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    60Co-γ誘變皖麥50HMW-GS變異的篩選及其M3代品質(zhì)分析*

    2014-11-10 11:14:46張從宇李文陽王停停崔嘉欣
    激光生物學(xué)報(bào) 2014年2期
    關(guān)鍵詞:亞基單株籽粒

    張從宇,王 敏,李文陽,王停停,崔嘉欣

    (1.安徽科技學(xué)院農(nóng)學(xué)院,安徽鳳陽 233100;2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,安徽合肥 230036)

    小麥富含蛋白質(zhì),普通品種含量13%左右,變化范圍6.9-22%[1,2]。小麥生產(chǎn)的蛋白質(zhì)占所有谷類作物的1/3,蛋白質(zhì)含量是衡量小麥營養(yǎng)品質(zhì)的主要指標(biāo)[3,4]。小麥儲藏蛋白主要是醇溶蛋白和谷蛋白,谷蛋白是依靠二硫鍵結(jié)合的大分子蛋白聚合體,用SDS-PAGE分離,可分為高分子量亞基和低分子量亞基。研究表明,高分子量谷蛋白(GMP)含量、粒度及亞基的結(jié)構(gòu)與小麥加工品質(zhì)有密切關(guān)系[5,6],GMP由高、低分子量谷蛋白亞基(HMW-GS、LMWGS)通過二硫鍵(S-S)連接并聚合而成,HMW-GS的組成影響GMP的形成,進(jìn)而影響面粉的加工品質(zhì)[7,8]。

    60Co-γ射線是輻射育種最常用的射線源。并具有產(chǎn)生小麥品質(zhì)突變的特點(diǎn)。已有研究表明,利用60Co-γ射線輻射小麥,可提高蛋白質(zhì)含量和賴氨酸含量[9-12]。本試驗(yàn)用60Co-γ射線輻射小麥皖麥50的干種子,在M2代篩選HMW-GS組成變異單株,M3代測定其穗行變異穩(wěn)定性,并對變異穗行種子的GMP含量、GMP粒度、部分營養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)進(jìn)行測定,篩選出了穩(wěn)定的優(yōu)質(zhì)變異種質(zhì),具體報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試品種為皖麥50,目前為安徽省主推小麥品種,2005通過國家審定,半冬性,幼苗半匍匐,苗期長勢壯,葉寬長,青綠色,分蘗力強(qiáng),穗紡錘型,長芒,白殼,白粒,半角質(zhì)。國家區(qū)域試驗(yàn)2003年、2004年分別測定混合樣,品質(zhì)指標(biāo)平均為:容重802克/升,蛋白質(zhì)(干基)含量14.16%,濕面筋含量31.4%,沉降值25.8毫升,吸水率54.7%,面團(tuán)形成時(shí)間 2.2分鐘,穩(wěn)定時(shí)間2.0分鐘。HMW-GS組分為1A(Null)/1B(7+9)/1D(2+12)[13]。取當(dāng)年收的干種子作誘變對象。

    1.2 輻照處理

    用60Co-γ射線輻照皖麥50,劑量為200 Gy,處理種子1000粒,不處理的皖麥50為對照。

    1.3 誘變材料的種植

    輻射處理當(dāng)代種子于2011年秋播種,2012年夏每株收1穗,混脫,獲得M1代種子;2012年秋種植,行距20 cm,株距5 cm,種植1000株,2013年夏收獲單株,單穗脫粒,獲得M2代種子,本試驗(yàn)隨機(jī)收獲655個(gè)單株。M2代HMW-GS亞基變異株(株號282)的5穗種子播成穗行,成熟后收獲,獲得M3代種子。

