Dkk—1干預(yù)對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞修復(fù)的影響

摘要：目的 探討Dkk-1干預(yù)對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞修復(fù)的影響。方法 取2周齡新西蘭大耳兔60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組和DKK-1組各20只，空白對(duì)照組、模型組關(guān)節(jié)腔內(nèi)均注射生理鹽水，DKK-1組關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射純化DKK-1，1個(gè)月后取各組兔子膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，觀標(biāo)本24h后行甲苯胺藍(lán)化學(xué)染色的相關(guān)指標(biāo)變化。結(jié)果 三組軟骨大體形態(tài)按 Mankin's評(píng)分比較，有顯著性差異（P<0.01），三組HE染色病理學(xué)觀察按Mankin's評(píng)分空白對(duì)照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。結(jié)論 DKK-1干預(yù)可使兔子的軟骨細(xì)胞得到部分修復(fù)、凋亡及壞死減少，骨性關(guān)節(jié)炎的到控制并好轉(zhuǎn)，對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎有積極的治療作用。

關(guān)鍵詞：骨關(guān)節(jié)炎；軟骨細(xì)胞；修復(fù)

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種以關(guān)節(jié)軟骨降解、滑膜炎癥為特征的退行性關(guān)節(jié)疾病，尤以膝關(guān)節(jié)最易受累，一般20歲左右病情即可進(jìn)入潛伏期[1，2]，此時(shí)大多數(shù)無癥狀且不易被發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的增加病情逐漸嚴(yán)重，女性發(fā)病率大于男性，隨著生活水平的提高，骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，有文獻(xiàn)報(bào)道，滑膜的炎癥反應(yīng)參與了OA的發(fā)生發(fā)展過程，Dkk-1在滑膜炎癥和軟骨損傷過程中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞因子，本文對(duì)此進(jìn)行了研究，具體情況如下：

1資料與方法

1.1一般資料 清潔級(jí)2周齡新西蘭大耳兔60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組和DKK-1組各20只。

1.2方法 空白對(duì)照組、模型組關(guān)節(jié)腔內(nèi)均注射生理鹽水，DKK-1組關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射純化DKK-1，注射后的兔子飼養(yǎng)1個(gè)月后殺死，在無菌條件下截取膝關(guān)節(jié)，從顯微鏡下軟骨細(xì)胞的修復(fù)、凋亡、壞死等方面評(píng)估DKK-1對(duì)于兔膝關(guān)節(jié)炎的干預(yù)效果，并切取左膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，10%中性甲醛溶液固定后，石蠟包埋、切片，作HE染色光鏡觀察軟骨細(xì)胞形態(tài)。

1.3療效觀察 按Mankin's骨關(guān)節(jié)病組織分類方法對(duì)各組兔子軟骨進(jìn)行評(píng)分：①軟骨結(jié)構(gòu)光整如常：正常0 分，表面不規(guī)則裂隙1 分，裂隙深達(dá)移行層2分，裂隙深達(dá)輻射層3分；②軟骨細(xì)胞數(shù)量及排列：正常0分，數(shù)量彌漫性增多，排列稍亂層次清楚1分，出現(xiàn)大量簇集樣細(xì)胞團(tuán)，排列明顯不規(guī)則層次紊亂2分，數(shù)量明顯減少，排列嚴(yán)重紊亂3分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1三組軟骨大體形態(tài)觀察結(jié)果 空白對(duì)照組無明顯關(guān)節(jié)積液，軟骨面顏色問為藍(lán)白色，外觀光滑，沒有裂紋，模型組有大面積的關(guān)節(jié)積液，顏色為灰黃色，顏色暗沉，關(guān)節(jié)面粗糙， 有效面積的糜爛，DKK-1組部分動(dòng)物出現(xiàn)關(guān)節(jié)積液及滑膜增生，關(guān)節(jié)面略粗糙，沒有糜爛，DKK-1組與模型組按 Mankin's評(píng)分比較軟骨結(jié)構(gòu)，有顯著性差異（P<0.01）。

