毛細(xì)管電泳法測定水體中四環(huán)素類抗生素的基質(zhì)效應(yīng)及場放大進(jìn)樣技術(shù)的應(yīng)用

李愛梅， 黃 茁， 盧文平， 徐中其，3*

(1.東華大學(xué)化學(xué)化工與生物工程學(xué)院，上海201620;2.長江水利委員會長江科學(xué)院，湖北武漢430010;3.生態(tài)紡織教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海201620)

由于污水處理能力的限制以及畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖中的直接排放，環(huán)境水體中藥品與個(gè)人護(hù)理用品(pharmaceuticaland personalcare products，PPCPs)的殘留是當(dāng)前環(huán)境領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)問題［1］?？股厥且环N常見的PPCPs，特別是四環(huán)素類抗生素(tetracyclines，TCs)，其價(jià)格低廉，常被廣泛用于動物疾病的治療，并長期以亞治療劑量添加于動物飼料中用于動物疾病的預(yù)防和促進(jìn)動物生長，是目前用量最大且使用最為廣泛的藥物之一，其長期、大量、持續(xù)性地排放會造成水環(huán)境抗生素“假性持久性”污染，對生態(tài)環(huán)境以及人類健康造成危害［2］。因此，對環(huán)境水體中的 TCs，包括四環(huán)素(tetracycline，TC)、金 霉 素 (chlortetracycline，CTC)、土霉素(oxytetracycline，OTC)及強(qiáng)力霉素(doxycycline，DC)的監(jiān)測具有非常重要的意義。

目前，對 TCs的監(jiān)測主要集中在魚肉［3］、蜂蜜［4］及牛奶［5］等食品領(lǐng)域。環(huán)境水體中 TCs的殘留濃度較低且基質(zhì)成分復(fù)雜，通常需要繁瑣的前處理過程，如采用 C18 柱［6］、HLB 柱［6，7］以及雙柱串聯(lián)［8，9］等固相萃取(SPE)技術(shù)萃取富集水環(huán)境中的抗生素;其分離主要采用高效液相色譜(HPLC)配合紫外(UV)［8］、質(zhì)譜(MS)［9-11］、熒光(FLD)［12］等檢測技術(shù)或酶聯(lián)免疫［13］等方法。劉虹等［8］采用SPE-HPLC-UV技術(shù)檢測了水、沉積物和土壤中的氯霉素和3種 TCs，檢出限(LOD)在18～32 μg/L之間;魏瑞成等［11］采用SPE-HPLC-MS技術(shù)對江蘇省畜禽養(yǎng)殖場水環(huán)境中的TCs進(jìn)行了測定，TCs的檢出率在17.0%～60.4%之間，質(zhì)量濃度在0.07～72.9 μg/L之間。HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)具有良好的靈敏度及選擇性，但儀器價(jià)格昂貴;免疫檢測雖然成本低、速度快，但靈敏度不夠。毛細(xì)管電泳(CE)技術(shù)具有樣品前處理簡單、試劑消耗少(μL級別)與樣品用量小(nL級別)、分離速度快及分離效能高等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足水環(huán)境快速監(jiān)測的要求，降低采樣和運(yùn)送難度以及環(huán)境污染和對分析人員的傷害，是進(jìn)行水環(huán)境分析的一種有效手段。雖然CE的重現(xiàn)性和靈敏度(UV檢測)不高，但在許多方面CE擁有超越HPLC的能力，是仍在不斷發(fā)展的重要分離技術(shù)［14，15］。為了提高 CE分析的靈敏度，可以結(jié)合SPE樣品前處理技術(shù)，或者使用高靈敏的檢測技術(shù)，如質(zhì)譜［14］、電致化學(xué)發(fā)光［16］、化學(xué)發(fā)光［17］、激光誘導(dǎo)熒光［18］等。Miranda等［19］用 SPE 和離子交換樹脂兩種預(yù)處理方法，采用CE-UV檢測了雞肉中的TC、OTC、DC的含量，LOD最低可達(dá) 61～68 μg/kg。此外，CE柱內(nèi)預(yù)濃縮技術(shù)(stacking)也是有效提高靈敏度的途徑之一。Wang等［20］采用場放大電動進(jìn)樣模式(field-amplified sample injection，F(xiàn)ASI)柱內(nèi)預(yù)濃縮技術(shù)，結(jié)合MS檢測了牛奶中TC、CTC及OTC的含量，LOD可達(dá)到7.14～14.9 μg/L。

