不同種源金銀花陜西引種后主要成分的比較分析

孫寧寧，程巧凡，郭增軍（1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061；.西安碑林藥業(yè)股份有限公司，西安 710048）

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花；夏初花開放之前采收，干燥；具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等癥［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，金銀花具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、利膽、保肝、降血脂、抗生育的作用，同時(shí)對(duì)免疫系統(tǒng)有一定的作用［2］。其中抑菌、抗病毒、解熱抗炎作用尤為顯著，在大多數(shù)該類療效處方中均含有金銀花。我國金銀花野生資源豐富，有研究資料表明，忍冬屬植物全世界約有200種，我國有98種，廣泛分布于全國各省區(qū)，而以西南部種類最多，其中可供藥用的品種達(dá)47種［3］。近年來市場需求日益增加，野生資源不能滿足市場需要，金銀花種植發(fā)展迅猛，山東、河南、湖南、河北、山西、甘肅、四川、貴州、新疆等地均有栽培。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，河南所產(chǎn)“密銀華”和山東所產(chǎn)“濟(jì)銀花”質(zhì)量最好，為道地藥材［4］。習(xí)慣認(rèn)為山東產(chǎn)量大，而河南品質(zhì)佳［5］。金銀花的有效成分主要有有機(jī)酸類、黃酮類、三萜皂苷類、揮發(fā)油類、微量元素類等，《中國藥典》2010年版金銀花的檢測是以木犀草苷和綠原酸為指標(biāo)，其中綠原酸的含量多隨產(chǎn)地、加工方法等的不同有較大的差異［6］。為研究不同種源金銀花在陜西引種后的質(zhì)量狀況，對(duì)種源地為山東九間棚和河南封丘的金銀花引種到陜西臨潼后，比較分析其傳統(tǒng)藥用部位花、非藥用部位莖和葉中主要成分綠原酸及木犀草苷引種前后的變化，并與陜西產(chǎn)野生金銀花進(jìn)行比較，為陜西引種金銀花的質(zhì)量控制提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Dionex UltiMate3000SD全自動(dòng)高效液相色譜儀（美國戴安公司）；AS10200AD超聲波清洗器；Denver TP214分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

1.2 試藥 綠原酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)：110753－200413）；木犀草苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)：111720－201106）；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；實(shí)驗(yàn)所用藥材分別購自山東九間棚、河南封丘，陜西臨潼引種的山東九間棚、河南封丘及陜西臨潼產(chǎn)金銀花藥材。樣品編號(hào)：1＃山東九間棚（花），2＃陜西臨潼引種山東九間棚（花），3＃陜西臨潼引種山東九間棚（莖），4＃陜西臨潼引種山東九間棚（葉），5＃河南封丘（花），6＃陜西臨潼引種河南封丘（花），7＃陜西臨潼引種河南封丘（莖），8＃陜西臨潼引種河南封丘（葉），9＃陜西臨潼野生（花），10＃陜西臨潼野生（莖），11＃陜西臨潼野生（葉）。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸含量測定 按照2010年版《中國藥典》一部金銀花藥材含量測定項(xiàng)下的方法測定。

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為乙腈－4mL·L－1磷酸溶液（13∶87）；檢測波長327nm；進(jìn)樣量10μL；流速1.0mL·L－1；柱溫室溫。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加體積分?jǐn)?shù)50%的甲醇溶液制成1μg·mL－1的綠原酸對(duì)照品溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取不同產(chǎn)地的金銀花藥材、陜西臨潼野生及引種的金銀花莖、花、葉粉末各0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置于25mL棕色瓶中，加體積分?jǐn)?shù)50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 測定法 分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。綠原酸對(duì)照品、不同產(chǎn)地金銀花中綠原酸色譜圖見圖1。

圖1 HPLC圖1.綠原酸對(duì)照品；2.陜西臨潼產(chǎn)金銀花；3.山東九間棚金銀花；4.河南封丘金銀花Fig.1 HPLC chromatograms1.chlorogenic acid reference；2.Shaanxi Lintong；3.Shandong Jiujianpeng；4.He′nan Fengqiu

2.1.5 測定結(jié)果 精密稱定不同產(chǎn)地金銀花藥材各3批按以上方法測定綠原酸的含量，每種產(chǎn)地測定值取平均值，結(jié)果見表1。

