紅錐組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究

覃子海等

摘 要 以紅錐莖段為外植體， 研究了不同激素對(duì)其再生體系建立的影響。結(jié)果表明：最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.25 mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)到了85%；最適增殖培養(yǎng)基為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L，芽增殖系數(shù)3.58，且生長(zhǎng)健壯；單芽在1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L培養(yǎng)基上生根效果好，生根率82%；煉苗成功后移栽成活率達(dá)90%以上。

關(guān)鍵詞 紅錐 ；組織培養(yǎng) ；快速繁殖

分類號(hào) Q813.1+2

Tissue Culture and Rapid Multiplication of Castanopsis hystrix

QIN Zihai1） LIU Hailong1） JIANG Hua2） QIN Pengfei3） ZHU Jiyu1）

（1 Guangxi Forestry Research Institute， Nanning，Guangxi 530001；

2 Weidu State Forest Farm of Guangxi， Laibin， Guangxi 546100；

3 Daguishan State Forest Farm of Guangxi， Hezhou， Guangxi 542800）

Abstract The effects of different hormones on regeneration system of Castanopsis hystrix were analyzed by using the stem as explants. The results showed that the suitable media for induction were BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.25 mg/L， with the induction of 85%， the suitable media for proliferation were BMT+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.5mg/L，with the multiplication coefficient of 3.58， moreover robust growth， the suitable media for rooting were 1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L， with the rooting of 82%. The seedlings had survival rate of over 90% after hardening and transplanting .

Keywords Castanopsis hystrix ； tissue culture ； rapid multiplication

紅錐（Castanopsis hystrix）屬殼斗科栲屬常綠喬木，是華南地區(qū)重要的鄉(xiāng)土闊葉優(yōu)質(zhì)珍貴用材和多用途樹(shù)種[1-2]。它具有生長(zhǎng)快、萌芽力強(qiáng)、混生性能好等優(yōu)良特性，是與松、杉等針葉樹(shù)種混交造林的最理想的伴生樹(shù)種之一[3]。目前紅錐人工造林是以種子育苗造林為主，但因紅錐母樹(shù)林結(jié)實(shí)的大小年現(xiàn)象十分明顯，結(jié)實(shí)小年常因采不到種子而無(wú)法滿足造林之需求[4]。因此，建立紅錐組培再生繁殖體系，對(duì)紅錐的開(kāi)發(fā)和利用具有重要的意義。關(guān)于紅錐組織培養(yǎng)形成再生植株的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究以紅錐莖段為外植體， 探討了不同激素組合對(duì)其再生體系建立的影響，旨在為紅錐的快速繁殖和規(guī)?；N提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

組織培養(yǎng)材料來(lái)自于紅錐優(yōu)株的萌芽條。

1.2 方法

1.2.1 外植體消毒

剪取紅錐萌芽條帶腋芽莖段作為外植體，去葉，剪切成1～2 cm長(zhǎng)帶1～2個(gè)腋芽或莖節(jié)小段。用75%乙醇浸泡20 s，蒸餾水清洗后置于超凈臺(tái)上，在無(wú)菌操作下用0.1%升汞消毒8 min，再用20%次氯酸鈉消毒5 min，消毒處理后用無(wú)菌水漂洗5～6次。

1.2.2 始芽的誘導(dǎo)

細(xì)胞分裂素對(duì)始芽的誘導(dǎo)起著十分重要的作用，要使嫩芽獲得較高的誘導(dǎo)率，適宜的細(xì)胞分裂素濃度甚為關(guān)鍵。離體培養(yǎng)常用的生長(zhǎng)素為NAA，細(xì)胞分裂素為6-BA，以生長(zhǎng)素NAA 0.25 mg/L為基礎(chǔ)，在含0.1～0.5 mg/L不同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA的BMT培養(yǎng)基上[5]，另加CH 500 mg/L，VB2 1 mg/L，pH為5.8。每試驗(yàn)處理接種20段，光照培養(yǎng)，定期進(jìn)行誘導(dǎo)率的統(tǒng)計(jì)。

1.2.3 芽增殖和生長(zhǎng)

將初代培養(yǎng)所得的芽接種在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，調(diào)節(jié)6-BA、KT、NAA的濃度，共設(shè)計(jì)9個(gè)試驗(yàn)處理，每處理接種芽20顆，不定期觀察芽的分化、增殖和生長(zhǎng)狀況，并統(tǒng)計(jì)芽的增殖系數(shù)。

