栝樓叢生芽快繁體系的建立

周鳳琴等

摘要：利用栝樓的嫩芽作為外植體，進(jìn)行離體組織培養(yǎng)，通過正交試驗(yàn)選擇最適pH值和激素濃度，篩選出栝樓叢生芽的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基。結(jié)果表明，消毒時(shí)間為3 min時(shí)外植體損傷較??；pH為5.8的培養(yǎng)基外植體長勢旺盛；3號芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基叢生芽比較旺盛；2號生根培養(yǎng)基得到的根多且壯。栝樓叢生芽的快速繁殖體系為：0.1%HgCl2 溶液外植體表面消毒3 min；叢生芽誘導(dǎo)的最適pH為5.8；最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA；最佳芽生根培養(yǎng)基為：MS+ 0.2 mg/L NAA。

關(guān)鍵詞：栝樓；嫩芽；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號：S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2014）03-0046-03

AbstractThe in vitro tissue culture method of Trichosanthes kirilowii Maxim. was established using tender buds as explants. By orthogonal test， the optimum pH value， 6-BA and NAA concentrations， and the best induction medium of multiple buds were selected. The results showed that disinfecting for 3 minutes had less injury on explants. The explants grew well on the medium with pH of 5.8. The multiple buds in the third bud induction medium were vigorous. And the second rooting medium had more and stronger roots. In conclusion， the rapid propagation system of Trichosanthes kirilowii Maxim. for multiple buds induction was disinfecting explants for 3 minutes using 0.1% HgCl2；the optimum pH value was 5.8；the optimum bud induction medium was MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA； and the optimum rooting medium was MS+0.2 mg/L NAA.

Key wordsTrichosanthes kirilowii Maxim.； Tender bud； Tissue culture； Rapid propagation

栝樓 （Trichosanthes kirilowii Maxim.），為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，其根（中藥名為天花粉）、種子（中藥名為栝樓仁）、果實(shí)（中藥名為栝樓實(shí)）、果皮（中藥名為栝樓皮）均可入藥，有化痰散結(jié)，治咳嗽、胸悶的功效，還能滑腸通便，治療便秘[1～3]。栝樓是雌雄異株的植物，種子繁殖雌雄難辨，分根法繁殖系數(shù)較低，使良種生產(chǎn)發(fā)展受到一定的限制[5]。利用植物組織培養(yǎng)法進(jìn)行快速繁殖，所需材料少，繁殖效率高，不受季節(jié)和氣候的影響，還可以節(jié)約成本、生產(chǎn)脫毒苗等[6]?，F(xiàn)有報(bào)道大多通過愈傷誘導(dǎo)進(jìn)行栝樓快繁，存在變異率高，所需周期長等問題[7～9]。作者通過對組培快繁條件的探索，逐步建立起栝樓的叢生芽誘導(dǎo)體系，加快了栝樓無性繁殖的速度，而且通過叢生芽增殖的方式，保持了母本的優(yōu)良特性，對于栝樓種苗的快速繁育具有重要意義。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

樣品取自山東中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園。經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)教授周鳳琴鑒定為葫蘆科植物栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim.），4月初從植株上取當(dāng)年生嫩芽做外植體。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1消毒時(shí)間的確定先用75%乙醇浸泡外植體1 min，再用滅菌水沖洗2次，并用0.1%HgCl2對外植體進(jìn)行表面消毒，分為2組，分別消毒3 min和5 min；最后用滅菌水徹底沖洗外植體6～7次。超凈工作臺提前啟動滅菌后，將外植體放在鋪有滅菌濾紙的培養(yǎng)皿上，剪取長約1.5 cm的嫩芽，備用。

1.2.2pH值的確定配制培養(yǎng)基后調(diào)節(jié)pH值分別至5.8、5.9，觀察不同pH值對叢生芽生長的影響。

1.2.3誘導(dǎo)芽分化培養(yǎng)基的確定以MS為基本培養(yǎng)基，在此基礎(chǔ)上，附加6-BA 0.5、4.0 mg/L兩個(gè)濃度水平和 NAA 0.1、0.5 mg/L兩個(gè)濃度水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，組成4種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基5瓶，每個(gè)三角瓶接種4個(gè)外植體，觀測統(tǒng)計(jì)每種培養(yǎng)基誘導(dǎo)外植體分化叢生芽的結(jié)果，以確定最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度（25±5）℃，光照強(qiáng)度1 000 lx，光照時(shí)間12 h/d 。

