Notch1和c-myc在三陰乳腺癌中的表達(dá)及意義

秦景云

·論著·

Notch1和c-myc在三陰乳腺癌中的表達(dá)及意義

秦景云

目的檢測(cè)三陰乳腺癌組織(TNBC)中Notch1、c-myc表達(dá)并探討其意義。方法采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)63例TNBC組織和30例癌旁正常乳腺組織Notch1、c-myc的表達(dá)情況。結(jié)果TNBC組織中Notch1、c-myc陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，其表達(dá)率分別為71.43%(45/63)、69.84%(44/63)，明顯高于癌旁正常組織(P<0.01)；63例TNBC組織中，Notch1、c-myc蛋白在組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)(P<0.05)，Notch1、c-myc的病理分期Ⅲ-Ⅳ期的表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，Notch1、c-myc陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；相關(guān)性分析顯示，二者之間呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論Notch1、c-myc在TNBC中呈明顯高表達(dá)，與TNBC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

三陰乳腺癌；Notch1；c-myc；免疫組化

三陰乳腺癌(Triple negative breast cancer,INBC)是指雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone reeeptor,PR)和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor2,HER-2)都為陰性的乳腺癌亞型,是乳腺癌中的一種特殊類(lèi)型，占乳腺癌總數(shù)的10%～15%。由于此類(lèi)乳腺癌內(nèi)分泌治療和曲妥珠單抗靶向治療無(wú)效，預(yù)后很差，較早發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，易發(fā)生 脊髓、腦膜、腦、肝和肺轉(zhuǎn)移[1]。Notch是一個(gè)跨膜受體家族，其異常表達(dá)與某些惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。本研究擬用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步了解癌基因蛋白與三陰乳腺癌預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有病例均來(lái)自2009年1月至2012年12月在我院手術(shù)治療，并且病理診斷和免疫組織化學(xué)檢測(cè)ER、PR和Her-2均陰性的三陰乳腺癌，共63例，均為女性，年齡26～79歲，中位年齡(41.8±2.5)歲。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療和內(nèi)分泌治療。所有手術(shù)標(biāo)本臨床病理資料齊全，均統(tǒng)一重新切片，HE染色再次確定診斷。病例中42例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移；病理類(lèi)型為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌38 例、浸潤(rùn)性小葉癌25例。病理分級(jí)為：Ⅰ級(jí)15例，Ⅱ級(jí)26例，Ⅲ級(jí)22例[2]。臨床病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期25例，Ⅳ期20例。所有標(biāo)本常規(guī)取材，中性甲醛固定，石蠟切片(4 μm)，HE染色。同時(shí)，另取標(biāo)本中的30例的癌旁正常組織作為對(duì)照組。

1.2 方法 兔抗人Notch1抗體、鼠抗人c-myc抗體工作液、即用型SP試劑盒和DAB染色劑均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用SP法，抗原熱修復(fù)，免疫組化染色過(guò)程按試劑盒說(shuō)明操作，蘇木素襯染。

1.3 結(jié)果判定 Notch1陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，部分定位為細(xì)胞膜，c-myc陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，以細(xì)胞核或(和)細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。每張切片觀察5個(gè)高倍視野(400×)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，≥5%和<25%為(+)，≥25%和<50%為(++)，≥50%(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織和正常組織中的表達(dá) Notch1 陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞胞質(zhì)和胞核，少量位于胞膜，呈棕黃色顆粒,陽(yáng)性率為71.43%(45/63)，c-myc陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞胞質(zhì)和胞核，呈成棕黃色顆粒，陽(yáng)性率69.84%(44/63)，二者的陽(yáng)性表率明顯高于正常組織的3.33%(1/30)和3.33%(1/30)(P<0.01)。

2.2 三陰乳腺癌組織中，二種蛋白的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 在三陰乳腺癌組織中，Notch1的陽(yáng)性表達(dá)與年齡無(wú)關(guān)，而與腫瘤的大小、組織分級(jí)、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。c-myc陽(yáng)性表達(dá)與年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)，而與腫瘤的組織分級(jí)、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。見(jiàn)表1。

表1 Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系 例

2.3 三陰乳腺癌中Notch1和c-myc蛋白之間表達(dá)的關(guān)系 Spearman等級(jí)相關(guān)性分析結(jié)果表明，在三陰乳腺癌組織中Notch1與c-myc的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 Notch1和c-myc在三陰乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 例

3 討論

Notch基因編碼一類(lèi)大的跨膜Notch受體，在哺乳動(dòng)物中Notch受體有四種：Notch1～Notch4。Notch基因包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)(trammembrane domain,TM)和胞內(nèi)區(qū)(notch intracellular domain,NICD)[3]。Notch受體與配體結(jié)合后激活Notch信號(hào)系統(tǒng)，蛋白水解后釋放出NICD，NICD是受體蛋白的活性形式，NICD從細(xì)胞膜上脫離后進(jìn)入細(xì)胞核，與DNA結(jié)合蛋白CSL結(jié)合。CSL和NICD作為Notch信號(hào)通路的初級(jí)效應(yīng)分子，其形成NICD-CSL復(fù)合體激活靶基因的表達(dá)，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及腫瘤形成等過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用[4]。其中Notch1是最常被檢測(cè)到的Notch受體家族成員之一。