1.2.4 生根培養(yǎng)

當(dāng)紅錐芽繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖到一定數(shù)量并生長(zhǎng)到3～4 cm高時(shí)，選取生長(zhǎng)健壯的單芽切割進(jìn)行生根培養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)考慮的因素為生長(zhǎng)素IBA和NAA以及基本培養(yǎng)基BMT，因素水平安排見(jiàn)表1。培養(yǎng)第5天開(kāi)始觀察，培養(yǎng)30d時(shí)統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)處理的生根率。

生根率（%）=生根株數(shù)/接入的無(wú)根苗數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 始芽的誘導(dǎo)試驗(yàn)

細(xì)胞分裂素6-BA對(duì)始芽誘導(dǎo)分化的影響效果見(jiàn)表2。

表2顯示，當(dāng)6-BA的濃度為0.1 mg/L時(shí)，始芽的誘導(dǎo)率很低，僅為25%，又多為生長(zhǎng)纖細(xì)的單芽，而且部分頂芽變黃。在一定范圍內(nèi)，隨著細(xì)胞分裂素6-BA濃度增加，外植體始芽的誘導(dǎo)率也呈相應(yīng)提高趨勢(shì)，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA為較高濃度0.4 mg/L時(shí)，初始芽的誘導(dǎo)率出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，而當(dāng)濃度提高到0.5 mg/L時(shí)，始芽呈短粗密集，接種操作時(shí)極難切割剝離，且芽呈透明水腫玻璃化，不利于繼代擴(kuò)繁培養(yǎng)。因此，以細(xì)胞分裂素6-BA濃度為0.3 mg/L時(shí)，有利于外植體初始始芽的誘導(dǎo)，不僅有85%較高的誘導(dǎo)率，而且每叢芽有2～3個(gè)單芽，芽生長(zhǎng)健壯。endprint

2.2 外源激素組合對(duì)芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時(shí)始芽還必須是生長(zhǎng)健壯，才能達(dá)到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長(zhǎng)素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進(jìn)行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計(jì)平均在一個(gè)培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表3。

激素不同種類，不同濃度對(duì)芽的增殖和生長(zhǎng)有不用的效果，經(jīng)試驗(yàn)表明，6-BA濃度對(duì)芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來(lái)看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時(shí)，芽在繼代培養(yǎng)30 d時(shí)，平均增殖率為2.41%，芽長(zhǎng)勢(shì)較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時(shí)，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達(dá)到最高的3.58，而且芽生長(zhǎng)健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時(shí)，芽的增殖率有所下降，芽的生長(zhǎng)質(zhì)量也呈下降趨勢(shì)，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長(zhǎng)素NAA來(lái)看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時(shí)，平均增殖率最高，濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來(lái)看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說(shuō)明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時(shí)適宜芽增殖和生長(zhǎng)的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過(guò)程中，單芽生根率的高低是影響無(wú)性快繁速度的主要因子之一，生長(zhǎng)素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對(duì)生根起著至關(guān)重要的促進(jìn)作用[6]。將生長(zhǎng)健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長(zhǎng)素共9個(gè)處理，進(jìn)行正交生根誘導(dǎo)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

在生長(zhǎng)素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗(yàn)中，3個(gè)試驗(yàn)因素R值大小次序?yàn)椋篒BA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對(duì)紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對(duì)始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對(duì)紅錐始芽的生根沒(méi)有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進(jìn)根系條數(shù)增加，紅錐始芽對(duì)IBA敏感，對(duì)始芽生長(zhǎng)起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達(dá)82%，且根系較多，再生植株生長(zhǎng)健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對(duì)移栽基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來(lái)水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗(yàn)結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽(yáng)以避免太陽(yáng)直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對(duì)組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進(jìn)植物體內(nèi)糖分的運(yùn)輸，說(shuō)明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長(zhǎng)。這一點(diǎn)與王以紅等[5]對(duì)殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長(zhǎng)

