水楊酸、萘乙酸和青霉素對(duì)大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌及野蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響

王明慧，郜 丹，宋曉麗，李國(guó)光，陳有君，劉 萌，李立民

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

褐環(huán)粘蓋牛肝菌 (Suillus luteus(L.:Fr.)Gray)、野蘑菇(Agaricus arvensis Schaeff.:Fr.)、大白 樁 菇 (Leucopaxillus giganteus(Sow.:Fr.)Sing.)均為優(yōu)良的食用菌，有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健作用［1-3］。但是在人工培養(yǎng)過程中菌絲生長(zhǎng)緩慢、易老化，不利于生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用，所以尋找加快其生長(zhǎng)的培養(yǎng)方法具有重要意義。研究表明某些植物類激素及細(xì)菌抗生素類化合物有促進(jìn)真菌菌絲生長(zhǎng)的作用。水楊酸的高效、低成本、無毒、無殘留等特點(diǎn)，使其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用中顯示出廣闊的前景［4］。紀(jì)秀娥等［5］研究發(fā)現(xiàn)低濃度的水楊酸對(duì)所試3株平菇(平菇夏王、蘇云6號(hào)和9400)菌絲的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，而較高濃度則呈現(xiàn)抑制作用。侯集瑞等［6］研究發(fā)現(xiàn)在濃度2～10 μg/mL范圍內(nèi)的α-萘乙酸對(duì)羊肚菌菌絲體生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，以5 μg/mL時(shí)促進(jìn)作用較強(qiáng);而20～40 μg/mL濃度范圍內(nèi)有一定的抑制作用。毛慧玲等［7］研究表明，α-萘乙酸對(duì)茶樹菇菌絲生長(zhǎng)起抑制作用，且濃度越低抑制作用越強(qiáng)。Nuhu Alam等［8］研究了萘乙酸對(duì)平菇生長(zhǎng)的作用。古紅梅等［9］研究發(fā)現(xiàn)在所配制100 mL培養(yǎng)基中加入1 mL(1.28×10－3)～(6.40 ×10－3)U/mL 青霉素溶液，對(duì)木耳菌絲生長(zhǎng)具有顯著促進(jìn)作用。但這些非真菌類調(diào)節(jié)劑類化合物對(duì)真菌的作用具有普遍性還是特殊性作用還屬未知，也還未見報(bào)道水楊酸、萘乙酸及青霉素對(duì)大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌和野蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響。為了弄清這些問題，本文探究了3種真菌菌絲在一定濃度的水楊酸、萘乙酸和青霉素作用下生長(zhǎng)情況。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株來源 試驗(yàn)菌株褐環(huán)粘蓋牛肝菌(Sp9、00牛)由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)菌根生物技術(shù)研究室提供，野蘑菇菌株分離自山西省右玉縣的野生種，大白樁菇菌株分離自錫林郭勒盟的野生菌株。

1.2 方法

1.2.1 處理 將配置好的水楊酸、萘乙酸、青霉素溶液，用已滅菌的細(xì)菌過濾滅菌器過濾后，加入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，配制成含有不同濃度水楊酸、萘乙酸、青霉素的培養(yǎng)基。褐環(huán)粘蓋牛肝菌采用Pach培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基［10］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 4.76 × 10－10、2.38 × 10－9、4.76×10－9、2.38 × 10－8、4.76 × 10－8、4.76 × 10－7、4.76 ×10－6、4.76 ×10－5、1.90 ×10－4g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為 0.95、1.90、2.85、3.80、4.75 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為4.57×10－7、4.57 ×10－6、4.57 × 10－5、4.57 × 10－4、4.57×10－3g/mL。野蘑菇采用CYM培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基［11］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 5.6×10－9、5.6 × 10－8、5.6 × 10－7、5.6 × 10－6、5.6 ×10－5g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為0.0566、0.283、0.566、0.849、1.132 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為 0.188 ×10－6、0.188 ×10－5、0.188×10－4、0.188 × 10－3、0.188 × 10－2g/mL。大白樁菇采用PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基［12］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 5.6 ×10－9、5.6 ×10－8、5.6×10－7、5.6 × 10－6、5.6 × 10－5、1.07 × 10－4、1.94×10－4g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為0.0566、0.566、1.132 、1.698、2.264 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為 0.188 ×10－6、0.188 ×10－5、0.188 ×10－4、0.188 × 10－3、0.188 × 10－2g/mL。以不添加藥品的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對(duì)照，每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)。用6 mm打孔器打取菌塊，接于固體平板上，于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2.2 菌落直徑和菌絲干重的測(cè)定 每2 d測(cè)定1次菌落直徑大小。以菌落中心為中心點(diǎn)，在平板上劃“十”字，用游標(biāo)卡尺在2條線上測(cè)量長(zhǎng)度，再取2次的平均值作為菌落大小，以統(tǒng)計(jì)菌絲的生長(zhǎng)情況。最后1次測(cè)定直徑后，將菌落用接種刀取出，在沸水浴中煮掉菌絲上培養(yǎng)基，用吸水紙吸干，包在烘干稱量過的稱量紙中，在烘干箱中烘干至恒重，測(cè)量菌絲的干重。