由于Notch信號(hào)通路可以與其它細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)生交互作用(talk-cross)，因此許多不同的刺激可激活Notch通路。并且不同的Notch的配體和靶基因，在不同組織以及瘤發(fā)展的不同階段，Notch作用也可能不同。因此，在人類(lèi)惡性腫瘤中，Notch1作用可以是抑癌基因或是癌基因[5]。研究發(fā)現(xiàn)，在人類(lèi)乳腺癌中Notch1更多的起到是癌基因的作用，Notch1信號(hào)表達(dá)下調(diào)可使細(xì)胞凋亡癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制[6]。在三陰乳腺癌中，Notch1表達(dá)水平高的患者術(shù)后生存率低，并且對(duì)化療的敏感性差[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)，正常組織中Notch1的表達(dá)明顯低于三陰乳腺癌組。三陰乳腺癌組中Notch1的表達(dá)隨著病理分級(jí)增高逐漸增強(qiáng)。Notch1表達(dá)與腫瘤大小，臨床分期關(guān)系密切(P<0.05)。

myc基因家族屬于核蛋白類(lèi)的癌基因，包括c-myc(cell-myc)、N-myc(human neuroblastomas)和L-myc(small cell lung carcinomas)三個(gè)成員，其中的c-myc是上述三者中作用最強(qiáng)的，定位于8號(hào)染色體，結(jié)構(gòu)上由不編碼蛋白質(zhì)的第1外顯子和編碼蛋白質(zhì)的第2,3外顯子構(gòu)成。myc基因家族及其產(chǎn)物可促進(jìn)細(xì)胞增殖，永生化，去分化和轉(zhuǎn)化等，在多種腫瘤形成過(guò)程中處于重要地位[8]。c-myc基因是禽類(lèi)髓細(xì)胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的細(xì)胞同源序列，c-myc基因的表達(dá)一般與細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)，如有生長(zhǎng)因子刺激成纖維細(xì)胞，可導(dǎo)致c-myc表達(dá)增強(qiáng)。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，用c-myc表達(dá)結(jié)構(gòu)或反義寡脫氧核酸進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)c-myc在細(xì)胞 G0期到S期的過(guò)程中也起作用，表明c-myc表達(dá)的變化與細(xì)胞的增殖及分化狀態(tài)有關(guān)，其表達(dá)產(chǎn)物在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化或惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。c-myc基因主要通過(guò)擴(kuò)增和染色體易位重排的方式激活，與某些組織腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和演變轉(zhuǎn)歸有重要關(guān)系[9，10]。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細(xì)胞系有c-myc或c-myc相關(guān)序列的擴(kuò)增，而且c-myc過(guò)量表達(dá)與腫瘤的早期復(fù)發(fā)有關(guān)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，三陰乳腺癌組織中c-myc的陽(yáng)性表達(dá)與組織分級(jí)、病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與患者的年齡和腫瘤大小無(wú)關(guān)(P>0.05)。c-myc在三陰乳腺癌的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。

進(jìn)一步相關(guān)性分析表明，Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中呈正性相關(guān)。其機(jī)制可能是：c-myc作為Notch1的下游靶基因，Notch1促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展是 c-myc 依賴(lài)性的[12]。由于三陰乳腺癌患者缺乏內(nèi)分泌及靶向治療的機(jī)會(huì)，在三陰乳腺癌中研究Notch1和c-myc的表達(dá)，有助于為三陰乳腺癌尋找新的靶點(diǎn)。

總之，Notch1、c-myc在三陰乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中存在一種相互協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。二者的聯(lián)合檢測(cè)有助臨床對(duì)三陰乳腺癌的研究，具有一定現(xiàn)實(shí)意義。

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ExpressionandsignificanceofNotch1andc-mycinhumantriple-negativebreastcancer

QINJingyun.DepartmentofThoracicSurgery,HandanCentralHospital,Hebei,Handan056001,China

ObjectiveTo investigate the expression of Notch1 and c-myc in human triple-negative breast cancer(TNBC),and to explore its clinical significance.MethodsThe expression levels of Notch1 and c-myc were detected by immunohistochemistry(SP) in 63 cases of TNBC and 30 cases of cancer adjacent normal breast tissues.ResultsThe expression of Notch1 and c-myc in human breast cancer was located in nucleus and cytoplasm.The positive expression rates of Notch1 and c-myc were 71.43%(45/63),69.84%(44/63),respectively in TNBC tissues,which were significantly higher than those in adjacent normal breast tissues(P<0.05).Among 63 cases of TNBC,the positive expression rates of Notch1 and c-myc at histological grade Ⅲ were significantly higher than those at grade Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).In addition,the positive expression rates of Notch1 and c-myc in stage Ⅲ～Ⅳ were significantly higher than those in stage Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).Furthermore,the expression levels of Notch1 and c-myc were positively correlated to lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionNotch1 and c-myc are highly expressed in TNBC,which is closely correlated with the occurrence,development and metastasis of TNBC.

triple-negative breast cancer；Notch1；c-myc；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.11.004

056001 河北省邯鄲市中心醫(yī)院胸外科

R 737.9

A

1002-7386(2014)11-1614-03

2013-12-11)