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長(zhǎng)素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴(kuò)繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強(qiáng)度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強(qiáng)的光照強(qiáng)度下生長(zhǎng)，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進(jìn)行芽的分化、增殖和生長(zhǎng)等擴(kuò)繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達(dá)到擴(kuò)大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長(zhǎng)的過(guò)程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會(huì)出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時(shí)候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問(wèn)題的根源有待進(jìn)一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長(zhǎng)健壯的單芽切割后接種，進(jìn)行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時(shí)單芽基部開(kāi)始長(zhǎng)出根點(diǎn)，培養(yǎng)15 d時(shí)根系生長(zhǎng)至1～1.5 cm長(zhǎng)，形成完整的再生植株，生根率達(dá)到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強(qiáng)的相關(guān)性，生長(zhǎng)健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達(dá)，因此在進(jìn)行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強(qiáng)光合作用促進(jìn)始芽的健壯生長(zhǎng)。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉慶昌，吳國(guó)良. 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[2] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000.

[3] 朱積余，蔣 燚，丘小軍. 廣西紅錐地理種源試驗(yàn)初報(bào)[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，1997，26（2）：66-68.

[4] 朱積余，蔣 燚，潘 文. 廣西紅錐優(yōu)樹(shù)選擇標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2002，9（3）：109-113.

[5] 王以紅，陳曉明，蔡 玲，等. 大葉櫟組織培養(yǎng)再生植株的研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)， 2009，38（2）：71-74.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡 玲，等. 香樟優(yōu)良無(wú)性系快繁技術(shù)的研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25（1）：60-64.endprint

2.2 外源激素組合對(duì)芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時(shí)始芽還必須是生長(zhǎng)健壯，才能達(dá)到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長(zhǎng)素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進(jìn)行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計(jì)平均在一個(gè)培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表3。

激素不同種類，不同濃度對(duì)芽的增殖和生長(zhǎng)有不用的效果，經(jīng)試驗(yàn)表明，6-BA濃度對(duì)芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來(lái)看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時(shí)，芽在繼代培養(yǎng)30 d時(shí)，平均增殖率為2.41%，芽長(zhǎng)勢(shì)較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時(shí)，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達(dá)到最高的3.58，而且芽生長(zhǎng)健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時(shí)，芽的增殖率有所下降，芽的生長(zhǎng)質(zhì)量也呈下降趨勢(shì)，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長(zhǎng)素NAA來(lái)看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時(shí)，平均增殖率最高，濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來(lái)看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說(shuō)明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時(shí)適宜芽增殖和生長(zhǎng)的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過(guò)程中，單芽生根率的高低是影響無(wú)性快繁速度的主要因子之一，生長(zhǎng)素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對(duì)生根起著至關(guān)重要的促進(jìn)作用[6]。將生長(zhǎng)健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長(zhǎng)素共9個(gè)處理，進(jìn)行正交生根誘導(dǎo)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

在生長(zhǎng)素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗(yàn)中，3個(gè)試驗(yàn)因素R值大小次序?yàn)椋篒BA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對(duì)紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對(duì)始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對(duì)紅錐始芽的生根沒(méi)有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進(jìn)根系條數(shù)增加，紅錐始芽對(duì)IBA敏感，對(duì)始芽生長(zhǎng)起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達(dá)82%，且根系較多，再生植株生長(zhǎng)健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對(duì)移栽基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來(lái)水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗(yàn)結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽(yáng)以避免太陽(yáng)直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對(duì)組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進(jìn)植物體內(nèi)糖分的運(yùn)輸，說(shuō)明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長(zhǎng)。這一點(diǎn)與王以紅等[5]對(duì)殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長(zhǎng)

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長(zhǎng)素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴(kuò)繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強(qiáng)度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強(qiáng)的光照強(qiáng)度下生長(zhǎng)，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進(jìn)行芽的分化、增殖和生長(zhǎng)等擴(kuò)繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達(dá)到擴(kuò)大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長(zhǎng)的過(guò)程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會(huì)出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時(shí)候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問(wèn)題的根源有待進(jìn)一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長(zhǎng)健壯的單芽切割后接種，進(jìn)行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時(shí)單芽基部開(kāi)始長(zhǎng)出根點(diǎn)，培養(yǎng)15 d時(shí)根系生長(zhǎng)至1～1.5 cm長(zhǎng)，形成完整的再生植株，生根率達(dá)到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強(qiáng)的相關(guān)性，生長(zhǎng)健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達(dá)，因此在進(jìn)行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強(qiáng)光合作用促進(jìn)始芽的健壯生長(zhǎng)。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉慶昌，吳國(guó)良. 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[2] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000.

