AU5800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)降鈣素原的方法學(xué)評(píng)價(jià)

摘要：目的 在AU5800全自動(dòng)生化分析儀上用免疫透射比濁法檢測(cè)降鈣素原（PCT）進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：降鈣素原；免疫比濁法；方法學(xué)評(píng)價(jià)；免疫熒光法

降鈣素原（Procalcitonin PCT）在臨床主要應(yīng)用于感染性疾病的鑒別[1]，是診斷血行感染、菌血癥、敗血癥的一個(gè)較好指標(biāo)[2-3]。目前PCT的檢測(cè)方法主要有放射免疫法、雙抗體夾心法、膠體金法、免疫熒光法、免疫透射比濁法等。本研究選用國(guó)產(chǎn)免疫透射比濁法，具有快速、簡(jiǎn)便，且價(jià)格相對(duì)較低廉的特點(diǎn)。根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)9CLSI）和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)（ISO15189）對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的要求[4]，實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)（儀器、試劑、校準(zhǔn)品等）必需進(jìn)行性能驗(yàn)證[5]。因此，實(shí)驗(yàn)室需要對(duì)廠商聲明的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。本文對(duì)AU5800檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定降鈣素原（PCT）進(jìn)行精密度、線性范圍、參考區(qū)間等指標(biāo)的方法學(xué)評(píng)價(jià)，再與酶免疫熒光法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，觀察結(jié)果相關(guān)性，以此來(lái)評(píng)價(jià)該檢測(cè)方法在臨床上的價(jià)值。

1 資料

1.1儀器 貝克曼AU5800全自動(dòng)生化分析儀，梅里埃全自動(dòng)熒光分析儀。

1.2試劑

1.2.1安徽大千生物工程有限公司生產(chǎn)的降鈣素原測(cè)定試劑盒（免疫透射比濁法）（批號(hào)085813），標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)084113）和質(zhì)控品（批號(hào)084213）。

1.2.2梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司進(jìn)口的降鈣素原測(cè)定試劑盒（酶免疫熒光法）（批號(hào)1002326640），校準(zhǔn)品（批號(hào)1057790）和質(zhì)控品（批號(hào)1057880）。

1.3 標(biāo)本 患者標(biāo)本為2013年10～11月實(shí)驗(yàn)室接收的67例臨床送檢標(biāo)本。酶免疫熒光法隨時(shí)檢測(cè)送檢標(biāo)本，剩余血清-80℃保存用于免疫比濁法測(cè)試（一次性完成）。正常人群均為健康體檢者，年齡16～77歲，選擇血常規(guī)、CRP正常，即無(wú)急、慢性炎癥的體檢合格標(biāo)本20例。

2 方法

2.1免疫透射比濁法 樣品中的PCT與試劑中的PCT抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，從而引起透光度的減低，在一定范圍內(nèi)與樣本中的PCT的量呈線性相關(guān)。

1.2酶免疫熒光法 結(jié)合一步免疫測(cè)定夾心法和最終熒光檢測(cè)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。

2.3 精密度評(píng)價(jià)：按照CLSI EP15-A2，取2個(gè)濃度水平質(zhì)控品，5d實(shí)驗(yàn)，每天做一批，每批每個(gè)水平3次重復(fù)測(cè)定，計(jì)算批內(nèi)精密度和批間精密度的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

2.4 線性評(píng)價(jià)

2.5參考區(qū)間評(píng)價(jià)

2.6相關(guān)性評(píng)價(jià) 通過(guò)67例不同病例分別用酶免疫熒光法和免疫透射比濁法測(cè)定，比較兩者的相關(guān)性。

2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件和Microsoft Excel 2000軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 PCT精密度結(jié)果 精密度評(píng)價(jià)結(jié)果符合廠家聲明的批內(nèi)精密度CV≤8.0%、批間精密度CV≤15.0%。該檢測(cè)系統(tǒng)的批內(nèi)精密度和批間精密度均滿足檢測(cè)要求（見(jiàn)表1）。

3.2 線性結(jié)果

3.3參考區(qū)間的驗(yàn)證

3.4相關(guān)性實(shí)驗(yàn)

圖2 免疫比濁法和免疫熒光法檢測(cè)PCT結(jié)果比對(duì)

3 討論

根據(jù)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)（ISO15189）對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的要求，實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)必需進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)試劑驗(yàn)證包括：精密度、線性、準(zhǔn)確度和參考范圍等[6]。

精密度評(píng)價(jià)按照CLSI EP15-A2文件進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在AU5800全自動(dòng)生化分析儀上PCT測(cè)定的精密度達(dá)到了廠家的檢測(cè)聲明，批內(nèi)和批間精密度分別小于8%和15%。線性評(píng)價(jià)即分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)根據(jù)EP6-A文件，采用簡(jiǎn)便的平均斜率法。在AU5800全自動(dòng)生化分析儀上PCT的濃度在0-58.8ng/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，由于PCT達(dá)到80ng/mL的血清標(biāo)本難以獲得，最高檢測(cè)限58.8ng/mL偏低于廠家的最高測(cè)定值，有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。參考區(qū)間的驗(yàn)證參考NCCLSC28-A2文件，選擇20份體檢合格的健康人血清標(biāo)本全部通過(guò)驗(yàn)證。與法國(guó)梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司進(jìn)口的降鈣素原測(cè)定試劑盒（酶免疫熒光法）進(jìn)行相關(guān)性實(shí)驗(yàn)，表明PCT免疫比濁法結(jié)果同樣可靠（n=67，R2=0.9607）。

目前，檢測(cè)PCT的方法很多[7]。傳統(tǒng)的放射免疫法敏感性較高，但檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，且有放射性元素污染，使用受限；膠體金法為半定量法，不依賴(lài)儀器，操作簡(jiǎn)便快速，但敏感性低，只能作為臨床篩查；免疫發(fā)光法[8]具有敏感度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，但是成本昂貴，不利于臨床推廣。免疫比濁法簡(jiǎn)便、快捷，適用于波長(zhǎng)包括600nm的各種生化分析儀，可滿足臨床急診及批量檢測(cè)的需要；而且成本較低，可以大大減低患者的檢測(cè)費(fèi)用。

綜上所述，免疫比濁法檢測(cè)PCT的各項(xiàng)性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)，均能滿足臨床檢測(cè)的要求，具有良好的發(fā)展前景。

參考文獻(xiàn)：

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[4]魏昊，叢玉隆.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與認(rèn)可指南[M].北京；中國(guó)計(jì)量出版社，2004：59-75.

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[6]楊有業(yè)，張秀明.臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.

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[8]孫麗萍，伏瑾，胡鳳華，等.免疫色譜法與發(fā)光免疫分析法測(cè)定血清降鈣素原[J].中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2007.7（2）108-110.編輯/蘇小梅