臺灣榿木組培技術(shù)研究初報

汪艷云

摘 要：利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明：臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度，而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

關(guān)鍵詞：臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

臺灣榿木（Alnus formosana Makino）為樺木科（Betulaceae）榿木屬（Alnus B.Ehrh.）植物，又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子，落葉闊葉大喬木，原產(chǎn)臺灣省，是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng)，速生，材質(zhì)好，可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹，可造純林和混交林，可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木，在排水良好的濕潤土地上，8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m，胸徑27.8 cm，木材年生長量15 m3/hm2，其中6～8年間，木材年生長量24 m3/hm2，生長表現(xiàn)良好，被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來，臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種，有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1]，但取葉片作為外植體繁殖，未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，開展系列組培技術(shù)研究，以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木，栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初，在晴天，特別是3天以上連續(xù)的晴天，剪取榿木幼嫩枝條，帶回組培實驗室內(nèi)處理。

將枝條剪成2～3 cm的小段，剪除葉片，在流水下沖洗30 min，然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min ，無菌水沖洗5次，待用。

剪取榿木嫩葉，在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min，無菌水沖洗5次，然后將葉片剪切成0.5～1.0 cm左右方塊 [5]，接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、NAA、2，4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

1.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %，蔗糖3.0 %，pH值為5. 8；培養(yǎng)溫度24 ℃～28 ℃，光照強(qiáng)度2000～3000 l x，每天光照時數(shù)14 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體處理效果

對枝條的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條，處理時間不足8 min，污染率會大幅增加。

對葉片的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡，處理時間不足，污染率會大幅增加。

2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，結(jié)果表明僅1、3，2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生，但芽誘導(dǎo)率很低，誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好（見圖1）。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動，原接種芽在2、4，2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生，不會萌發(fā)新芽，原接種芽在2，4 2種培養(yǎng)基中可存活半年，后逐漸死亡，提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

用無菌的剪刀將葉片剪成0.5～1.0 cm左右方塊，然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上，用鑷子按實，使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2?？梢?，4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織，誘導(dǎo)率均在80 %以上，表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易（見圖2）。高濃度的2，4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，但所需時間稍長。

3 結(jié)論與討論

3.1 外植體采集容易

臺灣榿木枝條光滑，無絨毛，無針刺。一年四季均有葉片更新，均可采集到幼嫩葉片，因此外植體消毒相對容易。

3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提，只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看，誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度，但在高濃度的BA刺激下，仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分，提高新芽誘導(dǎo)率，有待進(jìn)一步研究。

3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織，如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 饒紅欣，蔣利媛，彭信海，等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技，2008，35（3）：1-3.

[2] ZWOLINSKI J B，DONALD D G，GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry，1992，163： 31-35.

[3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報，1995，16（2）： 112-117.

[4] 王金錫，朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技，2000，21（4）： 16- 19.

[5] 劉海龍，張日清，汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2013，42（3）： 231- 233.

摘 要：利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明：臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度，而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

關(guān)鍵詞：臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

臺灣榿木（Alnus formosana Makino）為樺木科（Betulaceae）榿木屬（Alnus B.Ehrh.）植物，又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子，落葉闊葉大喬木，原產(chǎn)臺灣省，是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng)，速生，材質(zhì)好，可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹，可造純林和混交林，可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木，在排水良好的濕潤土地上，8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m，胸徑27.8 cm，木材年生長量15 m3/hm2，其中6～8年間，木材年生長量24 m3/hm2，生長表現(xiàn)良好，被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來，臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種，有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1]，但取葉片作為外植體繁殖，未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，開展系列組培技術(shù)研究，以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木，栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初，在晴天，特別是3天以上連續(xù)的晴天，剪取榿木幼嫩枝條，帶回組培實驗室內(nèi)處理。

將枝條剪成2～3 cm的小段，剪除葉片，在流水下沖洗30 min，然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min ，無菌水沖洗5次，待用。

剪取榿木嫩葉，在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min，無菌水沖洗5次，然后將葉片剪切成0.5～1.0 cm左右方塊 [5]，接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、NAA、2，4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

1.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %，蔗糖3.0 %，pH值為5. 8；培養(yǎng)溫度24 ℃～28 ℃，光照強(qiáng)度2000～3000 l x，每天光照時數(shù)14 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體處理效果

