EV71感染手足口病患兒細(xì)胞免疫及體液免疫功能變化研究

賴茂++倪明

[摘要]目的 研究EV71感染手足口病患兒細(xì)胞免疫及體液免疫功能的臨床變化特點(diǎn)。方法 隨機(jī)選取2014年1月～2015年6月醫(yī)院收診的60例EV71感染手足口病患兒，按照《手足口病診療指南（2010版）》將患兒分為輕型（A組）和重型（B組），再隨機(jī)選取2014年1月～2015年6月至醫(yī)院體檢的30例正常兒童作為對照組（C組），觀察比較三組靜脈血淋巴細(xì)胞（Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞、B細(xì)胞）、血清炎性介質(zhì)（TNF-α、IL-6、IL-10）、血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及補(bǔ)體（C3、C4）表達(dá)水平。結(jié)果 ①靜脈血淋巴細(xì)胞表達(dá)水平：A、B兩組的Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞表達(dá)水平顯著低于C組，B細(xì)胞表達(dá)水平高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②血清炎性介質(zhì)表達(dá)水平：A、B兩組的TNF-α、IL-6、IL-10表達(dá)水平顯著高于C組，且B組顯著高于A組（P<0.05）；③血清免疫球蛋白水平及補(bǔ)體水平：A、B兩組的IgA、IgG水平高于C組，且B組顯著高于A組（P<0.05）；三組的IgM水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A、B兩組的C3、C4水平顯著高于C組，且B組顯著高于A組（P<0.05）。結(jié)論 EV71感染手足口病患兒呈細(xì)胞及體液免疫功能異常表現(xiàn)，且與患兒的病情有一定的相關(guān)性，檢測相關(guān)血清指標(biāo)有助于提高臨床預(yù)后評估質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]EV71病毒；手足口?。患?xì)胞免疫；體液免疫

[中圖分類號] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）06（b）-0008-03

Study the changes of cellular immunity and humoral immune function in children with hand-foot-mouth disease in EV71

LAI Mao NI Ming

Department of Paediatrics，Children′s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province Institute of Pediatrics Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523325，China

[Abstract]Objective To study the changes of cellular immunity and humoral immune function in children with hand-foot-mouth disease in EV71.Methods 60 hand-foot-mouth disease children with EV71 infection who received diagnostic hospital from January 2014 to June 2015 were randomly selected and divided into light（group A） and heavy（group B） according to "Hand-foot-mouth disease diagnosis and treatment guidelines （2010 version）"，and then 30 healthy children to the hospital for medical examination from January 2014 to June 2015 were randomly selected as control group（group C）.The three sets of blood lymphocytes（Th cells，Ts cells，B cells），expression the level of serum inflammatory mediators（TNF-α，IL-6，IL-10） expression levels，differences in serum immunoglobulins（IgA，IgG，IgM） and complement levels（C3，C4） skill were observed.Results ①Blood lymphocyte expression levels：the Th cells，Ts cells express terms in group A and group B was significantly lower than that of group C，in terms of expressing B cells was higher than that of group C，the difference was statistically significant（P<0.05）.②The expression level of serum inflammatory mediators：the expression levels of TNF-α，IL-6，IL-10 in group A and group B was significantly higher than that of group C respectively，and group B was significantly higher than that of group A（P<0.05）.③The level of serum immunoglobulin and complement levels：the level of IgA，IgG in group A and group B was higher than that in group C，and group B was significantly higher than that of group A（P<0.05）.The difference of the terms IgM among the three groups was not statistically significant.The levels of C3，C4 in group A and group B was significantly higher than that of group C，and group B was significantly higher than that in group A（P<0.05）.Conclusion EV71 hand-foot-mouth disease infection child presenting cell and humoral immune function abnormalities，and have some correlation with children′ condition to detect serum markers associated help improve the quality of clinical prognosis.