1.2.4生根培養(yǎng)基的確定以MS為基本培養(yǎng)基，在此基礎(chǔ)上，附加NAA 0.1、0.2 mg/L兩個(gè)濃度水平，組成兩組生根培養(yǎng)基，每組10瓶，每瓶4個(gè)外植體，觀測統(tǒng)計(jì)每種培養(yǎng)基誘導(dǎo)外植體生根的結(jié)果，以確定最適生根培養(yǎng)基。

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度（25±5）℃，光照強(qiáng)度1 000 lx，光照時(shí)間12 h/d 。

2結(jié)果與分析

2.1不同消毒時(shí)間對外植體生長及分化的影響

外植體用0.1% HgCl2消毒滅菌，接種后21 d觀察結(jié)果（表1）顯示，消毒5 min的污染率低，但嚴(yán)重影響其分化率。消毒3 min的雖外植體污染率稍高，但其分化率更高，長勢更好。因此，確定外植體用0.1% HgCl2 溶液表面消毒時(shí)間為3 min。

3小結(jié)與討論

3.1以栝樓嫩芽為外植體，在保證消毒效果的前提下，選擇0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min為宜。如消毒時(shí)間過長，栝樓嫩芽愈傷組織多數(shù)變成黑褐色，且隨著愈傷組織的生長也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒時(shí)間越短越好。

3.2建立栝樓叢生芽快繁體系：最適pH為5.8，栝樓叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最適生根培養(yǎng)基為：MS+0.2 mg/L NAA。采用叢生芽誘導(dǎo)方式進(jìn)行栝樓組培快繁，30～35 d組培苗高度即達(dá)20 cm以上，和愈傷組織誘導(dǎo)方式[7～9]相比縮短了快繁時(shí)間。

3.3試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，栝樓的取材時(shí)間及部位對外植體的分化誘導(dǎo)率有較明顯的影響。3～4月份新發(fā)嫩芽頂端的分生組織容易誘導(dǎo)分化。相比較而言，取材時(shí)間更重要。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：52，104-105.

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[9]朱勤，楊六萍，楊許琴，等. 食籽栝樓離體快繁的初步研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， 34（16）：3965-3966.

3小結(jié)與討論

3.1以栝樓嫩芽為外植體，在保證消毒效果的前提下，選擇0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min為宜。如消毒時(shí)間過長，栝樓嫩芽愈傷組織多數(shù)變成黑褐色，且隨著愈傷組織的生長也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒時(shí)間越短越好。

3.2建立栝樓叢生芽快繁體系：最適pH為5.8，栝樓叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最適生根培養(yǎng)基為：MS+0.2 mg/L NAA。采用叢生芽誘導(dǎo)方式進(jìn)行栝樓組培快繁，30～35 d組培苗高度即達(dá)20 cm以上，和愈傷組織誘導(dǎo)方式[7～9]相比縮短了快繁時(shí)間。

3.3試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，栝樓的取材時(shí)間及部位對外植體的分化誘導(dǎo)率有較明顯的影響。3～4月份新發(fā)嫩芽頂端的分生組織容易誘導(dǎo)分化。相比較而言，取材時(shí)間更重要。

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3小結(jié)與討論

3.1以栝樓嫩芽為外植體，在保證消毒效果的前提下，選擇0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min為宜。如消毒時(shí)間過長，栝樓嫩芽愈傷組織多數(shù)變成黑褐色，且隨著愈傷組織的生長也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒時(shí)間越短越好。

3.2建立栝樓叢生芽快繁體系：最適pH為5.8，栝樓叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最適生根培養(yǎng)基為：MS+0.2 mg/L NAA。采用叢生芽誘導(dǎo)方式進(jìn)行栝樓組培快繁，30～35 d組培苗高度即達(dá)20 cm以上，和愈傷組織誘導(dǎo)方式[7～9]相比縮短了快繁時(shí)間。

3.3試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，栝樓的取材時(shí)間及部位對外植體的分化誘導(dǎo)率有較明顯的影響。3～4月份新發(fā)嫩芽頂端的分生組織容易誘導(dǎo)分化。相比較而言，取材時(shí)間更重要。

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