少于10min，否則較弱凝集不出現(xiàn)，出現(xiàn)假陰性。

4.7正反定型結(jié)果一致才可以發(fā)報告。

4.8注意反定型法，年老體弱，低月齡患兒，血清中抗體水平下降或缺乏抗A或抗B抗體，引起假陰性或血型鑒定錯誤，注意RH血型是否一致。

4.9紅細(xì)胞一定要用0.9%的生理鹽水洗滌，高滲或低滲溶液都會使紅細(xì)胞破壞溶血影響血型鑒定和交叉配血結(jié)果的觀察。

4.10幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全，老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型，因為離心作用可以加速凝集反應(yīng)還可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)紅細(xì)胞凝集作用。本文介紹此例屬于此現(xiàn)象，用玻片法鑒定出現(xiàn)假陰性，特別要注意是否有細(xì)微的凝集現(xiàn)象，必要時置于顯微鏡下仔細(xì)觀察進(jìn)行反復(fù)對比確認(rèn)后方可出報告。

4.11紅細(xì)胞亞型抗原性較弱，抗A抗B效價較低時，易造成漏檢或誤定，加用O型血清（含抗A抗B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

以上是筆者在多年工作中的一點(diǎn)體會，總之輸血前的檢測尤其是ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性是非常重要的，只有準(zhǔn)確鑒定血型才是保證安全輸血最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，主編.中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編. 全國臨床檢驗操作規(guī)程[M]. 東南大學(xué)出版社，1997.

[2]熊立凡，劉成玉，主編.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：8.

編輯/哈濤