氣相色譜法測定苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量

范 強，劉自揚，萬仁玲，段文龍

（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081）

苦參蒼術(shù)口服液由苦參和蒼術(shù)兩味中藥組成，具有清熱、燥濕、止痢之功效，主治雞大腸桿菌病，其在制劑制備過程中使用三氯甲烷提取苦參總生物堿。三氯甲烷是一種強揮發(fā)性物質(zhì)，高劑量的三氯甲烷能抑制中樞神經(jīng)，并可造成肝腎損害及腫瘤［1］?！吨腥A人民共和國獸藥典》二○一○年版規(guī)定，三氯甲烷屬第二類殘留溶劑，應(yīng)限制使用，限度為0.006%［2］，控制其殘留量對保證獸藥質(zhì)量和用藥安全具有重要意義。因此，本研究按照《中國獸藥典》殘留溶劑測定法的要求，在參考相關(guān)文獻基礎(chǔ)上［3-5］，建立了苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量的檢測方法，并進行了方法學(xué)驗證，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

Aglient 7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器；梅特勒XS205分析天平。三氯甲烷（國藥集團化學(xué)試劑有限公司提供，分析純，批號：20090116），N-N二甲基甲酰胺（DMF）（迪馬公司提供，色譜純，批號：62106）。苦參蒼術(shù)口服液由洛陽惠中獸藥有限公司提供，批號：20101001，20101002，20101003。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性［3-5］采用DB-FFAP毛細管柱（30 m ×0.53 mm×1 μm）；進樣口溫度：220℃；程序升溫，初始溫度40℃保持10 min，以10℃／min的速率升溫至70℃，保持3 min后，再以20℃／min的速率升溫至200℃；FID檢測器溫度250℃；載氣為氮氣，流速3.0 mL／min；分流比1∶1；進樣方式為直接進樣；進樣量：1 μL。三氯甲烷色譜峰與其他色譜峰的分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 取三氯甲烷對照品適量，精密稱定，用DMF稀釋制成24 μg／mL的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取蒼術(shù)苦參口服液樣品作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取三氯甲烷對照品151.16 mg，置已有一定量DMF的50 mL量瓶中，加DMF稀釋至刻度，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液適量，用DMF稀釋配制成含三氯甲烷6.0464、12.0928、24.1856、30.232、60.464、120.928 μg／mL的系列對照品溶液，精密吸取上述對照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)測定2次，以平均峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程為 A ＝ 0.9722C－0.1428（r＝0.99995），線性范圍為 6.0464～120.928 μg／mL。

2.5 檢測限和定量限 取濃度為6.046 μg／mL的對照品溶液，逐步稀釋，依照測定法測定三氯甲烷峰的信噪比，得三氯甲烷的檢測限（S／N＝3）為0.91 μg／mL，定量限 （S／N ＝ 10） 為 2.42 μg／mL。

2.6 儀器精密度試驗 精密吸取濃度為60.464 μg／mL的三氯甲烷對照品溶液1 μL，連續(xù)進樣6次，測定其峰面積，計算RSD為1.1%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液1 μL，分別在0，2，6，8，10，12 h 進樣，測定三氯甲烷的峰面積，計算RSD為2.3%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗 取批號為20101001的苦參蒼術(shù)口服液，按上述方法平行測定6次，得平均含量為22.036 μg／mL，RSD 為2.7%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗 精密量取已知含量的供試品（批號：20101001）5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入濃度為22.003 μg／mL的三氯甲烷對照品溶液5 mL，混勻，共制備6份，按上述方法測定，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗數(shù)據(jù)

2.10 供試品的測定 按“2.1”項下條件進行測定，記錄三氯甲烷峰的峰面積，按外標(biāo)法計算其含量，結(jié)果3批供試品中均檢出三氯甲烷，其殘留量均低于《中華人民共和國獸藥典》的限度規(guī)定，數(shù)據(jù)見表2。

表2 樣品的含量測定結(jié)果 （n＝4）

3 討論與小結(jié)

3.1 色譜柱的選擇 研究中分別采用HB-5、DB-624、DB-WAX、DB-FFAP等色譜柱進行了色譜條件摸索，結(jié)果表明采用DB-FFAP色譜柱分離效果最好，三氯甲烷峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，符合氣相色譜法的規(guī)定。

3.2 檢測器的選擇 三氯甲烷含有3個電負性的氯原子，在FID檢測器上響應(yīng)較低，最適宜采用電子俘獲檢測器（ECD）對其進行測定。ECD檢測器僅對那些能俘獲電子的化合物，如鹵代烴、含N、O和S等雜原子的化合物有響應(yīng)，但其對檢測樣品要求較高。研究中發(fā)現(xiàn)，供試品成分較為復(fù)雜且含有一定量的乙醇，極易對ECD檢測器造成污染而影響測定，故最終選用了FID檢測器。

3.3 進樣方式的選擇 研究中分別對直接進樣方式和頂空進樣方式進行了比較，結(jié)果由于供試品中含有大量的揮發(fā)油和乙醇，采用頂空進樣的方式無法達到減小干擾的目的，反而增加了干擾，故最終采用直接進樣的方式。

3.4 測定方法的選擇 氣相色譜法測定含量時，內(nèi)標(biāo)法可減少由儀器系統(tǒng)或操作過程引入的誤差，比外標(biāo)法具有更高的準(zhǔn)確度。但由于供試品中含有的揮發(fā)性成分較多，對測定的干擾較大，研究中未能從異丙醇、正丁醇、丙酮、正己烷等有機試劑中選出合適的內(nèi)標(biāo)物，故最終采用外標(biāo)法進行測定。

3.5 柱溫的選擇 試驗中分別對恒溫方式和程序升溫方式進行了考察，結(jié)果采用恒溫方式時，三氯甲烷峰不能與其他色譜峰完全分離；采用程序升溫的方式時，三氯甲烷峰達到基線分離，峰形較好，分析時間較短；故試驗中采用程序升溫的方式進行樣品測定。

本研究首次利用氣象色譜法對中藥口服液中三氯甲烷的殘留量進行了測定。結(jié)果表明，該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量的檢測方法。此外，根據(jù)產(chǎn)品的制劑工藝，本方法亦可用于蒼術(shù)揮發(fā)油和苦參總生物堿中三氯甲烷殘留量的測定。

［1］鄒 梅，趙生友，王 瑋.氯仿的免疫毒性作用［J］.中國免疫學(xué)雜志，2002，18（3）：178-183.

［2］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版一部［S］.

［3］宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛細管氣相色譜法測定鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷的殘留量［J］.中國藥房，2010，21（37）：3536-3537.

［4］李志剛，李 晶，高 強，等.氣相色譜法測定甲型肝炎滅活疫苗中三氯甲烷殘留量［J］.中國生物制品學(xué)雜志，2010，23（7）：778-780.

［5］李雪春，張衛(wèi)國.中草藥制劑中三氯甲烷殘留量的頂空氣相色譜測定法［J］.職業(yè)與健康，2011，27（1）：37-38.