不同時(shí)期慢性HBV感染者血清IFN-λs水平的變化

杜以真 王曉花 張孝國(guó) 張縱 闞曉 徐皖蘇

HBV屬于嗜肝病毒家族，其全球感染超過(guò)3.5億人，HBV慢性感染是肝硬化及肝細(xì)胞癌(肝癌)的主要原因[1]。HBV在肝細(xì)胞中復(fù)制，但并不引起細(xì)胞病變，肝臟損害是免疫介導(dǎo)所致。IFN-α/-β和(或) IFN-γ誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)抗病毒反應(yīng)在HBV感染的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用，并且IFN-λs在宿主對(duì)HBV免疫反應(yīng)中的作用也逐漸被揭示。IFN-λs是最近被鑒定的一個(gè)IFN新家族——Ⅲ型IFN，包括IFN-λ1、2、3(即 IL-29、IL-28A和IL-28B)。目前關(guān)于慢性HBV感染患者血清IFN-λs水平的研究較少。為了解IFN-λs與慢性HBV感染轉(zhuǎn)歸的相互關(guān)系，我們對(duì)不同時(shí)期慢性HBV感染者，包括HBV攜帶者、慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者、乙肝肝硬化患者和肝癌患者血清中IFN-λs水平進(jìn)行了檢測(cè)。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

2010年7月至10月在我院就診的120例慢性HBV感染者，HBsAg均陽(yáng)性，其中HBV攜帶者、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者、HBV相關(guān)肝癌患者各30例，診斷均符合2000年(西安)中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)會(huì)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)》。HBV攜帶組男20例，女10例，年齡(21.3±14.6歲)。慢乙肝組患者中，男21例，女9例，年齡(31.3 ± 14.6)歲，輕度8例，中度19例，重度3例，HBeAg均陽(yáng)性。乙肝肝硬化組男22例，女8例，年齡(52.6 ± 14.1)歲，肝功能Child-Pugh B級(jí)17例，C 級(jí)13例，HBeAg陽(yáng)性21例，陰性9例。HBV相關(guān)肝癌組男24例，女6例，年齡(56.5 ± 7.2歲)，HBeAg陽(yáng)性8例，陰性22例。同時(shí)選取20名進(jìn)行健康體檢的健康人作為健康對(duì)照組，其中男14例，女6例，年齡(34.0±13.5歲)，HBsAg、HBeAg均陰性。所有入組者均排除丙型病毒性肝炎病毒和HIV感染，酒精性肝病，自身免疫性肝病，藥物肝損害。慢性HBV感染患者和健康人肝功能、血清HBV DNA的水平見(jiàn)表1。

表1 慢性HBV感染患者和健康人肝功能、血清HBV DNA的水平

二、方 法

清晨采集入組者空腹肘靜脈血3 ml，于當(dāng)日分離血清，-70℃凍存待檢。采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，分別使用美國(guó)ADL公司生產(chǎn)的鼠抗人IL-29、鼠抗人IL-28A、鼠抗人IL-28B ELISA試劑盒。在這個(gè)測(cè)定中，標(biāo)準(zhǔn)品與待檢測(cè)的相關(guān)樣本和生物素化的干擾素- λs在已包被的干擾素- λs獨(dú)特表位特異性的微孔中共同孵育。孵育后，洗滌在孔內(nèi)加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。洗滌后，在孔內(nèi)加入TMB基質(zhì)液，顏色的變化與結(jié)合的干擾素- λs水平成比例，終止液將從藍(lán)色變?yōu)辄S色，顯色的強(qiáng)度可被450 nm的波長(zhǎng)測(cè)定。測(cè)定的吸光強(qiáng)度與干擾素- λs水平成正比。將每組IFN- λs標(biāo)準(zhǔn)品吸光強(qiáng)度與相對(duì)水平吸光度繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣本的IFN- λs水平。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ1(IL- 29)水平比較

慢乙肝、乙肝肝硬化、肝癌患者的血清IFN-λ1(IL-29)水平均明顯低于健康對(duì)照組(P均<0.01)；慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關(guān)肝癌患者血清IFN-λ1(IL-29)水平明顯低于HBV攜帶者(P均<0.01)；HBV攜帶者血清IL-29水平與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，慢乙肝、乙肝肝硬化患者與HBV相關(guān)肝癌患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

二、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較

5組研究對(duì)象血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表2 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ1(IL- 29)水平比較

表3 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較

三、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ3(IL-28B)水平比較

HBV相關(guān)肝癌患者血清IFN-λ3(IL-28B)水平高于健康人、HBV攜帶者、慢性乙肝患者、肝硬化患者(P均<0.01)；HBV攜帶者、慢乙肝、乙肝肝硬化和健康對(duì)照組間血清IL-28B水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

