氣相色譜-負化學源質(zhì)譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)品及食用油中氟樂靈的殘留量

王 莉， 夏廣輝， 沈偉健， 吳 斌， 張 睿， 陸慧媛， 沈崇鈺， 趙增運

（1.江蘇省泰州市姜堰區(qū)疾病預(yù)防控制中心，江蘇 泰州225500；2.江蘇出入境檢驗檢疫局食品實驗室，江蘇 南京210001；3.中國藥科大學生物化學教研室，江蘇 南京210000）

氟樂靈作為一種廣泛施用在農(nóng)田里的除草劑，由于對魚類的毒害較大，近年來對水產(chǎn)養(yǎng)殖造成的污染也因此越來越受到關(guān)注。2010年日本多次檢出我國出口的鰻魚、梭子蟹等水產(chǎn)品中氟樂靈農(nóng)藥殘留量超標（日本對水產(chǎn)品中氟樂靈殘留量的限量是0.001 mg／kg）。由此日本厚生勞動省于2010年5月26日發(fā)布《食安輸發(fā)0526第1號通知》，要求對中國產(chǎn)海鰻及其加工品中的氟樂靈實施命令檢查。又于2010年6月30日發(fā)布《食安輸發(fā)0630第2號通知》，要求加強對中國產(chǎn)三疣梭子蟹中氟樂靈的監(jiān)控檢查。因此建立準確、可靠、靈敏的水產(chǎn)品中氟樂靈殘留量檢測方法具有重要意義。

目前國內(nèi)外文獻中對食品中氟樂靈殘留量的檢測對象主要集中于蔬菜水果類、糧谷類等植物源性食品［1-4］，較少涉及水產(chǎn)品［5］和食用油。涉及的檢測 方 法 主 要 有 氣 相 色 譜 法［3，6］、液 相 色 譜 法［4，7］、氣相 色 譜-質(zhì) 譜 聯(lián) 用 法［1，2，5］和 液 相 色 譜-質(zhì) 譜 聯(lián) 用法［8］。由于食用油和水產(chǎn)品尤其是梭子蟹和烤鰻等基質(zhì)成分非常復(fù)雜，影響分析檢測的因素較多，因此氣相色譜法和液相色譜法就容易出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，極易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，需要進一步確證。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，一方面儀器昂貴，運行成本高，另一方面靈敏度不易達到0.001 mg／kg這個限量要求，不易推廣。而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀目前已經(jīng)成為農(nóng)殘檢測實驗室普遍配置的設(shè)備，相關(guān)檢測方法容易推廣；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀所使用的電離源技術(shù)主要有電子轟擊電離（EI）和化學電離（CI）兩種，目前分析氟樂靈殘留時絕大多數(shù)文獻都是采用EI 技術(shù)［1，2，5］，極少使用CI技術(shù)［9］，但是運用EI技術(shù)分析水產(chǎn)品和食用油這類復(fù)雜樣品時，也同樣極易出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，對前處理中的凈化步驟要求較高。CI技術(shù)根據(jù)極性的不同可以分為負化學電離技術(shù)（NCI）和正化學電離技術(shù)（PCI）兩種，其中NCI技術(shù)，一方面柱流失和絕大多數(shù)基質(zhì)成分沒有響應(yīng)，另一方面對于含有電負性元素或基團的化合物有很好的響應(yīng)［10-12］，且隨著電負性越強，響應(yīng)越高，而氟樂靈分子因為含有3個氟原子和2個硝基基團，分子本身具有極強的電負性，所以選用NCI技術(shù)分析氟樂靈會得到很好的靈敏度和選擇性。

本文使用QuEChERS前處理技術(shù)，氣相色譜-負化學離子源質(zhì)譜檢測技術(shù)同位素內(nèi)標法測定了水產(chǎn)品和橄欖油及豬油等食用油中氟樂靈的殘留量。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