本研究采用壓力進(jìn)樣技術(shù)(hydrodynamic injection，HDI)發(fā)展了對水體中4種TCs的CE分離方法;在UV檢測條件下，綜合對比并評價(jià)了CE與HPLC這兩種分離技術(shù)對TCs的分析效率、重現(xiàn)性和靈敏度方面的優(yōu)劣;探究了水體基質(zhì)(如pH和水硬度)對TCs分離的影響;研究了FASI柱內(nèi)預(yù)濃縮技術(shù)提高CE對TCs分析靈敏度的可行性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

P/ACETMMDQ毛細(xì)管電泳儀(美國貝克曼庫爾特公司)，配光電二極管陣列(PDA)檢測器，波長范圍為190～600 nm，數(shù)據(jù)處理使用其自帶的32 Karat軟件。非涂層石英毛細(xì)管(60 cm(有效長度50 cm)×75 μm，河北永年銳灃色譜器件公司)。LC-20AT HPLC色譜儀，配SPD-20A型UV檢測器(日本島津公司)。

標(biāo)準(zhǔn)樣品為各鹽酸四環(huán)素類抗生素，包括TC、OTC、CTC和DC，購于上海麥倉生物科技有限公司;甲醇和乙腈均為色譜純(Adamas公司);其他試劑如 Na2HPO4·12H2O、NaOH、Na2EDTA·2H2O、草酸、硫酸鎂及無水氯化鈣均為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及緩沖溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量的TCs標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配成0.10 g/L的儲備液，置于-18℃冰箱中避光保存。CE實(shí)驗(yàn)前，用超純水稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液至所需的濃度;HPLC實(shí)驗(yàn)前，用流動相稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液至所需濃度。

CE背景緩沖電解液(background electrolyte，BGE)為30 mmol/L Na2HPO4+1.5 mmol/L Na2EDTA，用1.0 mol/L NaOH溶液調(diào)pH至11.0。為了保證BGE的穩(wěn)定性，需每周配制，并用0.22 μm的微孔濾膜過濾。

模擬水體不同的pH值由緩沖溶液控制:pH 2.0～3.0(30 mmol/L NaH2PO4+30 mmol/L H3PO4);pH 3.5～6.0(30 mmol/L檸檬酸鈉+30 mmol/L檸檬酸);pH 7.0～9.0(30 mmol/L Tris+1.0 mol/L HCl);pH 9.5～10.0(30 mmol/L Na2B4O7+1.0 mol/L NaOH);pH 11.0～12.0(30 mmol/L Na2HPO4+1.0 mol/L NaOH)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 CE 條件

新毛細(xì)管分別用超純水、甲醇、超純水、1.0 mol/L NaOH 及超純水沖洗 3.0、3.0、3.0、30、2.0 min后開始實(shí)驗(yàn);連續(xù)分析過程中，每次分析前用超純水、BGE各沖洗3.0 min。HDI進(jìn)樣模式的壓力為3.45 kPa(0.5 psi)，持續(xù)5.0 s;FASI進(jìn)樣模式下進(jìn)樣端施加電壓為+10 kV，持續(xù)2.0 min。CE分離電壓為+20 kV。毛細(xì)管采用液冷方式控制溫度為25℃，TCs的檢測波長為275 nm。

1.3.2 HPLC 分離條件

色譜柱為InerSustain C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(日本島津公司)，流動相為水-甲醇-乙腈(70∶10∶20，v/v/v;含 0.01 mol/L 的草酸，pH 2.13)，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為 20 μL，柱溫為 30℃，UV檢測波長為275 nm。

1.3.3 環(huán)境水樣品的前處理

實(shí)際水樣品分別為上海松江家庭飲用自來水及某魚塘水，采集后經(jīng)0.22 μm的濾膜過濾后直接用于測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 CE分離條件的優(yōu)化

2.1.1 緩沖液pH和濃度

TCs為氫化并四苯環(huán)衍生物，含有酚羥基、酰氨基(-CONH2)和二甲氨基(-N(CH3)2)等官能團(tuán)，是一種酸堿兩性化合物。圖1和表1為TCs的結(jié)構(gòu)式及在水溶液中的三級平衡常數(shù)［21］，可見4種TCs具有相似的化學(xué)性質(zhì)和相近的各級pKa值。CE是基于帶電離子在電場下淌度的差異而分離，所以緩沖溶液的pH選擇對TCs的分離尤為重要。TCs分離的常用緩沖體系主要有磷酸體系［19］和硼酸體系［4］，前者因緩沖范圍廣而較受歡迎。本實(shí)驗(yàn)為了了解磷酸緩沖體系對TCs分離的影響，詳細(xì)考察了濃度為30 mmol/L Na2HPO4，用1.0 mol/L檸檬酸或1.0 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH為2.5～12(間隔pH為0.5)情況下，TCs水溶液的分離情況。實(shí)驗(yàn)表明:當(dāng)pH小于10.0時(shí)，目標(biāo)物不能完全分離;當(dāng)pH介于10.5～11.5之間時(shí)，4種TCs可以達(dá)到基線分離且峰形良好(見圖2)。本實(shí)驗(yàn)在該pH范圍內(nèi)更仔細(xì)地考察了pH(間隔pH為0.2)對TCs的分離影響，發(fā)現(xiàn):隨著 pH值增大，TC、OTC和 DC的峰形變化不明顯，但CTC在11.0時(shí)峰最高。根據(jù)CTC在強(qiáng)堿性條件下容易形成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的異氯四環(huán)素的性質(zhì)［22］，BGE堿性增強(qiáng)易削弱CTC自身結(jié)構(gòu)的峰信號，所以確定 BGE的最佳 pH值為11.0。在該條件下4種TCs均以陰離子形式存在，且藥物相對穩(wěn)定，分離選擇性好，平均分離度(Rs)為2.78。

