中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)中的影響因素及問(wèn)題探討

摘要：本文就對(duì)影響中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)質(zhì)量的各項(xiàng)因素進(jìn)行分析，對(duì)控制影響因素的各項(xiàng)方案進(jìn)行探究，提升控制效果。

關(guān)鍵詞：中藥；薄層色譜；分離原理；影響因素

中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)主要是通過(guò)薄層色譜上斑點(diǎn)的有無(wú)完成藥品真?zhèn)蔚呐袛?，通過(guò)斑點(diǎn)的大小及顏色完成藥品品質(zhì)的分析。中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)在操作的過(guò)程中主要將供試品溶液點(diǎn)在薄層板上，通過(guò)層析缸中的展開(kāi)劑完成藥物分離[1]。檢驗(yàn)人員根據(jù)色譜圖狀況，將供試品色譜與對(duì)照物色譜進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)薄層掃描實(shí)現(xiàn)藥品鑒別、檢查及藥品含量測(cè)定。該種操作在檢驗(yàn)的過(guò)程中具有非常高的實(shí)用價(jià)值，結(jié)果直觀(guān)性強(qiáng)，分析準(zhǔn)確性相對(duì)較高，值得進(jìn)行深入研究和應(yīng)用。

1 薄層色譜鑒別方法及原理

中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)是中藥鑒別、中藥成方制劑質(zhì)量控制的重要方式。我國(guó)通過(guò)多年研究明顯提升了對(duì)照藥材及對(duì)照技術(shù)的控制效果，各種控制操作較為簡(jiǎn)便、成本較為低廉，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。

1.1 鑒別方法 中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)實(shí)施的過(guò)程中要先將樣品溶液通過(guò)毛細(xì)管點(diǎn)于薄層板一端，然后要在密閉層析缸內(nèi)完成薄層板上的樣品組分分離操作。加入的展開(kāi)劑（或吸附劑）在薄層板上移動(dòng)，帶動(dòng)樣品中的各項(xiàng)組分逐漸擴(kuò)散，展開(kāi)劑中不同極性的溶劑，在提升樣品移動(dòng)效果的同時(shí)，對(duì)各組分進(jìn)行分離，最終完成展開(kāi)操作。

由于樣品各組分性質(zhì)不同，其展開(kāi)移動(dòng)過(guò)程中的距離也不相同，當(dāng)展開(kāi)達(dá)到一定程度時(shí)，顯示分離的組分斑點(diǎn)。操作人員可以通過(guò)顯色劑等在薄層板上顯示斑點(diǎn)位置，當(dāng)組分具有顏色時(shí)可以直接觀(guān)察，當(dāng)組分不具有顏色時(shí)需要噴顯色試劑后觀(guān)察，對(duì)斑點(diǎn)狀況進(jìn)行對(duì)比、分析。

1.2 分離原理 在上述操作過(guò)程中，由于吸附劑對(duì)不同成分的吸附效果不相同，成分在吸附后的移動(dòng)相至固定相過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生連續(xù)吸附，導(dǎo)致吸附之間相互分離，形成不同斑點(diǎn)。上述連續(xù)吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的過(guò)程中由于固定相的差異，可以形成不同薄層色譜，可以通過(guò)對(duì)同一樣品在不同固定相上的分離或不同展開(kāi)劑中展開(kāi)而得到的斑點(diǎn)狀況進(jìn)行對(duì)應(yīng)對(duì)比，提升藥品檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

2 影響中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)的因素

2.1 濕度 實(shí)驗(yàn)室的相對(duì)濕度可以造成薄層板的吸附效果受到限制，造成容量因子發(fā)生轉(zhuǎn)變。當(dāng)濕度不同時(shí)，薄層板產(chǎn)生的薄層色譜也不盡相同?？刂葡鄬?duì)濕度的方法，可對(duì)雙槽展開(kāi)缸的一槽中加入適當(dāng)濃度的硫酸與點(diǎn)樣后的薄層板一起飽和，然后再展開(kāi)（見(jiàn)表1 ）。

2.2 溫度 溫度可以造成薄層色譜鑒別檢驗(yàn)的效果受到影響，當(dāng)溫度較高時(shí)，薄層檢驗(yàn)中的Rf值較高，檢查準(zhǔn)確性降低。在檢驗(yàn)的過(guò)程中溫度可以造成有機(jī)溶劑蒸發(fā)，導(dǎo)致展缸中的各項(xiàng)蒸汽比例發(fā)生轉(zhuǎn)變，造成展開(kāi)劑濃度出現(xiàn)差異。在對(duì)溫度因素進(jìn)行控制的過(guò)程中，操作人員可以在密封可控裝置中或恒溫室等展開(kāi)試驗(yàn)，降低溫度影響。

2.3 展缸和薄層板 展缸及薄層板在使用的過(guò)程中的飽和狀況直接影響著生物堿類(lèi)成分薄層鑒別效果。在這類(lèi)檢驗(yàn)的過(guò)程中，展缸中的氨蒸汽達(dá)到飽和與否可造成檢驗(yàn)結(jié)果存在明顯差異。當(dāng)氨蒸汽達(dá)到飽和時(shí)，展缸及薄層板檢測(cè)出的色譜圖斑顯示清晰且較為圓整，各項(xiàng)斑點(diǎn)不存在嚴(yán)重邊緣效應(yīng)，當(dāng)氨蒸汽未達(dá)到飽和時(shí)，展缸及薄層板檢測(cè)出的色譜圖斑顯示不清晰，斑點(diǎn)存在嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，邊緣效應(yīng)較大。解決方案：①在對(duì)展缸及薄層板加入氨水的過(guò)程中，將薄層板控制為堿性，可提升氨蒸汽的飽和質(zhì)量；②適當(dāng)延長(zhǎng)飽和時(shí)間使氨蒸汽盡量達(dá)到理想的飽和狀態(tài)。