分析純乙腈（德國Merck 公司），無水硫酸鎂（分析純，南京化學試劑有限公司），色譜純丙酮（德國Merck公司）。水為去離子水。PestiCard石墨化炭黑填料（120～400目，賽分科技有限公司），乙二胺-N-丙基甲硅烷（PSA）填料（40～60目，北京艾杰爾科技有限責任公司），C18-H（碳載量17%）填料（40～60目，北京艾杰爾科技有限責任公司）。標準物質(zhì)：氟樂靈（trifluralin），D14-氟樂靈（D14-trifluralin）等均購自德國Dr.Ehrenstorfer公司（4 ℃冷藏保存），純度均大于或等于97%。

Agilent 7890A-5973C 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配備化學離子源（美國安捷倫公司）；KH-500B 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；BuCHIR-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）。

1.2 標準儲備液和工作液的配制

標準儲備液的配制：分別準確稱取氟樂靈和D14-氟樂靈10.0 mg（精確到0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度配制成質(zhì)量濃度均為1.00 g／L的標準儲備液（4 ℃冷藏保存），有效期均為6個月。

標準工作液的配制：取1 mL 氟樂靈標準儲備液于25 mL容量瓶中，并用丙酮稀釋至刻度，配制成40 mg／L工作儲備液，由此儲備液通過逐級稀釋得到4 000、400、40、20、10、5、2和1μg／L的系列標準工作液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

準確移取1 mL1.00 g／L D14-氟樂靈至100 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至10 mg／L，并由此配制成100μg／L的內(nèi)標溶液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取

準確稱取10 g（精確至0.01 g）均勻試樣于50 mL的聚四氟乙烯離心管中，加入0.1 mL 10μg／L的同位素內(nèi)標溶液，先后加入10 mL乙腈溶液、6 g無水硫 酸 鎂，超 聲10 min，以3 000 r／min 離 心5 min，于4 ℃冷藏1 h，取出后取2 mL 上清液于10 mL玻璃試管，待凈化。

1.3.2 凈化

在待凈化的樣品溶液中加入150 mg PSA 填料、100 mg石墨化炭黑填料和100 mg C18-H 填料，渦旋1 min，過0.45μm 有機相濾膜后供儀器測定和確證。

1.4 氣相色譜-質(zhì)譜參數(shù)

1.4.1 氣相色譜

DB-17 ms石英彈性毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；毛細管柱升溫程序：初始溫度為60 ℃，以30 ℃／min的升溫速率升至300 ℃（保持2.00 min）；進樣口溫度：300 ℃；接口溫度：320 ℃；載 氣：氦 氣（≥99.999%）；流 速：1.0 mL／min；進樣量：1μL；進樣方式：不分流進樣，1.5 min后開閥。

1.4.2 質(zhì)譜

反應(yīng)氣：高純甲烷（純度≥99.99%）；離子源溫度：150 ℃；四極桿溫度：150 ℃；電離能量：216 eV；溶劑延遲時間：4 min；數(shù)據(jù)采集方式：SIM 方式；選擇監(jiān)測離子：氟樂靈定量離子m／z 335，定性離子m／z 305、336；D14-氟樂靈定量離子m／z 349，定性離子m／z 319、350。

2 結(jié)果與討論

2.1 分散型固相萃取技術(shù)

在QuEChERS［8，12-16］方法中，無水MgSO4能較充分地吸除水產(chǎn)品基質(zhì)組織中的水分，有利于減輕后續(xù)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和上機進樣前的除水壓力；PSA填料主要用于去除水產(chǎn)品和食用油中的極性干擾物，如有機酸；石墨化炭黑粉末主要用于去除基質(zhì)中的色素和甾醇；C18主要用于去除水產(chǎn)品和油脂中的脂肪酸和油脂。分散型固相萃取凈化技術(shù)的運用，可以簡化操作，有效地縮短前處理時間，減少有機溶劑的使用量。另外，提取過程中將樣品溶液放置于冰箱中4 ℃冷藏1 h，可以減少油脂的抽提量，有利于減輕后續(xù)的凈化壓力。