[Key words]EV71 virus；Hand-foot-mouth disease；Cellular immunity；Humoral immunity

手足口病是一種臨床常見的傳染性疾病，主要由腸道薩科奇病毒及EV71病毒感染而導(dǎo)致的，且該病具有較強(qiáng)的傳染性，在我國各個(gè)區(qū)域都有出現(xiàn)[1]。EV71感染后，病毒繁殖迅速導(dǎo)致出現(xiàn)病毒血癥，對患兒組織及器官都有一定的影響，可能引發(fā)患兒出現(xiàn)多器官功能障礙，甚至出現(xiàn)功能衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥狀[2-3]。該病主要出現(xiàn)于手、足、口等部位的黏膜中及組織受壓位置，病毒聚集、繁殖從而導(dǎo)致局部組織出現(xiàn)病變[4]。隨著臨床醫(yī)學(xué)對手足口病的深入研究，發(fā)現(xiàn)病毒感染引起患兒機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞免疫及體液免疫在疾病進(jìn)展以及組織損傷中發(fā)揮了一定的作用[5]。文章主要就EV71感染手足口病患兒細(xì)胞免疫及體液免疫功能的臨床變化特點(diǎn)展開研究。

1資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)選取2014年1月～2015年6月醫(yī)院收診的60例EV71感染手足口病患兒，按照《手足口病診療指南（2010版）》[6]將患兒分為輕型（A組）和重型（B組），其中A組36例、B組24例；隨機(jī)選取2014年1月～2015年6月至醫(yī)院體檢正常的30例兒童作為對照組（C組）。所有患兒均經(jīng)PCR核酸檢驗(yàn)證實(shí)為EV71病毒感染[7]。A組36例患兒中男16例、女20例；年齡1～6歲，平均（3.4±0.6）歲；病程2～7 d，平均（3.1±1.0）d。B組24例患兒中男13例、女11例；年齡0.7～7歲，平均（3.6±0.5）歲；病程1～6 d，平均（3.6±1.1）d。C組30名兒童中男16例、女14例；年齡0.8～6歲，平均（3.5±0.3）歲。本次研究觀察排除應(yīng)用免疫抑制劑、結(jié)核性疾病、其他病毒感染疾病及免疫性疾病患兒。

1.2方法

1.2.1靜脈血淋巴細(xì)胞檢測方法 清晨空腹取血2 ml，加入淋巴細(xì)胞分離液后震蕩，離心淋巴細(xì)胞，將淋巴細(xì)胞放入PBS緩沖液后進(jìn)行上機(jī)檢驗(yàn)。

1.2.2血清炎性介質(zhì)檢測方法 清晨空腹取血2 ml，離心血清后低溫保存，并采用蒸餾水為空白對照，采用TNF-α、IL-10及IL-6檢測試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2.3血清免疫球蛋白水平及補(bǔ)體檢驗(yàn)方法 清晨空腹取血2 ml，離心血清后低溫保存，并依次加入一抗及二抗后室溫孵育，采用IgA、IgG、IgM、C3、C4檢測試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.3觀察指標(biāo)

觀察三組患者靜脈血淋巴細(xì)胞（Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞、B細(xì)胞）、血清炎性介質(zhì)（THF-α、IL-6、IL-10）、血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及補(bǔ)體（C3、C4）的表達(dá)水平。分別應(yīng)用血液檢測儀、比色法及放射免疫法進(jìn)行檢測[8-10]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組患者靜脈血淋巴細(xì)胞表達(dá)水平的比較

A組患者的Th細(xì)胞表達(dá)水平顯著低于C組（P<0.05）；B組患者的Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞表達(dá)水平顯著低于C組（P<0.05），B細(xì)胞表達(dá)水平高于C組（P<0.05）；B組患者的Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞表達(dá)水平顯著低于A組（P<0.05），B細(xì)胞表達(dá)水平高于A組（P<0.05）（表1）。

2.2三組患者血清炎性介質(zhì)表達(dá)水平的比較

A、B兩組患者的TNF-α、IL-6、IL-10表達(dá)水平顯著高于C組，且B組顯著高于A組（P<0.05）（表2）。

2.3三組血清免疫球蛋白水平及補(bǔ)體水平的比較

A、B兩組患者的IgA、IgG水平明顯高于C組，且B組顯著高于A組（P<0.05）；三組在IgM方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A、B兩組在C3、C4水平方面顯著高于C組，且B組高于A組（P<0.05）（表3）。