2 結(jié)果與分析

2.1 水楊酸對(duì)3種真菌生長(zhǎng)的影響

2.1.1 水楊酸對(duì)大白樁菇生長(zhǎng)的影響 不同濃度水楊酸處理大白樁菇菌絲生長(zhǎng)的趨勢(shì)曲線見圖1、圖2所示，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－8)g/mL范圍內(nèi)，大白樁菇菌落直徑及菌絲干重與對(duì)照相比均沒有顯著性差異;水楊酸濃度在(5.6×10－7)～(5.6×10－5)g/mL 范圍內(nèi)，隨著濃度升高，大白樁菇菌落直徑和菌絲干重增大，且大于對(duì)照。濃度為(5.6 ×10－7)、(5.6 ×10－5)g/mL的處理菌落直徑顯著高于對(duì)照，5.6×10－6g/mL濃度下菌落直徑極顯著高于對(duì)照、菌絲干重顯著高于對(duì)照，5.6×10－5g/mL濃度下菌絲干重極顯著高于對(duì)照。水楊酸濃度大于5.6×10－5g/mL條件下，隨著水楊酸濃度升高，菌落直徑和菌絲干重減小，在1.94×10－4g/mL濃度下菌絲不生長(zhǎng)。由此得知，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－8g/mL)范圍內(nèi)對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)沒有影響，濃度在5.6×10－7～5.6 ×10－5g/mL 范圍內(nèi)能夠促進(jìn)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)，濃度大于1.07×10－4g/mL則抑制大白樁菇菌絲生長(zhǎng)。

圖1 大白樁菇菌落直徑隨水楊酸濃度的變化趨勢(shì)Fig.1 Trendes of Leucopaxillus giganteus colony diameters with the concentration of salicylic acid

圖2 大白樁菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢(shì)Fig.2 Trend of the dry weight of Leucopaxillus giganteus mycelium with the concentration of salicylic acid

2.1.2 水楊酸對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌生長(zhǎng)的影響不同濃度水楊酸對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌落直徑的影響見圖3。培養(yǎng)基中水楊酸濃度在0～4.76×10－7g/mL范圍內(nèi)，不同處理間菌落直徑?jīng)]有顯著差異;濃度大于4.76×10－7g/mL條件下，隨著水楊酸濃度增加，Sp9菌落直徑逐漸減小，且小于對(duì)照。水楊酸濃度大于4.76×10－5g/mL條件下，與對(duì)照相比差異達(dá)到極顯著水平，1.90×10－4g/mL濃度處理菌絲完全沒有生長(zhǎng)。由此可知，水楊酸濃度在(4.76 ×10－10)～(4.76 ×10－7)g/mL范圍內(nèi)，對(duì)Sp9菌落直徑生長(zhǎng)無明顯作用;濃度大于4.76×10－6g/mL時(shí)抑制 Sp9菌落直徑的增長(zhǎng)，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)，致死濃度可能不大于1.90 ×10－4g/mL。

