應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的作用

林炳柱 劉小燕

[摘要]目的 探討化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中所起的作用。 方法 選取160例梅毒患者及135例非梅毒患者的血清，分別采用化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法、RPR法、TPPA法分別檢測(cè)血清中的梅毒螺旋體抗體。結(jié)果 對(duì)照組的敏感性分別為97.0%、76.3%和98.3%。RPR法的敏感性與特異性明顯低于化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法、TPPA法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法和TPPA法相比，敏感性和特異性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 梅毒的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法的敏感性和特異性較高，是一種方便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

[關(guān)鍵詞] 梅毒；作用；化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）02（b）-0010-03

梅毒是感染梅毒螺旋體后引起的一種易傳染的性傳播疾病[1]。梅毒是一種易傳染、危害性大的人類(lèi)性傳播疾病[2-4]。血清學(xué)檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的方法已經(jīng)被我國(guó)衛(wèi)生部列為手術(shù)前、孕婦產(chǎn)前的必檢項(xiàng)目，血清學(xué)檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的方法是診斷梅毒的重要依據(jù)之一[5-6]。因此，選擇特異性強(qiáng)、敏感性高的實(shí)驗(yàn)方法非常有助于梅毒的診治。為探討化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中所起的作用，該研究選擇該院臨床中心2012—2013年收治的160例梅毒患者為研究對(duì)象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院臨床中心的160例梅毒患者血清與135例非梅毒患者的血清為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，梅毒患者血清標(biāo)本通過(guò)真空促凝管采集靜血漿3 mL，將血清分離，保存在4～8 ℃的冰箱，待檢測(cè)[7-9]。

1.2 儀器與試劑

CLIA試劑盒、TPPA試劑盒均為日本富士瑞必歐生物技術(shù)有限公司，RPR試劑盒為上海榮盛生物科技有限公司。

1.3 方法

將160份梅毒患者血清與135例非梅毒患者血清標(biāo)本分別同時(shí)進(jìn)行CLIA和TPPA檢測(cè)，比較兩種方法的不同之處。

將160份梅毒患者血清與135例非梅毒患者血清，進(jìn)行CLIA檢測(cè)結(jié)果顯示為陽(yáng)性時(shí)，再進(jìn)行TPPA和RPR檢測(cè)，探討TPPA陽(yáng)性結(jié)果的S/CO值與TPPA、RPR之間有何聯(lián)系。所有進(jìn)行檢測(cè)的試劑均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，且操作均按照操作說(shuō)明書(shū)操作[10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS14.2軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

①160份梅毒患者血清中，CLIA法檢測(cè)陽(yáng)性151份，TPPA陽(yáng)性130份，以回歸分析結(jié)果為參考，CLIA法的陽(yáng)性率為93.75%，TPPA法的陽(yáng)性率為82.50%，兩種方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.8，P<0.05）。

②135份非梅毒患者血清中，CLIA法檢測(cè)陽(yáng)性率為2.28%，TPPA法檢測(cè)陽(yáng)性率為9.28%，RPR陽(yáng)性法檢測(cè)陽(yáng)性率為10.37%。CLIA的S/CO值在2～11有3份，其中TTPA陽(yáng)性12份，RPR陽(yáng)性14份；738份，TPPA均為陽(yáng)性，RPR陽(yáng)性7份。CLIA法陽(yáng)性S/CO值與TPPA，RPR法所測(cè)結(jié)果關(guān)系，見(jiàn)表1。

③CLIA與TPPA結(jié)果不一致的21份，經(jīng)RPR法檢測(cè)，陽(yáng)性4份，1份含TP31、TP47條帶，3份含TP32、TP47條帶，1份 含TP17、TP32、TP47條 帶，檢測(cè)結(jié)果未顯示出的4份，為T(mén)P45陽(yáng)性。14份RPR法檢測(cè)陰性的標(biāo)本，通過(guò)CLIA法驗(yàn)證也均為陰性 [11]。

3 討論

梅毒對(duì)人體的危害多種多樣，越早對(duì)梅毒的確診，有利于患者得到全面有效的治療，有利于患者疾病的快速康復(fù)。梅毒臨床確診按照梅毒病毒的特異性抗體的檢測(cè)和患者的臨床癥狀作為判斷依據(jù)[12]。TP-ELISA適合數(shù)量較大的操作，但測(cè)量結(jié)果經(jīng)常遇到假陽(yáng)性的情況[13]。CLIA技術(shù)是ELISA技術(shù)的更新技術(shù)，以敏感的化學(xué)發(fā)光底物代替原始的底物，其特點(diǎn)是信號(hào)模式可被酶增強(qiáng)，而且發(fā)光信號(hào)時(shí)間被保持和拉長(zhǎng)了，一方面保留了發(fā)光免疫分析超高的敏感性，另一方面也避免了傳統(tǒng)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間較短等缺點(diǎn)。過(guò)氧化物酶催化魯米諾發(fā)光和堿性磷酸酶催化金剛烷衍生物的方法是當(dāng)今較為常用的兩種方法。CLIA法對(duì)各期梅毒的靈敏性和特異性均>97.5%，因此其也成為一種新興的檢測(cè)梅毒的方法[14]。

該研究發(fā)現(xiàn)， CLIA法的陽(yáng)性符合率高于TPPA法。研究發(fā)現(xiàn)，CLIA法為陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，S/CO值較低時(shí)TPPA會(huì)出現(xiàn)陰性結(jié)果， RPR法發(fā)現(xiàn)14份為陰性，CLIA法驗(yàn)證結(jié)果也為陰性，由此可說(shuō)明CLIA法的靈敏度明顯高于TPPA法；此外，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果可能是標(biāo)本處理不當(dāng)導(dǎo)致的。

采用RPR法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的為4份，1份為T(mén)P17、TP45條帶，2份為T(mén)P45、TP47條帶，1份為T(mén)P32、TP45、TP47條帶。這是由于CLIA包被的梅毒抗原特異性導(dǎo)致的，而TPPA采用的抗原是提純后的致病性梅毒螺旋體菌體，對(duì)TP15、TP17、的抗體選擇性較強(qiáng)，當(dāng)僅有TP15、TP17抗體時(shí)，TPPA只會(huì)出現(xiàn)陰性。有研究發(fā)現(xiàn)梅毒早期診斷的指標(biāo)之一為T(mén)P47 [15]，活動(dòng)期梅毒標(biāo)志的抗體之一是TP15 [16]。因此推測(cè)，9份抗體梅毒標(biāo)本可能屬于早期感染或隱性感染的患者，在早期或隱性梅毒感染中的檢測(cè)CLIA法比TPPA具有更高的靈敏度。

綜上，CLIA作為一種新開(kāi)發(fā)的梅毒抗體檢測(cè)試劑，相比TPPA具有非常明顯的優(yōu)勢(shì)，且容易操作、自動(dòng)化技術(shù)高、結(jié)果判斷準(zhǔn)確且重復(fù)性較好等優(yōu)勢(shì)，有望成為臨床上廣泛使用的一種方法。

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（收稿日期：2014-01-05）