討 論

HBV感染仍然是重要的全球公共健康問(wèn)題，目前，全世界超過(guò)3.5億人感染HBV，持續(xù)的慢性感染有發(fā)展為肝硬化、肝癌的危險(xiǎn)[1]?？共《臼侵委熉訦BV感染的關(guān)鍵，IFN-α和核苷(酸)類(lèi)藥物是治療慢乙肝的推薦藥物[2]。有研究認(rèn)為，使用IFN -α治療可降低慢乙肝患者HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生率[3]。雖然IFN -α已被用于臨床治療慢性HBV感染，但僅對(duì)約40%的患者有效，而且IFN-α是多向性的細(xì)胞因子，其感受器分布廣泛，不良反應(yīng)較多，不適用于乙肝肝硬化及肝癌患者[4]。隨著核苷(酸)類(lèi)似物在慢乙肝抗病毒治療中的不斷推廣，核苷(酸)類(lèi)似物治療相關(guān)的耐藥變異也日益增加。因此，迫切需要尋找一種療效更好、不良反應(yīng)較少的治療方法。

表4 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ3(IL-28B)水平比較

IFN-λs具有體外抗HCV和HBV的抗病毒特性。IFN-λs抑制HBV的分子機(jī)制與IFN-α/-β和IFN-γ都是通過(guò)阻止包裹HBV RNA的衣殼在細(xì)胞質(zhì)中組裝，抑制HBV復(fù)制[5]。除了抗病毒性之外，IFN-λs還具有抗細(xì)胞增殖和抑制體內(nèi)腫瘤增生活性。與Ⅰ型IFN類(lèi)似，IFN-λs的抗腫瘤機(jī)制包括：①通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞活性來(lái)抑制腫瘤血管生成；②通過(guò)增強(qiáng)T細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞的免疫活性間接殺傷腫瘤細(xì)胞；③增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫源性來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。有研究證明了IFN-λs在鼠癌模型中有抗腫瘤活性[6]，IFN-λs與Ⅰ型IFN具有共同的生物活性，不過(guò)由于IFN-λs感受器表達(dá)受限，其功能具有組織特異性。因此，IFN-λs治療可能引起的不良反應(yīng)較少，改善既往IFN治療的耐受性。目前有關(guān)HBV感染的人體內(nèi)的IFN-λs水平研究較少，因此有必要充分了解慢性HBV感染患者體內(nèi)IFN-λs的表達(dá)狀態(tài)，以及其抗病毒反應(yīng)的調(diào)節(jié)和活動(dòng)。

本研究對(duì)慢性HBV感染者，包括HBV攜帶者和慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關(guān)性肝癌患者血清中IFN-λs水平進(jìn)行檢測(cè)，并與健康人作對(duì)照，結(jié)果顯示人體體內(nèi)IFN-λs水平并未因慢性HBV感染呈顯出高表達(dá)；相反，慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關(guān)肝癌患者的血清IFN-λ1(IL-29)水平均明顯低于健康對(duì)照組(P均<0.01)，慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關(guān)肝癌患者血清IFN-λ1(IL-29)水平明顯低于HBV攜帶者(P均<0.01)。這可能是由于HBV感染在免疫反應(yīng)啟動(dòng)之前就已建立，與HBV不誘導(dǎo)干擾素-α/β的表達(dá)、卻抑制IFN-α/-β產(chǎn)生相似[7]。慢性HBV感染也不會(huì)誘導(dǎo)IFN-λs的高表達(dá)，反而抑制IFN-λ1(IL-29) 產(chǎn)生。也正是由于IFN-λs和IFN-α/-β表達(dá)不足，使HBV免疫逃逸，造成慢性感染。也可能在HBV的免疫清除過(guò)程中IFN-λ1(IL- 29)參與了重要作用，使之消耗，在慢乙肝患者表現(xiàn)更為明顯。因此，對(duì)應(yīng)用IFN-α無(wú)效、或不耐受IFN-α治療的慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV性肝癌患者，IFN-λs可作為替代治療或聯(lián)合治療藥物之一，發(fā)揮其抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤作用。

有研究發(fā)現(xiàn)，IFN-λ在膀胱癌、血液病、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和肺癌組織中高表達(dá)，而且3種腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子(甾體生成因子-1，腎母細(xì)胞瘤-1和P53)結(jié)合位點(diǎn)均在人IFN-λ轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1.0 kb以內(nèi)的區(qū)域。本研究結(jié)果顯示，HBV相關(guān)性肝癌患者血清中IFN-λ3(IL-28B)的水平明顯高于其他人群(包括HBV攜帶者、慢乙肝、乙肝肝硬化患者及健康人)。由此推測(cè)，IFN-λ3(IL-28B)可能與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)，檢測(cè)慢乙肝、肝硬化患者血清的IFN-λ3(IL-28B)，可能預(yù)測(cè)肝癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后。但結(jié)果尚待進(jìn)一步大規(guī)模研究，并動(dòng)態(tài)觀察、隨訪肝癌患者IFN-λ3(IL- 28B)變化驗(yàn)證。

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