氣相色譜測(cè)定十滴水中樟腦和桉油精方法的改進(jìn)

劉元媛，于世海，胡佳，何濤

(1.遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001;2.遼寧康辰藥業(yè)有限公司，遼寧 丹東 118301;3.錦州市藥品檢驗(yàn)所，遼寧 錦州 121000)

氣相色譜法是測(cè)定藥物揮發(fā)性成分的主要分析手段，在藥物分析方法中占有重要地位。我校已開展了近十年的氣相色譜分析實(shí)驗(yàn)，但方法陳舊，并且實(shí)驗(yàn)用藥已經(jīng)退出市場(chǎng)，需要選擇新的實(shí)驗(yàn)方法及藥物來(lái)滿足學(xué)生實(shí)驗(yàn)的教學(xué)需要。本課題組進(jìn)行了多項(xiàng)研究，先后嘗試了藿香正氣水、復(fù)方丹參片、十滴水中揮發(fā)性成分的測(cè)定研究，并摸索了在不同氣相色譜柱上的分離效果［1］，最終確立了采用SE-54 毛細(xì)管柱測(cè)定十滴水中樟腦和桉油精含量的方法。該方法簡(jiǎn)便，精密度、重復(fù)性高，陰性液無(wú)干擾，可應(yīng)用于學(xué)生實(shí)驗(yàn)教學(xué)。

1 儀器與試藥

日本島津GC-2010 氣相色譜儀;AR2140 電子分析天平。樟腦對(duì)照品(北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，批號(hào)76-22-2);桉油精(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110788-201105);十滴水樣品(廣西慧寶源制藥有限公司，批號(hào) 130325;北京海德潤(rùn)制藥有限公司，批號(hào)130403);乙純(分析純)，水為重蒸水。

2 實(shí)驗(yàn)條件

2.1 色譜條件的選擇［1-5］

色譜柱:SE-54 石英毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm);程序升溫(70 ℃～160 ℃，升溫速率為8 ℃/min);汽化室溫度230 ℃;檢測(cè)器:FID，溫度240 ℃;載氣:高純氮?dú)?(壓力為120 kP);分流進(jìn)樣 (分流比為40∶1);內(nèi)標(biāo)物為環(huán)己酮，進(jìn)樣量1 μL。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備

精密量取環(huán)己酮適量，加70% 乙醇制成每1 mL 含10.481 mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取樟腦、桉油精對(duì)照品適量，加70%乙醇制成每1 mL 含樟腦0.756 mg、含桉油精0.831 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液制備

取十滴水樣品10 瓶，混勻，精密量取2.0 mL，置25 mL 量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液2.0 mL，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 陰性液的制備

按照處方工藝，制備缺樟腦和桉油精的樣品，并按照供試品溶液的制備方法處理樣品，得到樟腦和桉油精的陰性液。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液及供試品溶液各1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄氣相色譜峰。結(jié)果顯示，溶劑峰、環(huán)己酮峰、桉油精峰、樟腦峰均完全分離，理論塔板數(shù)按樟腦計(jì)不低于50 000。

2.6.2 線性關(guān)系考察 精密取樟腦、桉油精對(duì)照品適量，加70% 乙醇制成每1 mL 含樟腦5.671 1 mg、含桉油精7.479 0 mg 的溶液，分別精密量取該溶液1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL 置5 mL 量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)液0.4 mL，加70%稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜峰。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程分別為:Y=2.091X-0.002 9，r=0.999 8，Y=1.201 9X-0.183 1，r=0.999 7。結(jié)果顯示，樟腦在0.226 8～1.134 2 mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，桉油精在0.299 2～1.495 8 mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。

2.6.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5 次，測(cè)定樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為0.6%、0.5%。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液1 μL，分別于0，2，4，6，8 h 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為0.7%、0.8%，結(jié)果表明樟腦、桉油精在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品5 份，按照“供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別吸取各供試品溶液1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為1.8%、2.1%。

2.6.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取5 份含量已知的同一批號(hào)樣品(樟腦的含量為22.97 mg·mL-1、桉油精含量為7.86 mg·mL-1)溶液各0.2 mL，置于10 mL 量瓶中，分別精密加入樟腦對(duì)照品溶液 (濃度為1.374 mg·mL-1)3.0 mL、加入桉油精對(duì)照品溶液 (濃度為2.493 mg·mL-1)0.3 mL、加入內(nèi)標(biāo)液0.2 mL，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)求得樟腦的平均加樣回收率為98.3%，RSD 為1.9%，桉油精的平均加樣回收率為97.6%，RSD 為2.1%。

2.7 樣品測(cè)定 取各批號(hào)樣品，按照“供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別吸取各供試品溶液1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精的含量結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 十滴水中樟腦、桉油精含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

結(jié)合目前氣相色譜應(yīng)用的實(shí)踐情況，本文選用了程序升溫法同時(shí)測(cè)定兩種物質(zhì)的含量，使教學(xué)與實(shí)踐緊密結(jié)合，若考慮實(shí)驗(yàn)成本也可以采用程序升溫法測(cè)定其中一個(gè)成分的含量。實(shí)驗(yàn)用藥選用十滴水，價(jià)格便宜，配制樣品采用70%乙醇為溶劑，操作方便、無(wú)污染。

本實(shí)驗(yàn)分別考察了DB-WAX 毛細(xì)管色譜柱及SE-54毛細(xì)管氣相色譜柱，結(jié)果顯示在DB-WAX 毛細(xì)管色譜柱上分離效果不佳，而在SE-54 毛細(xì)管氣相色譜柱上獲得了良好的分離效果，因此選用SE-54 為測(cè)定用柱。

本實(shí)驗(yàn)分別考察了以環(huán)己酮、水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，結(jié)果顯示樣品陰性液在水楊酸甲酯出峰處有干擾，因此選用環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)物。本方法采用的色譜條件與中國(guó)藥典中十滴水的測(cè)定條件不同，但對(duì)樣品的含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度較高，結(jié)果符合藥典的相關(guān)要求，對(duì)科研教學(xué)具有一定的參考意義。

圖1 溶劑乙醇?xì)庀嗌V圖

圖2 環(huán)己酮?dú)庀嗌V圖

圖3 樟腦、桉油精對(duì)照品氣相色譜圖

圖4 十滴水樣品氣相色譜圖

圖5 樟腦桉油精陰性液氣相色譜圖

［1］盧華，張國(guó)宏，蔣受軍，等.氣相色譜法測(cè)定十滴水中樟腦和桉油精含量的研究［J］.中成藥，2008，30 (7):997-999.

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