急慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血淋巴細胞亞群的表達

張紅　劉慶華　田芳

【摘要】 目的 檢測急慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）患者外周血淋巴細胞亞群， 并探討其在發(fā)病機制中的作用。方法 選擇74例ITP患者及30例健康查體人員的外周血， 采用流式細胞術(shù)檢測淋巴細胞亞群（CD3+， CD3+CD4+， CD3+CD8+， CD4+/CD8+， CD19+）。結(jié)果 ① ITP患者淋巴細胞亞群CD3+CD4+為（34.15±8.55）%， 正常對照組為（36.74±3.65）%， t=2.166， P=0.033；ITP患者CD4+/CD8+為（1.24±0.44）%， 正常對照組為（1.48±0.25）%， t=3.582， P=0.001；ITP患者CD3+CD8+為（30.63±7.72）%， CD19+為（18.23±7.67）%， 均顯著高于正常對照組（P=0.000）。② 急性ITP患者外周血CD19+細胞比例為（22.6±7.25）%， 慢性ITP患者為（14.14±5.57）%， 兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.677， P=0.000）；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例為（76.02±11.00）%， 急性ITP患者為（66.82±10.95）%， t=3.583， P=0.001。結(jié)論 ITP的發(fā)生不僅存在B淋巴細胞異常， 也存在T淋巴細胞的異常。急性ITP患者以體液免疫功能亢進為主， 慢性患者則表現(xiàn)為細胞免疫功能亢進為主。

【關(guān)鍵詞】 特發(fā)性血小板減少性紫癜；淋巴細胞亞群；細胞免疫；體液免疫

【Abstract】 Objective To detect the expression of peripheral blood lymphocyte subpopulation in patients with acute and chronic idiopathic thrombocytopenic purpura （ITP）， and to investigate its influence on pathogenesis. Methods The expression of lymphocyte subpopulation （CD3+， CD3+CD4+， CD3+CD8+， CD4+/CD8+， CD19+） in the peripheral blood was analyzed using flow cytometry in 74 patients with ITP and 30 healthy people. Results ① CD3+CD4+ of lymphocyte subpopulation in patients with ITP was （34.15±8.55）%， while that of the control group was （36.74±3.65）% （t=2.166， P=0.033）. CD4+/CD8+ of lymphocyte subpopulation in patients with ITP was （1.24±0.44）%， and that of the control group was （1.48±0.25）% （t=3.582， P=0.001）. CD3+CD8+ and CD19+ of lymphocyte subpopulation in patients with ITP were （30.63±7.72）% and （18.23±7.67） %， and they were all obviously higher than the control group （P=0.000）.② The proportion of CD19+ B cells in peripheral Blood of acute ITP patients was （22.6±7.25）%， and that was （14.14±5.57%） for chronic ITP patients. The difference had statistical significance （t=5.677， P=0.000）. The proportion of CD3+ T cells in chronic ITP patients was （76.02±11.00）%， while that in acute ITP patients was （66.82±10.95）% （t=3.583， P=0.001）. Conclusion ITP patients are disorder with B and T lymphocyte. Acute patients always accompanied with hyperfunctioning of humoral immune， while the chronic ones were with hyperfunctioning of cellular immune.

【Key words】 Idiopathic thrombocytopenic purpura； Lymphocyte subpopulation； Cellular immune； Humoral immune

特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura， ITP）是一種獲得性器官特異性自身免疫性疾病， 以免疫介導(dǎo)的血小板減少為特征。其發(fā)病原因目前尚不清楚， 發(fā)病機制也未完全闡明， 涉及免疫、遺傳、環(huán)境等多方面因素。但是目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ITP患者在人體免疫調(diào)節(jié)的許多環(huán)節(jié)都存在異常。本研究通過分析ITP患者外周血的淋巴細胞亞群的表達， 探討ITP患者的免疫狀態(tài)與其發(fā)病機制的關(guān)系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2011年11月～2013年6月在泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診的74例ITP患者， 男28例， 女46例， 平均年齡36歲（3～77歲）。74例患者中急性型33例， 慢性型41例， 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻[1]。對照組為30例健康查體人員， 男10例， 女20例， 平均年齡37.5歲（21～58歲）。endprint

1. 2 標(biāo)本的采集 取患者及健康查體人員的外周血標(biāo)本2 ml， 采用肝素抗凝， 立即送檢。急性ITP患者于治療前采集外周血標(biāo)本， 慢性ITP患者采集標(biāo)本時血小板水平低于100×109/L。

