貝伐單抗治療穿透性角膜移植術(shù)后新生血管對(duì)全身的影響

摘要：目的 觀察貝伐單抗用于治療穿透性角膜移植術(shù)后新生血管，全身血液中VEGF和免疫功能含量變化。方法 對(duì)12例（12眼）穿透性角膜移植術(shù)后新生血管增生患眼，球結(jié)膜下分別注射貝伐單抗和設(shè)立空白對(duì)照組，1次/月，共2次。于注藥前1d，后1d，1月分別檢測(cè)血液中VEGF和免疫功能的含量。結(jié)果 注射貝伐單抗組角膜新生血管面積明顯減小。全身血液中VEGF和免疫功能的含量均無(wú)變化。結(jié)論 穿透性角膜移植術(shù)后球結(jié)膜下注射貝伐單抗對(duì)全身VEGF含量和免疫功能無(wú)影響。

關(guān)鍵詞：貝伐單抗；穿透性角膜移植；VEGF；免疫功能

角膜的免疫赦免使角膜移植成功率高居各器官移植成功率之首，但是角膜移植仍會(huì)發(fā)生排斥反應(yīng)，而排斥反應(yīng)最多見(jiàn)的就是角膜新生血管增生（CNV）。穿透性角膜移植術(shù)后角膜新生血管破壞角膜的正常微環(huán)境，使眼前房相關(guān)免疫偏離（ACAID）消失，免疫反應(yīng)不被赦免，眼發(fā)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)。所以，角膜移植術(shù)后的角膜排斥反應(yīng)危險(xiǎn)性隨角膜新生血管化程度而增加，減少CNV增生從調(diào)節(jié)ACAID對(duì)植片的存活意義重大。研究表明，VEGF是已知促新生血管形成最主要的生長(zhǎng)因子之一[1]。尤其在角膜瘢痕組織表達(dá)增多[2]。然而目前缺乏一種藥物針對(duì)VEGF有效控制。通過(guò)研究，逐漸認(rèn)識(shí)體液免疫同樣很重要的[3]。而體液免疫抗體水平的變化是角膜移植術(shù)后排斥反應(yīng)監(jiān)測(cè)的重要內(nèi)容，可作為術(shù)后早期治療及保護(hù)植片的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)在穿透性角膜移植術(shù)后新生血管患者球結(jié)膜下注射貝伐單抗用于觀察是否能抑制CNV的生長(zhǎng)的同時(shí)檢測(cè)血清中VEGF含量及體液免疫功能中IgG、IgA、IgM、C3和C4含量的變化，可了解該藥物用于穿透性角膜移植后新生血管的同時(shí)是否能對(duì)全身VEGF和體液免疫功能有所改變。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇我院自2006～2009年患有角膜白斑，經(jīng)藥物治療后仍影響患者視力，經(jīng)行穿透性角膜移植術(shù)后3個(gè)月，發(fā)生角膜排斥反應(yīng)且新生血管增生達(dá)Ⅲ度以上患眼對(duì)12例（12眼），其中男7例，女5例，年齡20～68歲，平均38歲?；颊呔星蚪Y(jié)膜混合充血，角膜水腫，患眼異物感，畏光，流淚等癥狀，部分患者同時(shí)合并有植片的排斥反應(yīng)出現(xiàn)。

1.2方法

1.2.1所有患者治療前均排除患有全身性疾病，肝腎功能不全等情況，了解藥物治療風(fēng)險(xiǎn)，充分知情的情況下簽有治療同意書(shū)，隨機(jī)分為兩組，每組6例，于每月球結(jié)膜下注射藥物1次，共2次。A組（對(duì)照組）：拒絕藥物治療者設(shè)為對(duì)照組；B組：貝伐單抗（Bevacizumab）2.5mg（0.1ml）球結(jié)膜下注射。注藥步驟為同一名醫(yī)師按眼科常規(guī)手術(shù)要求消毒后，愛(ài)爾卡因滴眼液表面麻醉術(shù)眼，1ml空針28號(hào)針頭抽取藥物或注射用水，分別于鼻上，鼻下，顳上，顳下四方位等量均分藥物注射。

1.2.2 ELASA法測(cè)定血清中VEGF的含量 采用ELASA法測(cè)定血清中VEGF的含量。分別于注藥前1d天，注藥后1、7、14、30、60d采集患者靜脈血液3ml，經(jīng)離心后提取血清500μl，于-80℃于貯存，采用上海依科賽生物制品有限公司人VEGF ELASA 試劑盒測(cè)定血清VEGF含量。

2.2.3檢測(cè)血液中免疫功能的含量改變 分別于注藥前1d，注藥后1d，1個(gè)月采集患者靜脈血液3ml，分別送檢測(cè)定血液中IGA，IGg，IGM，C3，C4含量。

3 結(jié)果

3.1癥狀 B組治療后患者眼部充血，畏光，流淚癥狀均有減輕，局部角膜新生血管減少，未見(jiàn)角膜炎癥反應(yīng)及分泌物增多等炎癥表現(xiàn)。

3.2 ELASA法測(cè)定血清中VEGF的含量檢測(cè)，A組與B組之間檢查結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3.3血液中免疫功能指標(biāo)IgG，IgA，IgM，C3，C4含量檢測(cè)，A組與B組之間檢查結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。B組之間檢查結(jié)果經(jīng)單因素方差分析亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

4 結(jié)論

正常角膜可以通過(guò)免疫屏障來(lái)面對(duì)外界刺激。在角膜周圍存在少量的免疫活性細(xì)胞， 而角膜基質(zhì)層中存在一定濃度的Ig，角膜中的主要的Ig是IgG，其次為IgA，兩者的比例為10：1。免疫球蛋白是角膜體液免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)。淚液中免疫球蛋白較強(qiáng)的抗體活性決定了其在免疫防御系統(tǒng)中的重要作用。但由于淚液采集和測(cè)定方法不同，正常值變異很大，故臨床通過(guò)監(jiān)測(cè)免疫功能血清含量更為普遍且具有一定意義[4]。研究中采用的藥物貝伐單抗（Bevacizumab），又稱Avastin，能通過(guò)直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體，阻止VEGF與內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合，該藥具有抑制血管通透性增加，細(xì)胞外基質(zhì)變性，血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移等作用[5]從而阻止血管滲漏和新生血管的形成 。Kemt等[6]證明Avastin對(duì)眼睛前后節(jié)都沒(méi)有毒副作用。

實(shí)驗(yàn)中，于球結(jié)膜下注射貝伐單抗后，觀察到角膜新生血管有所減退，部分角膜排斥患者排斥反應(yīng)減輕，藥物治療能明顯抑制CNV。同時(shí)經(jīng)檢測(cè)血液中VEGF和IgG，IgA，IgM，C3和C4的含量無(wú)明顯改變，考慮該藥物在減少新生血管的同時(shí)，對(duì)全身血液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平及免疫水平無(wú)明顯影響，但臨床觀察到伴隨CNV減少的同時(shí)，眼部植片的排斥反應(yīng)確有減輕，是否僅對(duì)局部的免疫反應(yīng)有影響，還需進(jìn)一步有針對(duì)性的研究，從而了解該藥物在抑制新生血管同時(shí)是否有重建眼前房相關(guān)免疫偏離（ACAID）的作用，為避免角膜移植術(shù)后免疫反應(yīng)的加重及角膜植片排斥率的增加而找到一種有效控制角膜移植術(shù)后CNV和減輕排斥反應(yīng)的藥物。

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