2.2 木犀草苷含量測定 按照《中國藥典》2010年版金銀花藥材項(xiàng)下的含量測定方法。

2.2.1 色譜條件 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈（A）和5mL·L－1冰醋酸水溶液（B）為流動(dòng)相，采用梯度洗脫（0～15min，10%～20%A；15～30min，20%A；30～40min，20%～30%A）。流速1.0mL·L－1；檢測波長350nm；進(jìn)樣量10μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取木犀草苷對(duì)照品適量，加體積分?jǐn)?shù)70%乙醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱定幾種樣品粉末各2.0g，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，精密量取濾液10mL，回收溶劑至干，殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)70%乙醇至刻度，搖勻即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。

2.2.5 測定結(jié)果 精密稱定不同產(chǎn)地金銀花藥材各3批按以上方法測定木犀草苷的含量，每種產(chǎn)地測定值取平均值，結(jié)果見表1。

表1 不同產(chǎn)地忍冬中不同藥用部位的綠原酸及木犀草苷含量Tab.1 The content of chlorogenic acid and luteoloside extracted from different samples（n＝3）

3 討論

《中國藥典》中規(guī)定的金銀花的指標(biāo)性成分為綠原酸和木犀草苷。由表1可知，在金銀花中，綠原酸的含量為：山東九間棚＞河南封丘＞引種山東九間棚＞引種河南封丘＞陜西臨潼本地野生；木犀草苷的含量為：河南封丘＞山東九間棚＞引種河南封丘＞引種山東九間棚＞陜西臨潼本地產(chǎn)。2種成分均高于2010年版《中國藥典》中規(guī)定的綠原酸含量不得少于1.5%、木犀草苷含量不得少于0.05%的標(biāo)準(zhǔn)。

從表1中可以看出，山東九間棚種金銀花，原產(chǎn)地藥材和引種地藥材中綠原酸含量均高于河南封丘種，但源于河南封丘種的金銀花，其中的木犀草苷含量要高于山東九間棚種。對(duì)比原產(chǎn)地和引種栽培地藥材中的含量，2種成分均低于原產(chǎn)地。陜西臨潼的地理位置是北緯34.36°、東經(jīng)109.21°，其維度與河南封丘（北緯34.35°、東經(jīng)114.14°）和山東九間棚（北緯35.05°、東經(jīng)118.35°）相近。氣候適宜忍冬的生長，對(duì)將河南封丘和山東九間棚忍冬優(yōu)良種移栽后有效成分含量下降的問題，需要從后繼的分子生藥學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行說明。

考察引種種和本地野生種中有效成分含量的變化，從表1中可以看出，引種種的有效成分含量均明顯高于本地野生種，這一結(jié)果說明，引種種與本地野生種相比，具有較好的二次產(chǎn)物代謝基因?？疾煲N種不同藥用部位中的有效成分含量，結(jié)果表明，河南封丘的引種種無論是綠原酸還是木犀草苷，均優(yōu)于山東九間棚引種種。同時(shí)，考察莖和葉中含量的差異，由表1可知，在引種種或本地野生種不同部位中，綠原酸的含量均是花蕾＞葉＞莖。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，花蕾中綠原酸含量與葉、莖的含量差異顯著。張永清等［7］運(yùn)用紫外分光光度法對(duì)金銀花莖、葉、花不同器官中的綠原酸含量進(jìn)行了測定，研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

綜上所述：2種引種種的有效成分含量均低于原產(chǎn)地，但明顯高于本地野生種，且符合《中國藥典》2010年版的要求。引種種的栽培能在一定程度上提高陜西產(chǎn)金銀花的市場競爭力，并且可以補(bǔ)充金銀花市場需要，有較高的市場價(jià)值。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版［S］.一部 .北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：205－206.

［2］常鎖.金銀花藥理研究概況［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2010，19（1）：49.

［3］石鉞，石任兵，陸蘊(yùn)如.我國藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.中國藥學(xué)雜志，1999，34（11）：724－727.

［4］龐瑞.金銀花有效成分的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，34（3）：77－79.

［5］徐炳聲.金銀花的原植物研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，14（1）：23－24.

［6］李樹本，石玉.六種金銀花中綠原酸含量分析［J］.西北藥學(xué)雜志，1986，1（3）：26－28.

［7］張永清 ，徐凌川 ，丁麗萍.忍冬不同部位中綠原酸的含量測定［J］.中國中藥雜志，1996，21（4）：204－205.