1. 3 方法 流式細胞儀測定淋巴細胞亞群。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 ITP患者淋巴細胞亞群的表達 ITP患者淋巴細胞亞群CD3+CD4+為（34.15±8.55）%， 對照組為（36.74±3.65）%， t=2.166， P=0.033；ITP患者CD4+/CD8+為（1.24±0.44）%， 對照組為（1.48±0.25）%， t=3.582， P=0.001；ITP患者CD3+CD8+為（30.63±7.72）%， CD19+為（18.23±7.67）%， 均顯著高于正對照組（P=0.000）。見表1。

2. 2 急慢性ITP患者淋巴細胞亞群的表達 急性ITP患者外周血CD19+細胞比例為（22.60±7.25）%， 慢性ITP患者為（14.14±5.57）%， 兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.677， P=0.000）；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例為（76.02± 11.00）%， 急性ITP患者為（66.82±10.95）%， t=3.583， P=0.001。

3 討論

ITP是臨床上最為常見的血小板減少癥， 發(fā)病率約為5～10/10萬人口[2]， 因為尚無明確的實驗室檢查指標(biāo)，現(xiàn)在ITP診斷仍為排除性診斷。近年來，隨著細胞生物學(xué)和分子免疫學(xué)的飛速發(fā)展，國內(nèi)外針對ITP的病因和發(fā)病機制開展了一系列研究性試驗。目前認為ITP的發(fā)生主要與免疫功能紊亂相關(guān)。不僅包括B淋巴細胞功能異常， 而且存在T淋巴細胞表達及功能的異常改變。自身反應(yīng)性T細胞識別血小板抗原特定表位，進而活化，分泌細胞因子，并與相應(yīng)B淋巴細胞作用，激活B淋巴細胞， B淋巴細胞增殖分化為漿細胞，導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生。目前認為ITP患者血小板自身抗體主要是針對血小板膜糖蛋白 GPⅡb/Ⅲa和GP Ib/Ⅸ[3]。既然T淋巴細胞各亞群間正常的比例和功能是保持人體正常免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)。那么， T淋巴細胞比例的失調(diào)就可以引起B(yǎng)淋巴細胞激活的增加， 從而產(chǎn)生抗血小板抗體， 使血小板的破壞增加[4]。因此， 目前學(xué)者認為T淋巴細胞功能和比例失調(diào)導(dǎo)致B細胞激活是ITP主要的發(fā)病機制[5]。

CD4+T細胞可輔助B淋巴細胞產(chǎn)生抗體及分泌細胞因子， 起輔助細胞和體液免疫的作用；CD8+T細胞具有細胞毒作用， 抑制細胞和體液免疫。輔助性T細胞/細胞毒性T細胞的平衡在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)ITP患者淋巴細胞亞群CD4+、CD4+/CD8+比例低于正常對照組， 而CD8+、CD19+比例高于正常對照組， 說明了ITP的發(fā)生不僅存在B淋巴細胞異常， 也存在T淋巴細胞的異常。進一步分析發(fā)現(xiàn)， 急性ITP患者CD19+細胞比例高于慢性ITP患者；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例高于急性ITP患者。說明急性ITP和慢性ITP 的發(fā)病機制存在一定的差異， 急性ITP患者是以體液免疫功能亢進為主， 慢性ITP患者則以細胞免疫功能亢進為主。認識急慢性ITP發(fā)病機制的不同對治療方案的選擇具有一定的指導(dǎo)意義[7]。急性ITP患者以體液免疫功能亢進為主， 應(yīng)用糖皮質(zhì)激素往往能夠收到較好效果， 而存在細胞免疫功能亢進、對于糖皮質(zhì)激素治療欠佳的慢性ITP患者， 使用抑制細胞免疫功能的藥物對治療可能會有較大的幫助。

參考文獻

[1] 張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn).第2版.北京：科學(xué)技術(shù)出版社， 1998：279-289.

[2] 陸再英， 鐘南山. 內(nèi)科學(xué). 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2008：648- 649.

[3] 張之南， 郝玉書， 趙永強， 等.血液病學(xué).第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2011：1273-1280.

[4] Kuwana M， Kaburaki J， Kitasato H， et al. Immunodominant epitopes on glycoprote inⅡb/Ⅲa recognized by autoreactive T cells in patients with immune thrombocytopenic purpura. Blood， 2001， 98（1）：130-139.

[5] 張峰， 侯明. T 細胞異常與特發(fā)性血小板減少性紫癜. 中華血液學(xué)雜志， 2005， 26（3）：188 -190.

[6] Haggqvist B， Hultman P. Effects of deviating the Th2-response in murine mercury-induced autoimmunity towards a Th1-response.Clin Exp Immunol， 2003， 134（2）：202-209.