圖1 四環(huán)素類抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of tetracyclines

表1 4種TCs的pKa值Table 1 pKaof the four TCs

圖2 4種TCs在不同pH值BGE下的電泳譜圖Fig.2 Electropherograms of the four tetracyclines in the BGEs with different pHs

確定緩沖體系為Na2HPO4(pH 11.0)后，實(shí)驗(yàn)考察了Na2HPO4的濃度(10～150 mmol/L)對TCs分離的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著緩沖液濃度的升高，BGE的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率增強(qiáng)，體系的電滲流(EOF)減小，分離度得到提高，但分離電流增大導(dǎo)致焦耳熱嚴(yán)重，且遷移時(shí)間明顯增加;當(dāng)Na2HPO4濃度低于30 mmol/L時(shí)，TCs不能達(dá)到基線分離，故選擇30 mmol/L Na2HPO4(pH 11.0)作為最優(yōu)的BGE。

2.1.2 分離電壓的選擇

因焦耳熱會影響樣品的出峰時(shí)間，并引起峰擴(kuò)展，CE分離一方面希望在高電壓下得到更快的分離速度，同時(shí)又希望毛細(xì)管內(nèi)產(chǎn)生的焦耳熱不影響峰形的尖銳與對稱，從而不影響Rs。實(shí)驗(yàn)考察了分離電壓在+5～+25 kV的范圍內(nèi)對分離的影響。結(jié)果顯示:當(dāng)分離電壓為+5 kV時(shí)，出峰時(shí)間延長至35 min;當(dāng)分離電壓為+10 kV時(shí)，出峰時(shí)間為15 min;當(dāng)分離電壓大于+20 kV時(shí)，焦耳熱增加且Rs降低。綜合考慮，選擇+20 kV作為最優(yōu)的分離電壓，此時(shí)出峰時(shí)間為7～9 min。

2.2 水體基質(zhì)效應(yīng)對TCs分離的影響

2.2.1 水體 pH 值

環(huán)境水體的pH值會受到方方面面的影響:當(dāng)水中含有大量的游離二氧化碳，或受酸性工業(yè)廢水等污染時(shí)，水的pH值會降低;當(dāng)水中含有堿性物質(zhì)(碳酸鹽或氫氧化物)時(shí)，水的pH值則會增高。天然水體的pH一般在6.0～9.0范圍內(nèi)，飲用水的pH值則要求在6.5～8.5之間。研究不同pH值水體中TCs的分離情況，有助于對環(huán)境中該類污染物的準(zhǔn)確定性和定量分析。為了構(gòu)建穩(wěn)定的pH值環(huán)境，實(shí)驗(yàn)中將TCs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用不同pH值的模擬水體(從強(qiáng)酸到強(qiáng)堿，見1.2節(jié))稀釋到一定濃度后進(jìn)行CE分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水體的pH主要影響CTC和DC的出峰，當(dāng)pH值大于7時(shí)，CTC的峰高會隨pH增大而降低，同時(shí)DC的峰會增高(見圖3)。通過對單標(biāo)準(zhǔn)溶液CTC做相同實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在pH大于7時(shí)，CTC位于8.06 min的出峰峰高會逐漸降低，而位于8.56 min的出峰峰高會逐漸增高，與DC的出峰時(shí)間重合。該結(jié)果證明:在堿性條件下，CTC轉(zhuǎn)化為內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，其峰與DC出峰重疊。在強(qiáng)堿性(pH 12.0)條件下，CTC會全部轉(zhuǎn)變?yōu)槠鋬?nèi)酯結(jié)構(gòu);在弱酸性(pH 4.60)條件下，CTC主要以其自身的結(jié)構(gòu)存在，所以測定堿性水體中的CTC和DC時(shí)需要注意水體pH值的影響。在pH為4.60～12.0時(shí)通過對CTC單標(biāo)準(zhǔn)溶液定量分析發(fā)現(xiàn)，隨著pH值的增大CTC轉(zhuǎn)換成為內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的比率由18.7%增加到100%。