對枝條的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條，處理時間不足8 min，污染率會大幅增加。

對葉片的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡，處理時間不足，污染率會大幅增加。

2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，結(jié)果表明僅1、3，2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生，但芽誘導(dǎo)率很低，誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好（見圖1）。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動，原接種芽在2、4，2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生，不會萌發(fā)新芽，原接種芽在2，4 2種培養(yǎng)基中可存活半年，后逐漸死亡，提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

用無菌的剪刀將葉片剪成0.5～1.0 cm左右方塊，然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上，用鑷子按實，使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2。可見，4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織，誘導(dǎo)率均在80 %以上，表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易（見圖2）。高濃度的2，4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，但所需時間稍長。

3 結(jié)論與討論

3.1 外植體采集容易

臺灣榿木枝條光滑，無絨毛，無針刺。一年四季均有葉片更新，均可采集到幼嫩葉片，因此外植體消毒相對容易。

3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提，只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看，誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度，但在高濃度的BA刺激下，仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分，提高新芽誘導(dǎo)率，有待進(jìn)一步研究。

3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織，如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 饒紅欣，蔣利媛，彭信海，等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技，2008，35（3）：1-3.

[2] ZWOLINSKI J B，DONALD D G，GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry，1992，163： 31-35.

[3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報，1995，16（2）： 112-117.

[4] 王金錫，朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技，2000，21（4）： 16- 19.

[5] 劉海龍，張日清，汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2013，42（3）： 231- 233.

摘 要：利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明：臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度，而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

關(guān)鍵詞：臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

臺灣榿木（Alnus formosana Makino）為樺木科（Betulaceae）榿木屬（Alnus B.Ehrh.）植物，又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子，落葉闊葉大喬木，原產(chǎn)臺灣省，是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng)，速生，材質(zhì)好，可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹，可造純林和混交林，可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木，在排水良好的濕潤土地上，8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m，胸徑27.8 cm，木材年生長量15 m3/hm2，其中6～8年間，木材年生長量24 m3/hm2，生長表現(xiàn)良好，被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來，臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種，有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1]，但取葉片作為外植體繁殖，未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體，開展系列組培技術(shù)研究，以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木，栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初，在晴天，特別是3天以上連續(xù)的晴天，剪取榿木幼嫩枝條，帶回組培實驗室內(nèi)處理。

將枝條剪成2～3 cm的小段，剪除葉片，在流水下沖洗30 min，然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min ，無菌水沖洗5次，待用。

剪取榿木嫩葉，在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s，用無菌水沖洗3次，用0.1 %的升汞溶液消毒4～10 min，無菌水沖洗5次，然后將葉片剪切成0.5～1.0 cm左右方塊 [5]，接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

以MS、B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、NAA、2，4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

1.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %，蔗糖3.0 %，pH值為5. 8；培養(yǎng)溫度24 ℃～28 ℃，光照強(qiáng)度2000～3000 l x，每天光照時數(shù)14 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體處理效果

對枝條的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條，處理時間不足8 min，污染率會大幅增加。

對葉片的處理效果表明：75 %的酒精消毒10 s后，用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果，污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡，處理時間不足，污染率會大幅增加。

2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，結(jié)果表明僅1、3，2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生，但芽誘導(dǎo)率很低，誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好（見圖1）。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動，原接種芽在2、4，2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生，不會萌發(fā)新芽，原接種芽在2，4 2種培養(yǎng)基中可存活半年，后逐漸死亡，提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

用無菌的剪刀將葉片剪成0.5～1.0 cm左右方塊，然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上，用鑷子按實，使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2。可見，4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織，誘導(dǎo)率均在80 %以上，表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易（見圖2）。高濃度的2，4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，但所需時間稍長。

3 結(jié)論與討論

3.1 外植體采集容易

臺灣榿木枝條光滑，無絨毛，無針刺。一年四季均有葉片更新，均可采集到幼嫩葉片，因此外植體消毒相對容易。

3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提，只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看，誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度，但在高濃度的BA刺激下，仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分，提高新芽誘導(dǎo)率，有待進(jìn)一步研究。

3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織，如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 饒紅欣，蔣利媛，彭信海，等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技，2008，35（3）：1-3.

[2] ZWOLINSKI J B，DONALD D G，GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry，1992，163： 31-35.

[3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報，1995，16（2）： 112-117.

[4] 王金錫，朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技，2000，21（4）： 16- 19.

[5] 劉海龍，張日清，汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2013，42（3）： 231- 233.