腦積水模型大鼠學(xué)習(xí)記憶的研究

摘要：目的 建立腦積水SD大鼠模型，通過避暗試驗(yàn)觀察研究腦積水模型大鼠不同時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能。方法 健康雄性SD大40只，隨機(jī)分為腦積水模型組，腦積水假手術(shù)組，正常對照組，腦積水模型組分21 d，42 d，60 d ，共3個(gè)亞組，對照組和模型組、假手術(shù)組一樣喂食及同樣環(huán)境。觀察大鼠行為學(xué)改變，采用避暗試驗(yàn)方法記錄各組大鼠實(shí)驗(yàn)潛伏期（LT）及來回穿梭次數(shù)（EN），研究其學(xué)習(xí)及空間記憶功能。結(jié)果 腦積水模型大鼠模型組與對照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，組間對比，模型組大鼠21 d、42 d、60 d組認(rèn)知功能逐漸減弱，學(xué)習(xí)記憶有明顯減弱（P<0.05）。結(jié)論 腦積水模型大鼠成功建立，通過行為學(xué)觀察證明腦積水疾病在生理上影響大鼠的學(xué)習(xí)及記憶等認(rèn)知功能。

關(guān)鍵詞：腦積水；大鼠；學(xué)習(xí)記憶

腦積水（Hydrocephalus）是由多種病因共同作用引起的一種綜合病理結(jié)果，以腦脊液循環(huán)通路多種原因梗阻以及或吸收不良較為多見，而分泌過多者較為罕見[1]；大多數(shù)腦積水患者不同程度上認(rèn)知功能明顯受限，研究分析腦積水認(rèn)知功能對患者病情把握及預(yù)后評估有重要作用及意義，經(jīng)典動(dòng)物模型可以模擬人體機(jī)能方面的變化反映。本研究在與建立腦積水大鼠模型，檢測大鼠各個(gè)時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能，為臨床提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1腦積水大鼠模型的制作

1.1.1選取純種品系 6～8 w齡雄性青狀年SD大鼠40只，體重g均購自河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物飼養(yǎng)培育中心。所精選大鼠均采用單籠飼養(yǎng)，避免強(qiáng)烈外界刺激，正常生理作息。所選動(dòng)物均適應(yīng)1 w后進(jìn)行篩選，喂食需保持定時(shí)、定量原則，自由飲水。積極培養(yǎng)本批大鼠統(tǒng)一生活習(xí)性及覓食規(guī)律。隨機(jī)分為腦積水模型組、腦積水模型假手術(shù)組（同腦積水手術(shù)方式，只注入生理鹽水，不注入白陶土懸液，排除手術(shù)對大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響）以及空白對照組，，蛛網(wǎng)膜下腔出血組n=8只。假手術(shù)組每次按照模型組一樣條件，唯一不同就是不注入白陶土，注入同用量生理鹽水即可，空白對照組，在每次刺激實(shí)驗(yàn)組的大鼠時(shí)以相同的方法刺激抓取1～2次即可，以排除人為刺激影響。

1.2.2模型制作 實(shí)驗(yàn)組以及假手術(shù)參照DEL bigio的方法完成腦積水實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型[2]，將大鼠頭部固定于腦立體定向儀上，正中切口，呈橢圓形（長短軸比為：2 cm×3 cm）依次剪除皮膚、皮下結(jié)締組織和鈍性分離骨膜，用無水乙醇露骨表面脫脂，顯露顱骨及前后囟點(diǎn)位置，用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)蚊式鉗創(chuàng)面夾閉止血，露骨表面滲血可使用骨蠟涂抹，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)專用手術(shù)顯微鏡下沿后頸部正中于頭頸交界處作一長約4～5 mm的縱切口 依次切開 先用4.5號注射針頭穿刺枕大池 放腦脊液0.06～0.1 mL后再注入25%白陶土混懸液0.1 mL注射時(shí)間不少于 10 min注射完畢后留針5 min，撥針后用醫(yī)用耳腦膠封閉針眼，縫合切口，并維持頭低位10～20 min，假手術(shù)對照組用同樣方法向枕大池注入生理鹽水0.1 mL術(shù)后連續(xù)應(yīng)用青霉素（2萬U/Kg）腹腔注射抗炎3 d，清潔傷口2次/d直至傷口愈合，參考文獻(xiàn)20 d是行動(dòng)物MRI檢測，測量腦室腦組織空間比值，確定模型建立成功。

1.2避暗試驗(yàn)檢測 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M及對照組大鼠依次采用避暗試驗(yàn)箱進(jìn)行學(xué)習(xí)及記憶能力測試[3]。利用大鼠的喜暗惡明的動(dòng)物特性，將大鼠背對暗箱的洞口放入明室，打開實(shí)驗(yàn)上方的視屏系統(tǒng)，記錄路線及軌跡趨勢，進(jìn)行學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)，很快自由進(jìn)入暗箱，此時(shí)即為動(dòng)物潛伏期，并記錄，同時(shí)接通暗箱電源，受到電擊后動(dòng)物立即會逃出暗箱，時(shí)間記錄動(dòng)物從眀箱第1次進(jìn)入暗箱的時(shí)間即為本次實(shí)驗(yàn)大鼠LT，大鼠受電擊后會逃避性地跑出暗室，然后記錄10 min大鼠進(jìn)入暗室的次數(shù)即EN，并記錄和觀察大鼠在明暗是活動(dòng)時(shí)間和活動(dòng)路線距離，共同作為記憶成績表現(xiàn)為LT和EN。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及分析 收集計(jì)數(shù)資料及計(jì)量資料均采用SPSS 15.5統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析劑量計(jì)計(jì)數(shù)資料LT及EN，分析方法使用用單因素因素方差分析，模型組間比較用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1模型制作

3討論

腦積水綜合癥由Adams和Hakim于1965年提出，是一種以步態(tài)不穩(wěn)、尿失禁和認(rèn)知功能缺損為主要特征性改變，而認(rèn)知功能損害逐漸被重視起來，及時(shí)且準(zhǔn)確的診斷是預(yù)后較好療效的關(guān)鍵[4]。經(jīng)過數(shù)據(jù)精確測算，腦積水模型建立成功，腦室與腦實(shí)質(zhì)比例分?jǐn)?shù)在腦積水診斷范圍之內(nèi)，腦積水模型大鼠模型組與對照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，學(xué)習(xí)記憶有明顯減弱，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均較正常組差，比值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；認(rèn)知功能損害為主要表現(xiàn)，隨著腦積水的時(shí)間延長，腦積水引起腦功能損害越明顯，特別是認(rèn)知功能損害更加明顯，且有關(guān)數(shù)據(jù)表明，部分認(rèn)知功能損害是由于顱內(nèi)壓力增大[5]，導(dǎo)致腦功能異常引起，屬于可逆性損害，隨著時(shí)間遷延，導(dǎo)致部分損害為不可逆性損害，為永久性腦功能損害，表現(xiàn)在認(rèn)知功能這一塊為更加明顯突出，本研究中通過反映執(zhí)行功能的學(xué)習(xí)記憶特別是空間學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能測驗(yàn)等驗(yàn)證闡述的觀點(diǎn)，與國外報(bào)道關(guān)于腦積水認(rèn)知的研究一致[6]。有研究顯示腦積水患者腦脊液循環(huán)障礙，腦脊液生成和轉(zhuǎn)運(yùn)減少，淀粉樣蛋白清除能力下降，部分微觀分子如P38的改變，最終使淀粉樣蛋白沉積、P38的減少，這也可能是導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的重要原因[7]。

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編輯/張燕