HPLC法測定牛黃上清膠囊中梔子苷含量*

楊長琴

(天津市濱海新區(qū)食品藥品檢驗檢測中心， 天津 300457)

HPLC法測定牛黃上清膠囊中梔子苷含量*

楊長琴

(天津市濱海新區(qū)食品藥品檢驗檢測中心， 天津 300457)

目的：建立HPLC法測定牛黃上清膠囊中梔子苷的含量。方法：采用Agela C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm),以甲醇-水(20∶80)為流動相，流速為0.8 ml/min，檢測波長為238 nm。結果：梔子苷線性范圍為0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9)，平均回收率為99.53%，RSD為0.57%(n=6)。結論：本方法可靠、靈敏、準確，適用于牛黃上清膠囊中梔子苷的質量控制。

HPLC，牛黃上清膠囊，梔子苷

牛黃上清膠囊處方由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、川芎、梔子等中藥材組成，具有清熱瀉火，散風止痛的功效。為了更加有效控制該制劑質量，本文采用HPLC法對處方梔子中梔子苷進行含量測定，該方法操作簡便、分離度好、專屬性強。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀LC-2010A，島津高效液相色譜儀工作站LC-Solution；十萬分之一分析天平(日本島津)；Agela C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ3200DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。梔子苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110749-201115，含量99.7%)；牛黃上清膠囊(江西天施康弋陽制藥有限公司，批號13090102、12070502、12060801)；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Agela C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(20∶80)；檢測波長：238 nm；流速：0.8 ml/min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對照品20.40 mg，置200 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻；精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品“裝量差異”項下的內容物，混勻，取約0.4 g，精密稱定，置25 ml量瓶中,加甲醇適量溶解，超聲處理(功率150 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻,濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按處方比例制備不含梔子的樣品，按“2.2.2”項下的方法制成陰性對照溶液。

2.2.4專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。結果顯示陰性對照在梔子苷相同保留時間處無干擾峰，見圖1。

1 梔子苷

2.3線性考查 精取對照品溶液5、10、15、20、25和30 μl，按“2.1”項下的色譜條件，以峰面積Y為縱坐標，進樣量X為橫坐標，得回歸方程Y=14 591.9X+1 630.9(r=0.999 9)。結果表明梔子苷在0.101 7～0.610 2 μg/ml范圍內呈良好的線性關系。

2.4精密度試驗 取對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，測定梔子苷峰面積，RSD為0.14%，說明該法精密度良好。

2.5重現(xiàn)性試驗 取同批號的樣品0.4 g(批號13090102)，精密稱取6份，按“2.2.2”項下方法制備，測定梔子苷含量，其RSD為0.10%，說明該法重現(xiàn)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取按“2.2.2”項下方法制備的供試品溶液(批號13090102)，分別在0、4、8、12、24、48和72 h測定，梔子苷峰面積RSD為0.67%，說明該溶液在72 h內穩(wěn)定。

2．7回收率試驗 取同批樣品(批號13090102，含量0.95 mg/粒)約0.2 g，精密稱取6份，分別置25 ml量瓶中，各精密加入梔子苷對照品溶液至刻度，按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率，結果梔子苷的平均回收率為99.53%，RSD為0.57%，見表1。

表1 加樣回收率試驗結果(n=6)

2.8樣品含量測定 取3批次的樣品，按“2.2.2”項下的方法制備，按“2.1”項下的色譜條件分析，根據供試品和對照品的峰面積，按外標法計算樣品含量，見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

3.1檢測波長的選擇 梔子苷在《中國藥典》2010年版一部梔子含量測定方法中波長選擇為238 nm[1]，本品采用藥典選用波長為該品種的測定波長，且梔子苷與其相鄰峰取得了較好的分離效果。

3.2流動相的選擇 根據文獻報道，考查了不同組分的流動相，將甲醇-水(20∶80)[1]、乙腈-水(15∶85)[2]、乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(8∶1∶91)[3]三種流動相進行比較，結果顯示以甲醇-水(20∶80)為流動相色譜分離效果最佳，系統(tǒng)保留時間適中，故將其確定為流動相。

3.3提取溶劑及提取方法的選擇 本實驗選擇50%甲醇和純甲醇作溶劑，分別超聲提取30 min，結果純甲醇提取樣品含量較高；又以純甲醇為溶劑，回流提取30 min，結果超聲提取較回流提取更為完全。因此最終選擇純甲醇超聲提取30 min，該法提取較為完全，且簡便易行，結果準確可靠。

1 中國藥典[S].一部.2010：231，491

2 馮亦穎，王巨存，徐學銳.高效液相色譜法測定龍膽瀉肝丸中梔子苷的含量[J].天津藥學，2008，20(3)： 11-13

3 紀曉影，畢開順，王洋，等.HPLC法同時測定抗感解毒顆粒中綠原酸、梔子苷和葛根素的含量[J].藥物分析雜志，2010，30(1)：56-58

DeterminationofgeniposideinNiuhuangshangqingCapsulesbyHPLC

Yang changqin

(Tianjin Binhaixinqu Center for Food and Drug Control,Tianjin 300457)

Objective: To establish a HPLC method for determinative of geniposide in Niuhuangshangqing Capsules.Method∶The Agela C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with the mobile phase consisted of methanol-water(20∶80),the flow rate was 0.8 ml/min,the detection wavelength was set at 238 nm.Result:The linear range of geniposide was 0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9),the average recovery rate was 99.53%,RSD was 0.57%(n=6).Conclusion∶The method is reliable,sensitive,accurate and can be used for the quality control of Niuhuangshangqing Capsules.

HPLC,Niuhuangshangqing Capsules,geniposide

2014-02-14

R927.2

A

1006-5687(2014)04-0018-03