2.4 樣品處理 中藥成分較為復(fù)雜，藥品之間的相互干擾非常嚴(yán)重，在分離的過(guò)程中很容易受到影響。樣品處理的過(guò)程中，操作人員無(wú)法及時(shí)對(duì)藥品中的成分進(jìn)行合理分離，造成中藥薄層色譜鑒別中的各項(xiàng)內(nèi)容相互影響，導(dǎo)致斑點(diǎn)效果受到制約。除此之外，部分藥品在處理的過(guò)程中顏色不同，對(duì)背景要求不一樣也會(huì)導(dǎo)致鑒別的效果受到影響。

2.5 操作影響 操作人員是中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)的直接影響因素，當(dāng)操作方法、操作流程不規(guī)范時(shí)將直接導(dǎo)致中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)質(zhì)量大打折扣。操作者在操作的過(guò)程中沒(méi)有操作經(jīng)驗(yàn)，對(duì)中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)中的關(guān)鍵要求無(wú)法完成，直接造成薄層色譜邊緣出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，導(dǎo)致斑點(diǎn)顯示效果受到制約。

2.6 其他因素 不同廠(chǎng)家的薄層板在使用的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生不同的效果。薄層板在生產(chǎn)的過(guò)程中由于沒(méi)有形成統(tǒng)一的要求，生產(chǎn)中廠(chǎng)家使用材料、生產(chǎn)技術(shù)等不一致，最終將導(dǎo)致其內(nèi)部硅膠粒度、粘合劑狀況、硅膠性質(zhì)等出現(xiàn)明顯差異。除此之外，展開(kāi)劑使用次數(shù)也影響著中藥薄層色譜狀況。當(dāng)展開(kāi)劑過(guò)多使用時(shí)，展開(kāi)劑中各組分比例發(fā)生改變，分離效果明顯降低。

3 薄層色譜鑒別中存在的問(wèn)題

3.1 確認(rèn)時(shí)存在的問(wèn)題 在采用液質(zhì)聯(lián)用、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等方法進(jìn)行確認(rèn)時(shí)，檢測(cè)人員如果發(fā)現(xiàn)確認(rèn)的結(jié)果和檢驗(yàn)的結(jié)果不一致，就可以確定薄層色譜判定結(jié)果為不符。但是在實(shí)際的操作中，人們用儀器方法可檢出的結(jié)果的確認(rèn)，在具體報(bào)告時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。第一種認(rèn)為，即使薄層色譜沒(méi)有顯現(xiàn)出比較清晰的斑點(diǎn)，但是相關(guān)人員也可以依據(jù)數(shù)據(jù)結(jié)果判定其符合規(guī)定，另一種觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為在檢驗(yàn)時(shí)雖然有其他方法進(jìn)行驗(yàn)證，但是由于比對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)不同，這樣會(huì)造成結(jié)果之間的差異，因此不能夠?qū)⒈由V判定結(jié)果作為判定的最終結(jié)果[2]。

3.2 加倍量點(diǎn)樣問(wèn)題 在對(duì)中藥檢測(cè)時(shí)，如果遇到不符合規(guī)定的藥品就要對(duì)其進(jìn)行復(fù)撿工作，并采用加倍量點(diǎn)樣的方法。通常情況下會(huì)在做復(fù)驗(yàn)時(shí)按照供試品點(diǎn)樣標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定量的2倍進(jìn)行點(diǎn)樣，從而排除薄層板的吸附能力不同以及其他雜質(zhì)的影響。如果不對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的分析，可能就會(huì)影響到檢測(cè)的質(zhì)量[3]。供試品點(diǎn)樣的量要有多大，不同人會(huì)產(chǎn)生不同的看法，通?？梢苑譃閮煞N：一種就是嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣量，如果沒(méi)有斑點(diǎn)出現(xiàn)，則可以將其定為不符合規(guī)定。在薄層色譜鑒別影響因素中，由于環(huán)境的復(fù)雜性，往往會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的不科學(xué)。另一種觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為薄層色譜的鑒別就是定性的鑒別，它可以保證檢驗(yàn)的質(zhì)量，在中藥的檢驗(yàn)上有著比較好的應(yīng)用。但是在實(shí)際的操作中，當(dāng)增大點(diǎn)樣量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)的變形，從而出現(xiàn)薄層色譜鑒定不準(zhǔn)的問(wèn)題。

4 總結(jié)

中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)在應(yīng)用的過(guò)程中具有高度的準(zhǔn)確性，一直被業(yè)內(nèi)人士關(guān)注，已經(jīng)被應(yīng)用到多個(gè)領(lǐng)域。當(dāng)前中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)已經(jīng)由傳統(tǒng)檢驗(yàn)鑒別轉(zhuǎn)變?yōu)楦呖萍紮z驗(yàn)，將之與紅外光譜、質(zhì)譜聯(lián)用、核磁共振等結(jié)合在一起，形成了完善的鑒別檢驗(yàn)系統(tǒng)。隨著我國(guó)科技的逐漸進(jìn)步和設(shè)備的逐漸提升，中藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)必將得到進(jìn)一步發(fā)展和提升。

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編輯/蘇小梅