    1.4 M2代HMW-GS組成變異的篩選

    采用高分子量麥谷蛋白亞基的電泳圖譜分析法。半粒種子磨粉后,加入50%異丙醇,60℃水浴下去除雜質(zhì)后,加入樣品提取液60℃水浴下提取1 h,加入樣品緩沖液,即可上樣或4℃冰箱保存。電泳采用SDS垂直板,分離膠為10%(pH8.5),濃縮膠濃度為 3.75%(pH6.8),膠厚 1.5 mm,樣品梳 16齒,每個(gè)樣品孔點(diǎn)樣20μL。電極緩沖液為Tris-甘氨酸(pH8.3)。以13 mA穩(wěn)流電泳,指示劑出膠后1 h停止電泳。凝膠用染色液(12.5%三氯乙酸+0.05%考馬斯亮蘭)染色過夜,用水脫色至背景清淅,用凝膠成像系統(tǒng)對膠照相,然后用Qualityone軟件進(jìn)行比較、分析。

    655個(gè)M2代單株,每穗隨機(jī)選3粒種子進(jìn)行電泳,以皖麥50為對照,以HMW-GS的亞基條帶數(shù)量和比對中育8號(HMW-GS組成為1/7+9/2+12)[13]相對位置為依據(jù)鑒定變異。

    1.5 M3代變異穗行HMW-GS組成穩(wěn)定性鑒定

    M3代穗行種子每穗隨機(jī)選5粒,進(jìn)行 SDSPAGE電泳,以皖麥50為對照,鑒定HMW-GS組成變異的穩(wěn)定性。

    1.6 M2代群體單株及M3代變異穗行種子部分營養(yǎng)和加工品質(zhì)的測定

    M2代群體單株及M3代變異穗行種子,用瑞典波通公司的DA7200型近紅外谷物品質(zhì)分析儀,測定吸水率、蛋白質(zhì)含量、容重、濕面筋含量、穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間、硬度指數(shù)、沉降值、出粉率,3次重復(fù)。

    1.7 M3代變異穗行種子GMP含量的測定

    變異穗行種子,參照 Weegels P L的方法[7],用雙縮脲法測定GMP含量。向0.05 g小麥粉中加入1mL 1.5%的SDS提取液,常溫下15500 g離心15 min,棄上清液,殘余物加入稀釋1倍的雙縮脲試劑10mL,振蕩2 h后離心,取上清液測540 nm處的吸光值,殘余物中的氮含量作為GMP的近似值,3次重復(fù)。

    1.8 M3代變異穗行種子GMP凝膠提取及粒度的測定

    變異穗行種子,參照Don C的方法提取GMP凝膠[14]。稱取3 g樣品,放入100mL燒杯中,加入60mL 1.5%的SDS溶液,混勻,80000 g離心30 min。取上層蛋白質(zhì)凝膠,用Bettersize 2000激光粒度分析儀進(jìn)行分析。

    1.9 數(shù)據(jù)處理

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS軟件分析統(tǒng)計(jì),Excel軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 M2代HMW-GS組成變異篩選結(jié)果

    655個(gè)M2代單株,經(jīng)SDS-PAGE電泳篩選,株號為282的單株發(fā)生HMW-GS組分變異,變異率為0.15%,從圖1看,變異的亞基組分由皖麥50的的7+9/2+12變?yōu)?/7+9/2+12,1A染色體上多1條帶,1B和1D染色體上條帶未變,且282號單株5穗種子全為1/7+9/2+12變異類型。

    圖1 單株282號的5個(gè)單穗籽粒M2代HMW-GS組成變異Fig.1 HMW-GS composition variation of M2generation of 5 singal spike grains of plant No.282

    2.2 M2代 HMW-GS變異單株282號與 M2代群體及對照的農(nóng)藝性狀比較

    從表1看,M2代HMW-GS變異單株282號的株高、穗長、小穗數(shù)、退化小穗數(shù)、單穗粒數(shù)、單穗粒重均比群體平均數(shù)和對照皖麥50小,而千粒重比群體高,低于對照,經(jīng)方差分析,差異均不顯著。從植株特性上看,變異單株282號屬半冬性,幼苗半匍匐,苗期長勢壯,葉寬長,青綠色,分蘗力強(qiáng),穗紡錘型,長芒,白殼,白粒,這與對照皖麥50一致;從籽粒特性上看,變異單株282號屬角質(zhì),透明,而對照皖麥50屬半角質(zhì),半透明。

