UPLC—MS/MS法測(cè)定四種果蔬中螺蟲乙酯殘留量

施 雅 張小剛 王 霞 何亞斌 鄭小平

（上海德諾產(chǎn)品檢測(cè)有限公司，上海 200436）

螺蟲乙酯是拜耳公司開發(fā)的新穎殺蟲殺螨劑，屬季酮酸類化合物［1－3］，它與該公司的殺蟲殺螨劑螺螨酯和螺甲螨酯屬同類物質(zhì)。螺蟲乙酯的作用機(jī)理與其他的殺蟲劑不同，它是通過干擾昆蟲的脂肪生物合成導(dǎo)致幼蟲死亡，降低成蟲的繁殖能力。螺蟲乙酯為低毒性殺蟲劑，在土壤中易降解，可有效防治木虱、粉虱、介殼蟲、棉盲蝽等害蟲［4，5］，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 螺蟲乙酯結(jié)構(gòu)式Figure 1 Chemical structure of spirotetramat

雖然螺蟲乙酯屬于低毒性殺蟲劑，但是從環(huán)境安全性評(píng)價(jià)來說，螺蟲乙酯難揮發(fā)、難光解，在土壤中可以被降解，但是其降解產(chǎn)物在土壤中有一定的移動(dòng)性，很容易交叉污染。目前，國(guó)外對(duì)于防止螺蟲乙酯危害也制定了限量，美國(guó)環(huán)保署發(fā)布對(duì)農(nóng)藥螺蟲乙酯限量為0.20～9.00mg/kg，加拿大衛(wèi)生部發(fā)布對(duì)農(nóng)藥螺蟲乙酯限量為0.08～9.00mg/kg，歐盟的限量為0.20～15.00mg/kg。目前，中國(guó)對(duì)于螺蟲乙酯還沒有提出限量要求，國(guó)內(nèi)外測(cè)定螺蟲乙酯的方法也沒有形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法因其具有高速、高效、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)中［6－11］。本試驗(yàn)采用QuECHERS前處理方法，利用超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定4種果蔬中螺蟲乙酯殘留量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

乙腈：色譜純，德國(guó)Merck公司；

甲酸、MgSO4：分析純，美國(guó)Sigma公司；

C18粉、Cleanert PestiCarb：天津博納艾杰爾科技有限公司；

螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度＞98.5%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；

試驗(yàn)用水：均為去離子水；

標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制：準(zhǔn)確稱取螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品10.00mg，加入乙腈溶解并定容至25mL，配制成螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（－20℃保存）；

標(biāo)準(zhǔn)中間溶配制：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋成1.0μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液（－4℃保存）；

標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：吸取適量中間液，用空白樣品提取液稀釋到所需的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.1.2 儀器設(shè)備

超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀：Waters XEVO TQ型，ESI源，美國(guó)沃特世公司；

高速均質(zhì)機(jī)：T18basic型，德國(guó)IKA公司；

高速冷凍離心機(jī)：HeraeusMultifuge X1R型，美國(guó)熱電公司；

渦旋振蕩器：Talboys型，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

氮吹儀：DSY-VI型，北京東方精華苑科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理 稱取（10±0.05）g樣品，置于50mL離心管中，加入2%甲酸乙腈溶液20mL，均質(zhì)30s，加入5 mL飽和NaCl溶液，渦旋震蕩混勻1min，8 000r/min離心5 min。

取上述上清液2mL于15mL離心管中，加入100mg石墨化碳，100mg C18，200mg MgSO4粉末，渦旋混勻1 min，2 000r/min離心3min，取上清液過0.22μm有機(jī)相濾膜至進(jìn)樣瓶中，試液供UPLC—MS/MS測(cè)定。

1.2.2 超高效液相色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C18（2.1mm×50mm，1.7μm 粒徑）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（V/V）＋ 乙腈（梯度洗脫見表 1）；流速：3 00μL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5.0μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子模式；檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)；離子源溫度：150℃；毛細(xì)管電壓：2.0kV；霧化溫度：400℃；霧化氣流速：800L/h；定性、定量離子對(duì)及對(duì)應(yīng)的錐孔電壓和碰撞能量見表2。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution table of the mobile phase