[7] 伍星， 瞿文 ， 王珺， 等. 免疫性血小板減少癥125 例臨床分析.中國實驗血液學(xué)雜志， 2011， 19（2）：450-454.

[收稿日期：2014-05-06]endprint

1. 2 標(biāo)本的采集 取患者及健康查體人員的外周血標(biāo)本2 ml， 采用肝素抗凝， 立即送檢。急性ITP患者于治療前采集外周血標(biāo)本， 慢性ITP患者采集標(biāo)本時血小板水平低于100×109/L。

1. 3 方法 流式細胞儀測定淋巴細胞亞群。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 ITP患者淋巴細胞亞群的表達 ITP患者淋巴細胞亞群CD3+CD4+為（34.15±8.55）%， 對照組為（36.74±3.65）%， t=2.166， P=0.033；ITP患者CD4+/CD8+為（1.24±0.44）%， 對照組為（1.48±0.25）%， t=3.582， P=0.001；ITP患者CD3+CD8+為（30.63±7.72）%， CD19+為（18.23±7.67）%， 均顯著高于正對照組（P=0.000）。見表1。

2. 2 急慢性ITP患者淋巴細胞亞群的表達 急性ITP患者外周血CD19+細胞比例為（22.60±7.25）%， 慢性ITP患者為（14.14±5.57）%， 兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.677， P=0.000）；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例為（76.02± 11.00）%， 急性ITP患者為（66.82±10.95）%， t=3.583， P=0.001。

3 討論

ITP是臨床上最為常見的血小板減少癥， 發(fā)病率約為5～10/10萬人口[2]， 因為尚無明確的實驗室檢查指標(biāo)，現(xiàn)在ITP診斷仍為排除性診斷。近年來，隨著細胞生物學(xué)和分子免疫學(xué)的飛速發(fā)展，國內(nèi)外針對ITP的病因和發(fā)病機制開展了一系列研究性試驗。目前認為ITP的發(fā)生主要與免疫功能紊亂相關(guān)。不僅包括B淋巴細胞功能異常， 而且存在T淋巴細胞表達及功能的異常改變。自身反應(yīng)性T細胞識別血小板抗原特定表位，進而活化，分泌細胞因子，并與相應(yīng)B淋巴細胞作用，激活B淋巴細胞， B淋巴細胞增殖分化為漿細胞，導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生。目前認為ITP患者血小板自身抗體主要是針對血小板膜糖蛋白 GPⅡb/Ⅲa和GP Ib/Ⅸ[3]。既然T淋巴細胞各亞群間正常的比例和功能是保持人體正常免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)。那么， T淋巴細胞比例的失調(diào)就可以引起B(yǎng)淋巴細胞激活的增加， 從而產(chǎn)生抗血小板抗體， 使血小板的破壞增加[4]。因此， 目前學(xué)者認為T淋巴細胞功能和比例失調(diào)導(dǎo)致B細胞激活是ITP主要的發(fā)病機制[5]。

CD4+T細胞可輔助B淋巴細胞產(chǎn)生抗體及分泌細胞因子， 起輔助細胞和體液免疫的作用；CD8+T細胞具有細胞毒作用， 抑制細胞和體液免疫。輔助性T細胞/細胞毒性T細胞的平衡在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)ITP患者淋巴細胞亞群CD4+、CD4+/CD8+比例低于正常對照組， 而CD8+、CD19+比例高于正常對照組， 說明了ITP的發(fā)生不僅存在B淋巴細胞異常， 也存在T淋巴細胞的異常。進一步分析發(fā)現(xiàn)， 急性ITP患者CD19+細胞比例高于慢性ITP患者；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例高于急性ITP患者。說明急性ITP和慢性ITP 的發(fā)病機制存在一定的差異， 急性ITP患者是以體液免疫功能亢進為主， 慢性ITP患者則以細胞免疫功能亢進為主。認識急慢性ITP發(fā)病機制的不同對治療方案的選擇具有一定的指導(dǎo)意義[7]。急性ITP患者以體液免疫功能亢進為主， 應(yīng)用糖皮質(zhì)激素往往能夠收到較好效果， 而存在細胞免疫功能亢進、對于糖皮質(zhì)激素治療欠佳的慢性ITP患者， 使用抑制細胞免疫功能的藥物對治療可能會有較大的幫助。

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[7] 伍星， 瞿文 ， 王珺， 等. 免疫性血小板減少癥125 例臨床分析.中國實驗血液學(xué)雜志， 2011， 19（2）：450-454.

