HPLC法測(cè)定珍龍醒腦膠囊中西紅花的含量

任松鵬 孫緒丁 趙延霞 魏永義

[摘要] 目的 建立藏藥珍龍醒腦膠囊中西紅花的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的高效液相色譜法（HPLC）含量測(cè)定方法。方法 Waters C18色譜柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流動(dòng)相為乙腈-體積分?jǐn)?shù)比1%冰醋酸水溶液（25∶75）；流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm，柱溫為室溫。結(jié)果 西紅花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西紅花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL濃度范圍內(nèi)均與色譜峰峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9997、0.9999；西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分別為97.80%、97.44%，RSD分別為0.66%（n=6）、1.71%（n=6）。結(jié)論 該方法可同時(shí)測(cè)定制劑中的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ，可用于珍龍醒腦膠囊的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 珍龍醒腦膠囊；西紅花苷Ⅰ；西紅花苷Ⅱ；HPLC；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）02（b）-0020-02

珍龍醒腦膠囊由珍珠、天竺黃、西紅花、丁香、肉豆蔻等29味藏藥制成的藏藥成方制劑，具有開竅醒神、消熱通絡(luò)的作用，西紅花為該制劑處方中的君藥，具有很強(qiáng)的中樞降壓、抗炎和治療軟組織損傷的藥理活性[1-2]，其因此控制方中西紅花所含西紅花苷含量變得尤為重要。而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[3]未對(duì)西紅花進(jìn)行質(zhì)量控制，也尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于珍龍醒腦膠囊中的西紅花測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。為了更加有效的控制該制劑的質(zhì)量，該研究首次建立了珍龍醒腦膠囊中西紅花的兩種西紅花苷類成分西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的HPLC含量測(cè)定方法，經(jīng)方法學(xué)考察，結(jié)果表明：該方法具有良好的分離效果、較高的靈敏度、方便快捷、準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，能夠更加有效的控制珍龍醒腦膠囊的質(zhì)量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器

高效液相色譜儀：日立L-2100型泵，日立L-2400紫外檢測(cè)器；電子天平：島津AUW220D型；紫外分光光度計(jì)：島津UV-2450型；超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司KQ-300B。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ適量加稀乙醇制成，每1 mL中含西紅花苷Ⅰ30 μg、西紅花苷Ⅱ15 μg的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 本品研細(xì)后，取粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，避光，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，冰浴中超聲30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。同法制得西紅花陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱為Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈- 1%冰醋酸（25∶75），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm；分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，測(cè)定。結(jié)果表明：西紅花苷Ⅰ、Ⅱ與其它組分的分離度均>1.5；陰性對(duì)照不干擾樣品測(cè)定。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取不同濃度西紅花苷Ⅰ、Ⅱ混合溶液，依上述“2.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰峰面積（A）分別對(duì)西紅花苷Ⅰ、Ⅱ?qū)φ掌窛舛龋–）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明：西紅花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西紅花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL濃度范圍內(nèi)均與色譜峰峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為0.999 7、0.999 9。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液，依上述“2.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%=1.05%，結(jié)果表明：儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.1.2”項(xiàng)的方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，記錄峰面積，以后每隔2 h測(cè)定1次，考察8 h，結(jié)果表明：供試品溶液中的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ在8 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批珍龍醒腦膠囊樣品6份，依上述“2.1.2”項(xiàng)的方法制備供試品溶液，依上述“2.2”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：該分析方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

別精密稱取珍龍醒腦膠囊樣品6份，置具塞的錐形瓶中，各精密加入混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1.2”項(xiàng)下的供試品制備方法制成供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果：供試品中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分別為97.80%、97.44%，RSD分別為0.66%、1.71%。

2.8 樣品含量測(cè)定

取珍龍醒腦膠囊3批樣品，依上述“2.1.2”項(xiàng)的方法制備供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法分別計(jì)算供試品中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的含量，見表1。

3 討論

參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]，對(duì)供試品溶液的制備方法進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：采用甲醇為提取溶劑提取西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量結(jié)果較高；常溫超聲比冰浴超聲西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量低，故未進(jìn)行回流提取試驗(yàn)；提取時(shí)間20 min、30 min、40 min西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量結(jié)果一致，為保證提取完全，選擇提取時(shí)間30 min。故最后確定的提取方法為甲醇冰浴超聲30 min提取。

參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]，對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行篩選，乙腈- 1%冰醋酸體系作為檢測(cè)珍龍醒腦膠囊中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的流動(dòng)相，而且乙腈-冰醋酸 （15～30∶85～70）均能達(dá)到含量檢查要求，其中以乙腈- 1%冰醋酸 （25∶75）條件下效果最好，西紅花苷Ⅰ、Ⅱ保留時(shí)間分別約為5.3 min、9.9 min，峰形較好。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉瑛，古天明，周紅.西紅花苷類成分藥理作用研究概況[J].成都大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008（1）：16-19 .

[2] 孫創(chuàng)斌，劉艷霞，劉國清，等.西紅花的藥理研究進(jìn)展[J].西南國防醫(yī)藥，2011，21（8）：914-916.

[3] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中華人民共和國藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10708（ZD-0708）-2002-2012Z[S].北京：國家食品藥品監(jiān)督管理局.

[4] 梁華正，丁武輝，袁東香，等.梔子中西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的高效液相色譜法測(cè)定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012（10）：2386-2388.

[5] 何常明，謝曉梅，何美蓮，等.西紅花中西紅花苷-1和西紅花苷-2含量測(cè)定方法的建立[J].藥物分析雜志，2006（9）：1270-1273.

（收稿日期：2014-01-05）