水溶性伊紅Y不同配置法對(duì)HE染色效果的影響

摘要：目的 分析伊紅染色液的不同配制方法與染色效果間的關(guān)系，旨在探尋最佳染色液配制方法。方法 取膽囊及闌尾石蠟包埋組織蠟塊標(biāo)本，連續(xù)切片，分為兩組，對(duì)照組采用常規(guī)染色液染色，觀察組采用改良染色液染色。比較染兩組染色效果、染色耗時(shí)、染色液使用時(shí)間等常規(guī)指標(biāo)。結(jié)果 觀察組：將濃鹽酸加入伊紅Y水溶液后，可見(jiàn)鮮紅色絮狀沉淀產(chǎn)生，其干燥物在95%乙醇中具有較好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘紅色澄明狀；且鏡下未見(jiàn)沉渣；染色效果較好，著色清晰且細(xì)膩，染色耗時(shí)較短；染色液保存3個(gè)月后仍有較好的染色效果。對(duì)照組：將冰醋酸加入伊紅Y水溶液后，溶液顏色由暗紅不透明變?yōu)榱良t透明狀，且鏡下可見(jiàn)較多沉渣；染色耗時(shí)較長(zhǎng)，切片染色效果較差，染色區(qū)分不清晰；染色液保存時(shí)間約為3個(gè)月。結(jié)論 改良配制方法具有較好的染色效果，值得實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：HE染色；伊紅；配制方法；效果

常規(guī)切片技術(shù)為病理技術(shù)中的基礎(chǔ)工作，切片質(zhì)量的高低直接反映了診斷的準(zhǔn)確性，也反映了醫(yī)院診療水平的高低。HE染色為使用最為廣泛的組織切片染色方法，其操作步驟較多，其中，染色液的配置方法和使用均為影響染色效果的因素，其可對(duì)切片染色色澤的穩(wěn)定性、對(duì)比度等產(chǎn)生較大影響，必須進(jìn)行科學(xué)的研究[1-2]。本文著重分析伊紅染色液的配制方法與染色效果間的關(guān)系，旨在探尋最佳染色液配制方法。

1 材料和方法

1.1材料及試劑 膽囊及闌尾標(biāo)本（手術(shù)室提供石蠟包埋組織蠟塊）；95%乙醇（國(guó)藥集團(tuán)試劑廠(chǎng)，分析純）；水溶性伊紅Y（化學(xué)純，上海善普化工科技有限公司）；其他試劑為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑，均為分析純。

1.2染色液配制方法 水溶性伊紅Y染色液分別采用常規(guī)法和改良法進(jìn)行配制。常規(guī)法：稱(chēng)取伊紅Y1g，置于250ml燒杯中，加入100ml蒸餾水，充分?jǐn)嚢枋谷芙夂箪o置過(guò)夜。采用定性分析濾紙過(guò)濾去除殘?jiān)?，取濾液備用，使用前加入0.1ml冰醋酸。改良法：稱(chēng)取伊紅Y1g，置于250ml燒杯中，加入100ml蒸餾水，充分?jǐn)嚢枋谷芙夂缶従彽稳霛恹}酸2mL，玻璃棒攪拌5min后靜置過(guò)夜。采用定性分析濾紙過(guò)濾，使用蒸餾水沖洗殘留物2次。殘?jiān)B同濾紙一起放入60℃烘箱干燥4h。將干燥后的殘?jiān)糜?00ml燒杯中，加入200ml95%乙醇，充分?jǐn)嚢枋谷芙?。使用前加?00ml95%乙醇稀釋。

1.3組織切片制備 取膽囊及闌尾石蠟包埋組織蠟塊標(biāo)本，連續(xù)切片，每個(gè)組織切20張，共40張，分為兩組，每組膽囊及闌尾切片各10張。染色前制片方法相同，一組采用常規(guī)染色液染色，另一組采用改良染色液染色。

1.4結(jié)果觀察 染色完成后由兩名高年資病理醫(yī)生經(jīng)顯微鏡（40倍）下觀察染色結(jié)果，以染色鮮艷、色澤分明、對(duì)比清晰、無(wú)沉渣為切片染色效果較好。比較兩組染色液染色耗時(shí)、使用時(shí)間等常規(guī)指標(biāo)。

2 結(jié)果

觀察組：將濃鹽酸加入伊紅Y水溶液后，可見(jiàn)鮮紅色絮狀沉淀產(chǎn)生，其干燥物在95%乙醇中具有較好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘紅色澄明狀；且鏡下未見(jiàn)沉渣；染色效果較好，著色清晰且細(xì)膩，染色耗時(shí)較短；染色液保存3個(gè)月后仍有較好的染色效果。對(duì)照組：將冰醋酸加入伊紅Y水溶液后，溶液顏色由暗紅不透明變?yōu)榱良t透明狀，且鏡下可見(jiàn)較多沉渣；染色耗時(shí)較長(zhǎng)，切片染色效果較差，染色區(qū)分不清晰；染色液保存時(shí)間約為3個(gè)月。

3 討論

伊紅為人工合成的醌式苯環(huán)結(jié)構(gòu)的酸性染料，其外觀為磚紅色或紫紅色的晶體狀物質(zhì)，為熒光酚酞類(lèi)衍生物，可見(jiàn)黃綠色熒光。伊紅Y為其中的一種晶體，為與蘇木精配對(duì)染色的理想染料。因其具有較好的水溶性可在水中充分離解，離解后的陰離子可與蛋白質(zhì)的陽(yáng)離子充分結(jié)合，從而對(duì)細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行染色。其染色結(jié)果為紅色或粉紅色，可與細(xì)胞核的藍(lán)色染色形成對(duì)比，具有染色清晰、便于診斷的優(yōu)點(diǎn)[3-4]。

傳統(tǒng)伊紅染色液的配制可產(chǎn)生一定的不足，如染色較淺、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色對(duì)比不清晰、染色時(shí)間較長(zhǎng)且較易褪色，染色不穩(wěn)定等不足，給病理診斷帶來(lái)了較大的困難。其原因?yàn)榧?xì)胞質(zhì)的染色結(jié)果與染色液的酸堿度密切相關(guān)，只有將染液的pH值調(diào)整到細(xì)胞質(zhì)等電點(diǎn)以下即pH<4.7時(shí)，方可使細(xì)胞質(zhì)具有較好的染色效果，且可與細(xì)胞核著色相區(qū)分[5-6]。但若染液pH過(guò)低（<3.3）時(shí)，胞核與胞質(zhì)著色也難以分離。因此有學(xué)者報(bào)道僅當(dāng)染料酸堿度pH在3.5～4.7時(shí)方可取得較好的染色效果[7]。傳統(tǒng)配制方法制得的伊紅染色液酸堿度pH很難較好的控制在3.5～4.7，不利于細(xì)胞質(zhì)的著色，明顯降低了染料的使用性能及使用效率[8-9]。

本文中，筆者經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，通過(guò)將水溶性伊紅Y水解后的殘?jiān)B同濾紙一起放入烘箱干燥，將干燥后的殘?jiān)褂?5%乙醇充分溶解，增加了伊紅的溶解度，保證了伊紅染液的穩(wěn)定性，經(jīng)與常規(guī)配制方法比較，改良配制方法具有較好的染色效果，值得實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用。

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編輯/蘇小梅