[收稿日期：2014-05-06]endprint

1. 2 標(biāo)本的采集 取患者及健康查體人員的外周血標(biāo)本2 ml， 采用肝素抗凝， 立即送檢。急性ITP患者于治療前采集外周血標(biāo)本， 慢性ITP患者采集標(biāo)本時血小板水平低于100×109/L。

1. 3 方法 流式細胞儀測定淋巴細胞亞群。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 ITP患者淋巴細胞亞群的表達 ITP患者淋巴細胞亞群CD3+CD4+為（34.15±8.55）%， 對照組為（36.74±3.65）%， t=2.166， P=0.033；ITP患者CD4+/CD8+為（1.24±0.44）%， 對照組為（1.48±0.25）%， t=3.582， P=0.001；ITP患者CD3+CD8+為（30.63±7.72）%， CD19+為（18.23±7.67）%， 均顯著高于正對照組（P=0.000）。見表1。

2. 2 急慢性ITP患者淋巴細胞亞群的表達 急性ITP患者外周血CD19+細胞比例為（22.60±7.25）%， 慢性ITP患者為（14.14±5.57）%， 兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.677， P=0.000）；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例為（76.02± 11.00）%， 急性ITP患者為（66.82±10.95）%， t=3.583， P=0.001。

3 討論

ITP是臨床上最為常見的血小板減少癥， 發(fā)病率約為5～10/10萬人口[2]， 因為尚無明確的實驗室檢查指標(biāo)，現(xiàn)在ITP診斷仍為排除性診斷。近年來，隨著細胞生物學(xué)和分子免疫學(xué)的飛速發(fā)展，國內(nèi)外針對ITP的病因和發(fā)病機制開展了一系列研究性試驗。目前認為ITP的發(fā)生主要與免疫功能紊亂相關(guān)。不僅包括B淋巴細胞功能異常， 而且存在T淋巴細胞表達及功能的異常改變。自身反應(yīng)性T細胞識別血小板抗原特定表位，進而活化，分泌細胞因子，并與相應(yīng)B淋巴細胞作用，激活B淋巴細胞， B淋巴細胞增殖分化為漿細胞，導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生。目前認為ITP患者血小板自身抗體主要是針對血小板膜糖蛋白 GPⅡb/Ⅲa和GP Ib/Ⅸ[3]。既然T淋巴細胞各亞群間正常的比例和功能是保持人體正常免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)。那么， T淋巴細胞比例的失調(diào)就可以引起B(yǎng)淋巴細胞激活的增加， 從而產(chǎn)生抗血小板抗體， 使血小板的破壞增加[4]。因此， 目前學(xué)者認為T淋巴細胞功能和比例失調(diào)導(dǎo)致B細胞激活是ITP主要的發(fā)病機制[5]。

CD4+T細胞可輔助B淋巴細胞產(chǎn)生抗體及分泌細胞因子， 起輔助細胞和體液免疫的作用；CD8+T細胞具有細胞毒作用， 抑制細胞和體液免疫。輔助性T細胞/細胞毒性T細胞的平衡在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)ITP患者淋巴細胞亞群CD4+、CD4+/CD8+比例低于正常對照組， 而CD8+、CD19+比例高于正常對照組， 說明了ITP的發(fā)生不僅存在B淋巴細胞異常， 也存在T淋巴細胞的異常。進一步分析發(fā)現(xiàn)， 急性ITP患者CD19+細胞比例高于慢性ITP患者；而慢性ITP患者的CD3+細胞的比例高于急性ITP患者。說明急性ITP和慢性ITP 的發(fā)病機制存在一定的差異， 急性ITP患者是以體液免疫功能亢進為主， 慢性ITP患者則以細胞免疫功能亢進為主。認識急慢性ITP發(fā)病機制的不同對治療方案的選擇具有一定的指導(dǎo)意義[7]。急性ITP患者以體液免疫功能亢進為主， 應(yīng)用糖皮質(zhì)激素往往能夠收到較好效果， 而存在細胞免疫功能亢進、對于糖皮質(zhì)激素治療欠佳的慢性ITP患者， 使用抑制細胞免疫功能的藥物對治療可能會有較大的幫助。

參考文獻

[1] 張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn).第2版.北京：科學(xué)技術(shù)出版社， 1998：279-289.

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[3] 張之南， 郝玉書， 趙永強， 等.血液病學(xué).第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2011：1273-1280.

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[7] 伍星， 瞿文 ， 王珺， 等. 免疫性血小板減少癥125 例臨床分析.中國實驗血液學(xué)雜志， 2011， 19（2）：450-454.

[收稿日期：2014-05-06]endprint