圖3 Sp9菌落直徑隨水楊酸濃度的變化趨勢(shì)Fig.3 Trendes of Sp9 colony diameters with the concentration of salicylic acid

不同濃度水楊酸對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌絲干重的影響情況見圖4。水楊酸濃度小于4.76×10－10g/mL的處理，菌絲干重與對(duì)照基本相同;水楊酸濃度在 (4.76×10－9) ～ (4.76×10－6)g/mL范圍內(nèi)菌絲干重均大于對(duì)照組，但是t檢驗(yàn)差異都沒有達(dá)到顯著水平，4.76×10－7g/mL濃度處理菌絲干重與對(duì)照之間差值最大 (P=0.08)。水楊酸濃度大于4.76×10－7g/mL條件下，隨著濃度增加，菌絲干重減小;濃度大于4.76×10－5g/mL條件下，菌絲干重小于對(duì)照組，1.90×10－4g/mL濃度下菌絲干重增長(zhǎng)為零。由此可見，水楊酸濃度在 (4.76×10－10) ～(4.76×10－6)g/mL范圍內(nèi)有促進(jìn)Sp9菌絲重量增長(zhǎng)的作用，濃度高于4.76×10－6g/mL時(shí)則抑制菌絲重量增長(zhǎng)。

圖4 Sp9菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢(shì)Fig.4 Trend of the dry weight of Sp9 mycelium with the concentration of salicylic acid

2.1.3 水楊酸對(duì)野蘑菇生長(zhǎng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)不同濃度水楊酸處理，野蘑菇菌絲生長(zhǎng)沒有表現(xiàn)出明顯差異，各濃度水楊酸處理下菌落直徑相差不大，而菌絲干重有所差異。野蘑菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化曲線如圖5所示。經(jīng)不同濃度水楊酸的處理，野蘑菇菌絲干重均低于對(duì)照，且隨水楊酸濃度的增加，菌絲干重大致呈遞減趨勢(shì)。在5.6×10－6g/mL濃度下菌絲干重與對(duì)照有顯著差異，5.6×10－5g/mL濃度下菌絲干重與對(duì)照相比有極顯著差異。由此得知，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－5)g/mL范圍內(nèi)對(duì)野蘑菇菌落直徑大小無明顯影響，但是菌絲干重降低，菌絲稀疏、徒長(zhǎng)是菌絲干重降低的原因。

圖5 野蘑菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢(shì)Fig.5 Trend of the dry weight of Agaricus arvensis Schaeff mycelium with the concentration of salicylic acid

2.2 萘乙酸對(duì)3種真菌生長(zhǎng)的影響

2.2.1 萘乙酸對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)的影響 不同濃度萘乙酸對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)的影響如圖6、圖7所示。所有濃度萘乙酸處理大白樁菇菌落直徑及菌絲干重均大于對(duì)照，在0.0566～0.566 mg/L濃度范圍內(nèi)大白樁菇菌落直徑及菌絲干重逐漸增大，在0.566～2.264 mg/L濃度范圍內(nèi)菌落直徑及菌絲干重逐漸減小，但仍大于對(duì)照。萘乙酸濃度在2.264 mg/L下菌落直徑與對(duì)照相比達(dá)到顯著水平。由此可看出，萘乙酸濃度在0.0566～2.264 mg/L范圍內(nèi)對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用。

圖6 大白樁菇菌落直徑隨萘乙酸濃度變化曲線Fig.6 The curves of Leucopaxillus giganteus colony diameters with the concentration of naphthylacetic acid

圖7 大白樁菇菌絲干重隨萘乙酸濃度的變化曲線Fig.7 The curves of the dry weight of Leucopaxillus giganteus mycelium with the concentration of naphthylacetic acid

2.2.2 萘乙酸對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌及野蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，經(jīng)不同濃度萘乙酸處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9、00牛及野蘑菇菌絲生長(zhǎng)雖然有所差異，但與對(duì)照相比差異不明顯，經(jīng)t檢驗(yàn)分析可知沒有達(dá)到顯著水平。所以，在所試萘乙酸濃度范圍內(nèi)對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9、00牛及野蘑菇菌絲生長(zhǎng)沒有影響。

