流感病毒Real—time RT—PCR核酸檢測及流行情況分析

摘要：目的 分析鄂爾多斯市2012年流感檢測結(jié)果，

關(guān)鍵詞：流感監(jiān)測；病毒核酸；Real-time RT-PCR

Detection of Influenza Viruses Using Real-time RT-PCR and Analysis of Influenza Epidemic Situation

JI Lin-li

（Center For Disease Control and Prevention of Erdos， Erdos 017000，Inner Mongolia，China）

Abstract：Objective To analyze the results of detection on influenza virus in Ordos in 2012， in order to provide scientific basis for prevention and control of flu in this area. Methods Influenza throat swab specimens were collected from sentinel hospital for virus nucleic acid detection by Real-time RT-PCR. Results： A total of 281 throat swab specimens were detected， 35 were positive for influenza virus nucleic acid， at a percentage of 12.46%. In which there was 16 cases of B type flu， at a percentage of 5.69%， 15 cases of seasonal H3， at a percentage of 5.34%，2 cases of new H1N1， at a percentage of 0.71%， 2 positive of A type undentified，at a percentage of 0.71%. The detection positive rate were 11.36%、27.50%、37.50% in January ，F(xiàn)ebruary and March， were 5.00% in October and December，no positive sample was detected in other month. Conclusion The survey showed that the major epidemic seasons were winter and spring，the major epidemic strains of the flu were B type and H3 type.

Key words：Surveillance of influenza ； Virus nucleic acid； Real-time RT-PCR

流行性感冒簡稱流感，是由流感病毒引起的急性上呼吸道傳染病。流感潛伏期短，傳播迅速，且抗原易變異，人群對變異株普遍易感，因此控制難度大[1]。目前，對人類危害較重的流感病毒株是A型和B型，其中A型流感病毒抗原變異率高，容易造成世界范圍內(nèi)大流行[2]。2009年，甲型H1N1流感就是由于流感病毒變異形成的一種與豬流感病毒高度同源的新型變異株引起的流感大流行[3]。通過流行病學(xué)和病原學(xué)監(jiān)測，可以幫助做好流感流行趨勢和優(yōu)勢毒株的預(yù)測，及早采取相應(yīng)措施，對防止流感流行具有重要意義[4]。鄂爾多斯市疾病預(yù)防控制中心流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室2012年全年共對281份流感病例咽拭子標本進行了病毒核酸的檢測，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標本來源 哨點醫(yī)院（鄂爾多斯市中心醫(yī)院）按照《全國流感監(jiān)測方案（2010版）》要求采集流感樣病例咽拭子標本。流感樣病例指發(fā)熱（體溫≥38℃），伴有咳嗽或咽疼癥狀之一，同時缺乏其他的實驗室診斷依據(jù)[5]。

1.1.2主要試劑和儀器 流感病毒RNA提取試劑盒（QIAamp viral RNA Mini Kit ）為德國QIAGEN公司產(chǎn)品、Real-time RT-PCR擴增試劑盒（AM1005）為美國 ABI公司產(chǎn)品、檢測引物由上海生工合成；主要檢測儀器有ABI Step-one plus型熒光擴增儀、QL-866型震蕩器，等。

1.2方法

1.2.1核酸提取 按照QIAGENR Neasy Mini kit 操作說明進行。

1.2.2 Real-time RT-PCR檢測 Real-time RT-PCR反應(yīng)體系配置按AgPath-IDTM One-Step RT-PCR Kit說明進行，反應(yīng)程序參照《甲型H1N1流感監(jiān)測方案（第二版）》[5]。

1.2.3結(jié)果判定 在陰陽對照成立下，CT值≤37且有典型的S型曲線報告為檢測結(jié)果陽性。

2結(jié)果

2.1流感病毒Real-time RT-PCR檢測結(jié)果

2.2流感病毒檢測情況及陽性檢出時間分布 2012年1～3月，陽性檢出率均在10%以上，1月份檢測數(shù)44例，陽性數(shù)5例陽性率11.36%，其中乙型4例、季節(jié)性A3型1例；2月份檢測數(shù)40例，陽性數(shù)11例，陽性率27.50%，其中乙型7例、季節(jié)性H3型3例，3月份檢測流感樣品40例，陽性數(shù)14例，陽性率35.00%，其中乙型3例、季節(jié)性H3型9例， 4～9月未檢出流感陽性樣品，10月和12月陽性率均為5%，10月檢出2例乙型流感陽性樣品，12月各檢出新甲型H1N1型型和季節(jié)性H3型各1例。月檢出情況見表1。

3討論

實時熒光RT-PCR技術(shù)的應(yīng)用對提高流感檢測的靈敏度、快速準確地處置流感疫情具有重大意義，在2009年防控甲型H1N1全球大流行中發(fā)揮了重要作用。實時熒光RT-PCR是在常規(guī)RT-PCR方法的基礎(chǔ)上進行改良的方法，該法采用特異性標記的熒光探針，利用熒光信號的積累實時監(jiān)測整個PCR進程，使每個循環(huán)變得\"可見\"，通過擴增曲線和CT值來判定結(jié)果。由于省去了電泳、凝膠成像等步驟，使整個檢測過程較RT-PCR縮短了2～3h。同時，實時熒光RT-PCR實現(xiàn)了PCR的密閉操作，能有效防止PCR產(chǎn)物的污染，提高了檢測結(jié)果的可靠性，而且克服了常規(guī)RT-PCR易污染以及強致癌物溴化乙啶對操作人員危害的缺點，在病毒檢驗中具有廣泛的應(yīng)用價值[6，7]。

流感病毒檢測結(jié)果表明：鄂爾多斯市流感主要集中在冬春季。2012年1月～3月以季節(jié)性H3型和乙型為主要流行株，均占流感流行株的45.00%（14/31）。3月份陽性率最高，達到37.50%，其次為2月份，陽性率為27.50%，說明在春季出現(xiàn)了一個流感流行的小高峰。 4～9月沒有流感流行，10月和12月又分別檢出2列乙型和1列H3型，呈散發(fā)流行?！度珖鞲斜O(jiān)測方案（2010年版）》[5]中規(guī)定，北方地區(qū)流感實行全年監(jiān)測，但以冬春季為主。此監(jiān)測結(jié)果更進一步說明了監(jiān)測方案的科學(xué)性，且與北京市西城區(qū)李達[8]等的研究結(jié)果相一致。據(jù)報道的我國南方地區(qū)流感監(jiān)測結(jié)果顯示，南方各省在夏季呈現(xiàn)季節(jié)性高峰，部分地區(qū)在冬季出現(xiàn)一較小的峰值[9]。鄂爾多斯市此次流感監(jiān)測結(jié)果與南方地區(qū)的流感流行特征有所區(qū)別，呈現(xiàn)典型的北方地區(qū)的流感流行特征。提示北方地區(qū)冬春季要加強流感監(jiān)測，做好流感防控工作。

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編輯/申磊