2.2 HE染色病理學(xué)觀察 空白對(duì)照組軟骨表面光滑，軟骨層厚薄均勻，軟骨細(xì)胞規(guī)格相同，排列整齊，HE染色均勻，無基質(zhì)失染，模型組示軟骨表層出現(xiàn)潰爛缺失，軟骨層厚度明顯變薄，軟骨細(xì)胞大量減少，排列紊亂，HE染色弱，偶有基質(zhì)失染，DKK-1組軟骨表面較規(guī)則，裂隙少，軟骨細(xì)胞排列較整齊，軟骨層厚度較模型組厚，軟骨細(xì)胞數(shù)較模型組明顯增多，HE染色弱，按Mankin's評(píng)分空白對(duì)照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。

3結(jié)論

骨關(guān)節(jié)炎是一種慢性關(guān)節(jié)病變，女性的發(fā)病率大于男性，在風(fēng)濕性疾病中，關(guān)節(jié)的病理變化主要有兩種基本形式，一種是進(jìn)行性的骨和關(guān)節(jié)的破壞而導(dǎo)致的關(guān)節(jié)失去功能，這種主要體現(xiàn)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）中[3，4]，另一種的變化跟第一種完全不同，是以新骨形成為主要特征，在最初的破壞性改變后緊接著有骨贅的生成，骨關(guān)節(jié)炎就是其中一種代表，骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病原因及機(jī)制非常復(fù)雜，但是多數(shù)研究均表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在骨關(guān)節(jié)炎病理過程中起到了中心作用，而作為該通路抑制因子的Dkk-1是骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病的關(guān)鍵因子之一，Dickkopf-1（DKK-1）是一種分泌型糖蛋白，研究表明DKK-1在抑制Wnt經(jīng)典信號(hào)傳導(dǎo)通路方面起到?jīng)Q定作用，而Wnt經(jīng)典信號(hào)通路與許多骨疾病有密切聯(lián)系，DKK-1是Glinka于1998首次在兩棲動(dòng)物非洲蟾餘胚胎細(xì)胞內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，其位于10號(hào)染色體lOqlI.2，其編碼的分泌性糖蛋白由266個(gè)氨基酸構(gòu)成，Lane等通過檢測(cè)具有影像學(xué)的髖關(guān)節(jié)炎（RHOA）的試驗(yàn)組以及同樣數(shù)量的沒有RHOA的對(duì)照組中的血清DKK-1水平，發(fā)現(xiàn)高水平的DKK-1血清水平與RHOA進(jìn)展減輕相關(guān)，如果這項(xiàng)研究被大樣本的試驗(yàn)所證實(shí)，那么DKK-1可能會(huì)成為骨關(guān)節(jié)炎預(yù)后的評(píng)判標(biāo)志之一，本文通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)三組軟骨大體形態(tài)按 Mankin's評(píng)分比較，有顯著性差異（P<0.01），三組HE染色病理學(xué)觀察按Mankin's評(píng)分空白對(duì)照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。提示DKK-1與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭泄顷P(guān)節(jié)炎的進(jìn)展兩者之間存在相關(guān)聯(lián)系，DKK-1干預(yù)可使兔子的軟骨細(xì)胞得到部分修復(fù)、凋亡及壞死減少，骨性關(guān)節(jié)炎的到控制并好轉(zhuǎn)，對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎有積極的治療作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]高寧陽，曹月龍，劉婷，等.Wnt信號(hào)通路與骨關(guān)節(jié)炎[J].中國骨傷，2010，23（4）：320-323.

[2]王新東，張前德，紀(jì)偉.痛痹方血清對(duì)體外培養(yǎng)乳兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖和MMP-3與TIMP-1的影響[J].上海中醫(yī)藥雜志，2009，40（6）：64-65.

[3]張志奇，廖成明，傅明.骨關(guān)節(jié)炎信號(hào)通路及其治療靶點(diǎn)[J].國際骨科學(xué)雜志，2009，29（5）：324-326.

[4]馬瑩瑩.wnt信號(hào)通路與RA的骨質(zhì)代謝[J].中國免疫學(xué)雜志，2010，26（12）：1143-1145.

編輯/申磊