[3] 朱積余，蔣 燚，丘小軍. 廣西紅錐地理種源試驗(yàn)初報(bào)[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，1997，26（2）：66-68.

[4] 朱積余，蔣 燚，潘 文. 廣西紅錐優(yōu)樹(shù)選擇標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2002，9（3）：109-113.

[5] 王以紅，陳曉明，蔡 玲，等. 大葉櫟組織培養(yǎng)再生植株的研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)， 2009，38（2）：71-74.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡 玲，等. 香樟優(yōu)良無(wú)性系快繁技術(shù)的研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25（1）：60-64.endprint

2.2 外源激素組合對(duì)芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時(shí)始芽還必須是生長(zhǎng)健壯，才能達(dá)到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長(zhǎng)素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進(jìn)行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計(jì)平均在一個(gè)培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表3。

激素不同種類，不同濃度對(duì)芽的增殖和生長(zhǎng)有不用的效果，經(jīng)試驗(yàn)表明，6-BA濃度對(duì)芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來(lái)看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時(shí)，芽在繼代培養(yǎng)30 d時(shí)，平均增殖率為2.41%，芽長(zhǎng)勢(shì)較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時(shí)，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達(dá)到最高的3.58，而且芽生長(zhǎng)健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時(shí)，芽的增殖率有所下降，芽的生長(zhǎng)質(zhì)量也呈下降趨勢(shì)，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長(zhǎng)素NAA來(lái)看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時(shí)，平均增殖率最高，濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來(lái)看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說(shuō)明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時(shí)適宜芽增殖和生長(zhǎng)的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過(guò)程中，單芽生根率的高低是影響無(wú)性快繁速度的主要因子之一，生長(zhǎng)素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對(duì)生根起著至關(guān)重要的促進(jìn)作用[6]。將生長(zhǎng)健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長(zhǎng)素共9個(gè)處理，進(jìn)行正交生根誘導(dǎo)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

在生長(zhǎng)素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗(yàn)中，3個(gè)試驗(yàn)因素R值大小次序?yàn)椋篒BA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對(duì)紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對(duì)始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對(duì)紅錐始芽的生根沒(méi)有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進(jìn)根系條數(shù)增加，紅錐始芽對(duì)IBA敏感，對(duì)始芽生長(zhǎng)起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達(dá)82%，且根系較多，再生植株生長(zhǎng)健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對(duì)移栽基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來(lái)水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗(yàn)結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽(yáng)以避免太陽(yáng)直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對(duì)組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進(jìn)植物體內(nèi)糖分的運(yùn)輸，說(shuō)明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長(zhǎng)。這一點(diǎn)與王以紅等[5]對(duì)殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長(zhǎng)

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長(zhǎng)素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴(kuò)繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強(qiáng)度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強(qiáng)的光照強(qiáng)度下生長(zhǎng)，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進(jìn)行芽的分化、增殖和生長(zhǎng)等擴(kuò)繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達(dá)到擴(kuò)大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長(zhǎng)的過(guò)程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會(huì)出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時(shí)候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問(wèn)題的根源有待進(jìn)一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長(zhǎng)健壯的單芽切割后接種，進(jìn)行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時(shí)單芽基部開(kāi)始長(zhǎng)出根點(diǎn)，培養(yǎng)15 d時(shí)根系生長(zhǎng)至1～1.5 cm長(zhǎng)，形成完整的再生植株，生根率達(dá)到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強(qiáng)的相關(guān)性，生長(zhǎng)健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達(dá)，因此在進(jìn)行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強(qiáng)光合作用促進(jìn)始芽的健壯生長(zhǎng)。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉慶昌，吳國(guó)良. 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[2] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000.

[3] 朱積余，蔣 燚，丘小軍. 廣西紅錐地理種源試驗(yàn)初報(bào)[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，1997，26（2）：66-68.

[4] 朱積余，蔣 燚，潘 文. 廣西紅錐優(yōu)樹(shù)選擇標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2002，9（3）：109-113.

[5] 王以紅，陳曉明，蔡 玲，等. 大葉櫟組織培養(yǎng)再生植株的研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)， 2009，38（2）：71-74.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡 玲，等. 香樟優(yōu)良無(wú)性系快繁技術(shù)的研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25（1）：60-64.endprint