表2 螺蟲乙酯的質(zhì)譜參數(shù)Table 2 The MS parameters of spirotetramat

2 結(jié)果討論

2.1 儀器分析條件的選擇

本試驗(yàn)采用乙腈—水溶液（0.1% 甲酸）作為流動(dòng)相，流動(dòng)相中加入0.1%甲酸，增加了目標(biāo)化合物在噴霧前的離子化程度，提高了檢測(cè)的靈敏度，離子流圖見圖2。本試驗(yàn)采用C18色譜柱，利用其對(duì)極性化合物強(qiáng)保留的特點(diǎn)，在本試驗(yàn)采用的流動(dòng)相、色譜柱和洗脫比例條件下，螺蟲乙酯能夠與基質(zhì)中的雜質(zhì)分離，實(shí)現(xiàn)了對(duì)螺蟲乙酯的定性和定量的測(cè)定，液相梯度洗脫條件見表1。

將螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液采用流動(dòng)注射直接進(jìn)樣，通過全掃描確定化合物母離子，再對(duì)母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，得到碎片離子，通過優(yōu)化條件，得到二級(jí)質(zhì)譜圖。通過多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）選擇相對(duì)豐度較高的離子對(duì)，確定為定性定量離子對(duì)，并優(yōu)化毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞電壓等參數(shù)，優(yōu)化后的質(zhì)譜條件見表2。

2.2 線性范圍和檢出限

選取花菜、大白菜、萵苣、橙子4種樣品，按照前處理方法處理，采用所得到的基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度分別為0，0.25，0.5，2.0，5.0，20.0ng/mL，經(jīng)測(cè)定后以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在4種基質(zhì)中螺蟲乙酯相應(yīng)的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表3。

由表3可知，在0.25～20.00ng/mL范圍內(nèi)螺蟲乙酯濃度與其色譜峰面積響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系。螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖見圖2。由圖2可知，0.5ng/mL的螺蟲乙酯響應(yīng)值良好。

表3 螺蟲乙酯在4種果蔬基質(zhì)加標(biāo)的回歸方程和相關(guān)系數(shù)Table 3 Linear equations and correlation coefficients for spirotetramat in four matrices

圖2 螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品的MRM色譜圖Figure 2 MRM chromatogram ofspirotetramat standards

2.3 準(zhǔn)確度和精密度

在本方法確定的條件，選擇花菜、大白菜、萵苣、橙子4種果蔬作為基質(zhì)樣品，進(jìn)行0.5，1.0，10.0μg/kg 3個(gè)水平的添加回收試驗(yàn)，各水平進(jìn)行6次平行測(cè)定，回收率和精密度見表4。

由表4可知，在這4種果蔬中添加不同含量的螺蟲乙酯，其平均回收率達(dá)到91.7%～114.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，表明該方法對(duì)不同樣品和不同含量的螺蟲乙酯的測(cè)定均具有很好的準(zhǔn)確度和精密度。

不同基質(zhì)添加0.5μg/kg螺蟲乙酯的 MRM色譜圖見圖3～6。由圖3～6可知，在花菜、大白菜、萵苣、橙子4種果蔬中添加濃度為0.5μg/kg時(shí)，用各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)響應(yīng)值良好，基質(zhì)效應(yīng)干擾小，信噪比滿足檢測(cè)要求，證明該方法靈敏度高，能滿足檢測(cè)條件。

表4 螺蟲乙酯在不同果蔬中加標(biāo)回收率及精密度測(cè)定結(jié)果Table 4 Recoveries and relative standard deviations of spirotetramat in four matrices

圖3 萵苣中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 3 MRM chromatogram of spirotetramat in lettuce

圖4 花菜中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 4 MRM chromatogram of spirotetramat in broccoli

圖5 白菜中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 5 MRM chromatogram of spirotetramat in cabbage

圖6 橙子中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 6 MRM chromatogram of spirotetramat in orange

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定4種果蔬中螺蟲乙酯的檢測(cè)方法。采用酸化乙腈提取，經(jīng)過C18、石墨化碳和 MgSO4粉末吸附，消除了色素、脂類物質(zhì)的干擾，再應(yīng)用ACQUITY UPLE?BEH C18色譜柱分離，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)螺蟲乙酯定性、定量測(cè)定。該檢測(cè)方法線性好、回收率高、快速、靈敏、可靠。

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