2.3 青霉素對(duì)3種真菌生長(zhǎng)的影響

2.3.1 青霉素對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲生長(zhǎng)的影響 由不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌落直徑生長(zhǎng)情況如圖8所示。經(jīng)不同濃度青霉素處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌落直徑生長(zhǎng)小于對(duì)照，且濃度越高菌落直徑越小。青霉素濃度在(4.57×10－6)～(4.57×10－4)g/mL范圍內(nèi)，00牛菌落直徑顯著低于對(duì)照，濃度在4.57×10－3g/mL條件下00牛菌落直徑極顯著低于對(duì)照。經(jīng)不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌落直徑也小于對(duì)照，在(4.57×10－6)～(4.57×10－3)g/mL范圍內(nèi)，隨著濃度的升高，Sp9菌落直徑減小。經(jīng)4.57×10－3g/mL濃度處理，Sp9菌落直徑顯著低于對(duì)照，經(jīng)4.57×10－7、4.57×10－6g/mL濃度處理，Sp9菌落直徑極顯著低于對(duì)照。由此可知，青霉素濃度在(4.57×10－7)～(4.57×10－3)g/mL 范圍內(nèi)對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌落直徑生長(zhǎng)具有抑制作用，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)。

圖8 00牛菌落直徑隨青霉素濃度變化趨勢(shì)Fig.8 Trendes of 00 cattle colony diameters with the concentration of penicillin

由不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌絲干重情況如圖9所示。經(jīng)不同濃度青霉素處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌絲干重小于對(duì)照，且濃度越高菌絲干重越小。青霉素濃度在4.57×10－5、4.57 ×10－4g/mL 條件下 00 牛菌絲干重與對(duì)照相比達(dá)到極顯著差異。經(jīng)不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌絲干重小于對(duì)照，且濃度越高菌絲干重越小。經(jīng)4.57×10－4g/mL濃度處理，Sp9菌絲干重顯著低于對(duì)照。由此看出，青霉素濃度在 4.57 ×10－7～4.57 ×10－3g/mL范圍內(nèi)對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲干重具有抑制作用。

圖9 00牛菌絲干重隨青霉素濃度變化趨勢(shì)Fig.9 Trend of the dry weight of 00 cattle mycelium with the concentration of penicillin

2.3.2 青霉素對(duì)大白樁菇及野蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，青霉素在較低濃度(小于1.88×10－5g/mL)下對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，但促進(jìn)作用不明顯;濃度大于1.88×10－5g/mL下對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)起抑制作用。由不同濃度青霉素處理后的野蘑菇菌絲生長(zhǎng)之間沒有表現(xiàn)出明顯差異，所以培養(yǎng)基中青霉素濃度在(1.88×10－7)～(1.88 ×10－3)g/mL 范圍內(nèi)對(duì)野蘑菇菌絲生長(zhǎng)沒有影響。

3 討論

經(jīng)過試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，水楊酸在較低濃度下能夠促進(jìn)某些真菌(如大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌等)菌絲生長(zhǎng)，較高濃度下則抑制真菌菌絲生長(zhǎng)，甚至使真菌致死?？梢酝ㄟ^加入適量的水楊酸加快大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲的生長(zhǎng)速度，且水楊酸在低濃度下不僅對(duì)人體無害，而且還有殺菌、消炎等功效。

萘乙酸在較低濃度下會(huì)促進(jìn)大白樁菇菌絲的生長(zhǎng)，但對(duì)褐環(huán)粘蓋牛肝菌、野蘑菇菌絲生長(zhǎng)基本無影響。萘乙酸是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，也可以促進(jìn)某些真菌的生長(zhǎng)。值得注意的是萘乙酸對(duì)人體有一定毒性，在使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制用量。

青霉素在較低濃度下既能夠促進(jìn)大白樁菇菌絲的生長(zhǎng)，也能夠抑制褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲生長(zhǎng)，但對(duì)某些真菌 (如野蘑菇)無明顯影響。青霉素雖然是一類抗生素，但同時(shí)也可以促進(jìn)某些真菌的生長(zhǎng)，這其中的作用機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

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