    2.3 M2代 HMW-GS變異單株282號與 M2代群體及對照的品質(zhì)性狀比較

    從表2看,M2代HMW-GS變異單株282號的蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量、形成時(shí)間、沉降值均比群體平均數(shù)和對照皖麥50高;而吸水率、直鏈淀粉含量比群體高,但低于對照;穩(wěn)定時(shí)間、硬度指數(shù)低于群體,但高于對照;出粉率低于群體和對照。經(jīng)方差分析,變異單株282號的蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量、沉降值與對照皖麥50差異極顯著,穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間、硬度、直鏈淀粉含量與對照皖麥50差異顯著。

    表1 變異單株與M2代群體及對照的農(nóng)藝性狀Tab.1 Agronomic traits of mutation plant of M2groups and control

    表2 變異單株與M2代群體及對照的品質(zhì)性狀Tab.2 Quality traits of mutation plant and M2groups and control

    2.4 M3代變異穗行穩(wěn)定性鑒定結(jié)果

    從圖2看,M3代5個(gè)穗行種子,經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定,HMW-GS組分全為1/7+9/2+12類型,和M2代為同一變異類型,穩(wěn)定不變。

    2.5 M3代變異穗行籽粒品質(zhì)性狀測定結(jié)果

    從表3看,5個(gè)變異穗行籽粒蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量、穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間、沉降值均比對照皖麥50高;容重、直鏈淀粉變異4略高于皖麥50,變異穗行1、2、3、5 均低于皖麥 50;硬度指數(shù)變異穗行 1、5高于對照,變異穗系2、3、4低于對照。經(jīng)方差分析,變異單株282號的5個(gè)變異穗行的蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量、沉降值與皖麥50差異均達(dá)極顯著水平;變異穗行1、3、4、5穩(wěn)定時(shí)間與皖麥50差異極顯著;變異穗行2、3、4、5形成時(shí)間與皖麥50差異顯著,變異穗行1差異極顯著;變異穗行1直鏈淀粉含量與皖麥50差異顯著,變異穗行3、4差異極顯著。

    圖2 單株282號的5個(gè)穗行籽粒M3代HMW-GS組成變異Fig.2 HMW-GS composition variation of M3generation of 5 ear row grains of plant No.282

    表3 M3代變異穗穗行籽粒品質(zhì)性狀測定結(jié)果Tab.3 Determination results of grain quality traits of variation ear range of M3generation

    2.6 M3代變異穗行籽粒GMP含量及GMP/Pr的測定結(jié)果

    從圖 3 看,M3代變異穗行 1、2、3、4、5 籽粒 GMP含量均高于皖麥50,其中,變異穗行5最高。經(jīng)方差分析,變異單株282號的5個(gè)變異穗行GMP含量與皖麥50差異均極顯著。

    從圖 4 看,M3代變異穗行 1、2、3、4、5 籽粒GMP/Pr均高于皖麥50,其中,變異穗行5最高。經(jīng)方差分析,變異單株282號的變異穗行1、2的GMP/Pr與皖麥50差異顯著,變異穗行3、4、5與皖麥50差異極顯著。

    2.7 M3代變異穗行籽粒GMP粒徑及數(shù)目分布

    從圖5看,皖麥50和各變異穗行籽粒GMP數(shù)目分布均呈單峰曲線。變異穗行1、2、3、4、5的粒徑分布范圍均大于皖麥50,最大分布區(qū)間的數(shù)值也大于皖麥50。皖麥50粒徑分布范圍為0.271-71.52μm,最大分布區(qū)間為0.715-0.911μm;變異穗行1、2、3、5粒徑分布范圍為 0.271-116.10μm,最大分布區(qū)間為0.911-1.161μm;變異穗行 4 粒徑分布范圍為 0.271-147.9μm 之間,最大分布區(qū)間為 0.911-1.161μm。