2.2 線性范圍和定量限

將1.2節(jié)配制的1～40μg／L標準工作溶液在所確定的儀器條件下進樣測定，以氟樂靈定量離子的峰面積與內(nèi)標定量離子的峰面積之比（Y）對其質(zhì)量濃度（X，mg／L）作標準曲線，得到線性方程為Y＝1.383 9 X-0.265 9，其相關(guān)系數(shù)為0.996 8，這說明在1～40μg／L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。圖1a是質(zhì)量濃度為1μg／L 的氟樂靈及其同位素內(nèi)標混合標準溶液的總離子流圖。

結(jié)合陰性梭子蟹基質(zhì)空白和添加水平為1 μg／kg的實際樣品的總離子流圖（如圖1b和圖1c），按信噪比（S／N）＝10 計算方法的定量限為0.02 μg／kg，該結(jié)果優(yōu)于文獻［1，2，5］報道的運用電子轟擊離子源的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的方法。

2.3 方法的準確度和精密度

在已知陰性的鰻魚、烤鰻、梭子蟹、小龍蝦、豬油和橄欖油樣品中分別加入100、200、300μL 質(zhì)量濃度為100μg／L的混合標準溶液（添加水平分別相當于1.0、2.0、3.0μg／kg），按照1.3節(jié)中的提取和凈化步驟，對每個添加水平作7個平行實驗，計算氟樂靈的平均回收率和相對標準偏差（見表1），以分別考察方法的準確度和精密度。

圖1 （a）氟樂靈及其同位素內(nèi)標混合標準溶液（1μg／L）、（b）陰性梭子蟹基質(zhì)空白（加入同位素內(nèi)標）和（c）陰性梭子蟹加標樣品（1μg／kg）的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of（a）mixed standard solution （1 μg／L），and （b）matrix blank of portunid，and （c）portunid spiked with trifluralin（1μg／kg）

從表1中數(shù)據(jù)可以看出，在3個添加水平下的平均回收率在80%～100%范圍內(nèi)，RSD≤10.3%，這說明方法的準確度和精密度均較好，符合食品中農(nóng)藥殘留分析方法的要求。

表1 不同基質(zhì)中3個添加水平下氟樂靈的回收率及其相對標準偏差（n＝7）Table 1 Recoveries（AR）and their relative standard deviations（RSDs）of trifluralin at three spiked levels in different matrixes（n＝7）

鰻魚、烤鰻、梭子蟹、小龍蝦、豬油和橄欖油等食品基質(zhì)成分復(fù)雜，而且均富含脂類物質(zhì)，在日常檢測工作中都屬于“問題樣品”類別，所以應(yīng)用常規(guī)的氣相色譜技術(shù)和電子轟擊電離氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析檢測時極易出現(xiàn)干擾現(xiàn)象。

應(yīng)用本方法檢測得到的空白試樣如梭子蟹空白試樣及其加標回收試驗的總離子流譜圖如圖1b和圖1c所示，經(jīng)過簡單的QuEChERS凈化，運用高選擇性的NCI技術(shù)且在SIM 模式下進行分析，得到的基質(zhì)空白譜圖的雜峰很少，且氟樂靈及其同位素內(nèi)標出峰處均沒有出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，可見本方法抗干擾能力強，選擇性好，適用性廣泛。

3 結(jié)論

本文建立了內(nèi)標法定量、QuEChERS-GC-MS／NCI測定水產(chǎn)品和橄欖油及豬油等食用油等問題基質(zhì)中氟樂靈農(nóng)藥殘留量的檢測方法。該法線性范圍較寬，靈敏度、準確度和精確度均較高，抗干擾能力強，能夠滿足國內(nèi)外對水產(chǎn)品和食用油中氟樂靈農(nóng)藥殘留檢測的要求。

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