3討論

手足口病是一種常見的兒科傳染性疾病，該病發(fā)病隱匿、傳染迅速，且多種腸道病毒都可導(dǎo)致兒童患有手足口病，除了典型的皮膚皰疹及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀外，呈現(xiàn)多器官影響的特點(diǎn)，如心肌損傷等，重型患兒的生存率較低[11-12]。相關(guān)文獻(xiàn)[13]研究指出，手足口病患兒存在免疫因子及炎性因子表達(dá)異常的現(xiàn)象。因此，可以得出結(jié)論：免疫細(xì)胞及炎性因子參與了手足口病的發(fā)作及進(jìn)展。相關(guān)學(xué)者指出，手足口病患兒Th細(xì)胞出現(xiàn)免疫漂移現(xiàn)象，Th1向Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)變從而產(chǎn)生了免疫抑制效果，其同時(shí)也是促進(jìn)手足口病發(fā)展的重要機(jī)制之一[14]。健康人體中的Th1/Th2細(xì)胞處于動態(tài)平衡狀態(tài)，兩者之間的免疫應(yīng)答存在交互負(fù)反饋現(xiàn)象[15]。Th1細(xì)胞因子增長或Th2細(xì)胞因子降低都會導(dǎo)致免疫細(xì)胞對念珠菌的抑制效果受到影響。Th1細(xì)胞因子能夠通過激活巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞從而提高免疫功能；Th2細(xì)胞因子則能通過抑制Th1細(xì)胞因子的介導(dǎo)作用提高機(jī)體對致病菌的易感性[16]。

相關(guān)研究[17]指出，EV71感染手足口病患兒存在細(xì)胞免疫以及體液免疫異常的現(xiàn)象，患兒Th細(xì)胞以及Ts細(xì)胞表達(dá)下降，而B細(xì)胞上升，與本次研究調(diào)查結(jié)果一致。Th細(xì)胞具有激活免疫細(xì)胞及介導(dǎo)的作用，是維持人體免疫細(xì)胞系統(tǒng)正常運(yùn)作的重要調(diào)節(jié)機(jī)制之一；Ts細(xì)胞能夠激活Th細(xì)胞及B細(xì)胞，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，Th細(xì)胞及Ts細(xì)胞表達(dá)能夠反映患者的免疫狀況，Th細(xì)胞及Ts細(xì)胞下降能反映患者免疫能力受到抑制，且與患者的病情有一定的關(guān)聯(lián)[18]。

本研究觀察發(fā)現(xiàn)，患兒TNF-α、IL-6、IL-10表達(dá)水平較高。TNF-α、IL-6、IL-10是被激活的免疫細(xì)胞所釋放的介質(zhì)，TNF-α、IL-6能夠?qū)е聶C(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，且能夠?qū)е陆M織、器官損傷，甚至出現(xiàn)功能衰弱和組織損壞等嚴(yán)重后果；同時(shí)，TNF-α、IL-6對中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞具有介導(dǎo)及激活的效果，能夠激活炎性細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。IL-10能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫功能，該細(xì)胞的異常表達(dá)表明患兒體內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞免疫異常[19]。IgA、IgG對巨噬細(xì)胞及免疫細(xì)胞功能具有增強(qiáng)的效果，IgA能夠通過經(jīng)典途徑提高機(jī)體免疫功能[20]。補(bǔ)體C3、C4是肽類分子的一種，其能夠通過免疫細(xì)胞的激活，參與機(jī)體的非特異性免疫。

文章通過分析發(fā)現(xiàn)，EV71感染手足口病患兒Th細(xì)胞、Ts細(xì)胞表達(dá)水平顯著低于正常兒童，B細(xì)胞表達(dá)高于正常兒童；TNF-α、IL-6、IL-10表達(dá)水平顯著高于正常兒童；IgA、IgG水平高于正常兒童；且IgM水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C3、C4水平顯著高于正常兒童。說明EV71感染手足口病患兒呈現(xiàn)細(xì)胞及體液免疫功能異常表現(xiàn)，與患兒的病情呈一定的相關(guān)性，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

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（收稿日期：2016-02-02 本文編輯：王紅雙）