    圖3 M3代變異穗行籽粒GMP含量的測定結(jié)果Fig.3 Determination results of content of GMP of variation ear row of M3generation

    圖4 M3代變異穗行籽粒GMP/Pr的測定結(jié)果Fig.4 Determination results of GMP/Pr of variation ear row of M3generation

    圖5 M3代變異穗行GMP粒徑分布區(qū)間及比例Fig.5 GMP paticle diameter distribution range and propotion of variation ear row of M3generation

    從表 4 可以看出,變異穗行 1、2、3、4、5 籽粒,粒徑大于10.28μm的 GMP顆粒數(shù)目,比例均大于對照皖麥50。

    表4 GMP數(shù)目分布(%)Tab.4 Number distribution of GMP(%)

    3 討論

    小麥營養(yǎng)品質(zhì)包括蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量等指標(biāo),其測定值越大,營養(yǎng)越豐富;許多研究表明,蛋白質(zhì)含量、濕面筋含量與硬度、沉降值、穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間均顯著相關(guān)[1]。新出臺的國家小麥品種品質(zhì)分類標(biāo)準(zhǔn)(GB/T17320-2013)[15],依據(jù)小麥籽粒硬度指數(shù)、干基蛋白質(zhì)含量將小麥品種分為強(qiáng)筋、中強(qiáng)筋、中筋、弱筋4類,標(biāo)準(zhǔn)為強(qiáng)筋(干基蛋白含量≥14、硬度指數(shù)≥60),中強(qiáng)筋(干基蛋白含量≥13、硬度指數(shù)≥60),中筋(干基蛋白含量≥12.5、硬度指數(shù)≥50),弱筋(干基蛋白含量 <12.5、硬度指數(shù) <50)。依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),本試驗(yàn)中測定的皖麥50屬中強(qiáng)筋小麥,變異穗行均達(dá) 1、2、3、4、5 強(qiáng)筋標(biāo)準(zhǔn),在品種分類上提升了一個(gè)檔次。小麥加工品質(zhì)包括硬度、沉降值、穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間等指標(biāo),其測定值越大,加工品質(zhì)越好[1]。與國外同類品種相比,我國小麥品種的蛋白質(zhì)含量并不低,主要是蛋白質(zhì)組成較差,GMP含量低、粒徑小、優(yōu)質(zhì)亞基頻率較低是導(dǎo)致我國小麥整體面筋強(qiáng)度較低的主要原因[16,17]。跟據(jù)Payne等人根據(jù)單個(gè)亞基或亞基對與SDS沉淀值的關(guān)系提出的HMW-GS的品質(zhì)評分系統(tǒng),亞基得分1(3 分),7+9=2+12(2 分),Null(1 分)[18]。依據(jù)Payne等的評分標(biāo)準(zhǔn),皖麥50得分為5分,變異穗行1、2、3、4、5 得分均為7 分,變異穗行的加工品質(zhì)評分也顯著地提高。從沉降值、穩(wěn)定時(shí)間、形成時(shí)間看,變異穗行也比皖麥50明顯提升和優(yōu)化。

    4 結(jié)論

    60Co-γ射線可誘發(fā)皖麥50HMW-GS組成發(fā)生變異,變異率為0.15%;HMW-GS組分由皖麥50的7+9/2+12變?yōu)?/7+9/2+12,并在 M3代保持穩(wěn)定;M3代5個(gè)變異穗行,蛋白質(zhì)含量、GMP含量、GMP/Pr均比皖麥50提高,GMP粒徑分布范圍擴(kuò)大,粒徑大于10.28μm的比例增加;營養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)都得到改善。

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