圖3 不同pH值模擬水樣中4種TCs的電泳譜圖Fig.3 Electropherograms of the four tetracyclines in artificial environmental water with different pHs

2.2.2 水體硬度

天然環(huán)境水體中含有各種金屬離子，特別是含有大量的鈣離子和鎂離子，其總量即為水體總硬度。實(shí)驗(yàn)中考察了水體基質(zhì)中鈣、鎂離子對TCs分離的影響。在混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(總濃度約24.0 μmol/L)中分別添加濃度為0～1.0 mmol/L的 Mg2+和Ca2+后進(jìn)行CE分析，其TCs電泳譜圖見圖4a和b。結(jié)果顯示:當(dāng)Mg2+濃度較低時(shí)，TCs峰形變化不明顯;Mg2+濃度增加至0.3 mmol/L時(shí)，峰會展寬;Mg2+濃度較高(＞0.3 mmol/L)時(shí)，峰形變差，TCs不能達(dá)到基線分離(見圖4a)。通過研究Mg2+對各單標(biāo)準(zhǔn)溶液出峰的影響，發(fā)現(xiàn):Mg2+大量存在將導(dǎo)致TC和DC的峰嚴(yán)重?cái)U(kuò)展，從而使得整體分離情況嚴(yán)重惡化。此外，當(dāng)Ca2+濃度低時(shí)，對TCs的分離影響較小;但隨著濃度的增加，TCs的峰會發(fā)生擴(kuò)展，但峰形尚可(見圖4b)。由此可見，Ca2+比Mg2+對水體中TCs的分離影響小。由于TCs分子中含有許多羥基、烯醇基及羰基，在近中性條件下，這些基團(tuán)能與金屬離子形成不溶性配合物，如與鈣或鎂離子形成不溶性的鈣鹽或鎂鹽，而與Mg2+的結(jié)合強(qiáng)度大于Ca2+，因此Mg2+對于TCs分離的影響更強(qiáng)。

在BGE中加入添加劑是一種有效消除基體干擾的方式。在水溶液中EDTA具有廣泛的配位性能，幾乎能與所有金屬離子迅速形成配合物。因此，實(shí)驗(yàn)考慮在BGE中添加一定量的EDTA來排除Ca2+和Mg2+(特別是Mg2+)對TCs分離的影響。結(jié)果顯示，在BGE中添加1.5 mmol/L Na2EDTA后，即使樣品中含有較高濃度的Mg2+，TCs的整體分離情況也不會受到影響(見圖4c)。除了考察了Ca2+和Mg2+對TCs分離的影響外，也考察了Na+和Fe2+對TCs分離的影響，發(fā)現(xiàn)Na+由于不具備配合效應(yīng)，對TCs的分離基本沒有影響;而Fe2+則會對TCs的分離有影響。

圖4 BGE中(a，b)不添加EDTA時(shí)不同濃度的Mg2+、Ca2+及(c)添加1.5 mmol/L EDTA時(shí)不同濃度的Mg2+對4種TCs分離的影響Fig.4 Effects of(a，b)different concentrations of Mg2+，Ca2+without addition of EDTA in BGE and(c)different concentrations of Mg2+with addition of 1.5 mmol/L EDTA in BGE on the separation of the four tetracyclines

2.3 CE與HPLC對TCs分析性能的比較

HPLC是公認(rèn)的TCs有效分析方法，為了探究CE對TCs分析的適用性，本文全面對比了CE和HPLC對4種TCs的分析性能，包括分析時(shí)間、精密度、線性范圍以及靈敏度。

(1)分析時(shí)間:采用CE方法在9.0 min內(nèi)可以對4種TCs完成分離;采用HPLC方法，在等度洗脫模式下需要18.0 min能完成分離;采用梯度洗脫模式時(shí)分析時(shí)間可縮短至13 min，但TC與OTC的分離度降低，且隨著樣品濃度的降低基線受流動相變化影響嚴(yán)重，不利于CTC和DC靈敏度的提高，且連續(xù)實(shí)驗(yàn)之間柱平衡時(shí)間較長。圖5a為HPLC分離譜圖，圖5b和c為CE分離譜圖。可見，CE具有更快的分離速度，分析時(shí)間較HPLC可縮短一半左右;且兩次分析之間，CE只需要用超純水和BGE分別沖洗毛細(xì)管3.0 min即可，因此CE方法的分離效率明顯優(yōu)于HPLC。

(2)精密度:在CE分離中，出峰時(shí)間和峰面積的精密度影響著對目標(biāo)物的正確定性和定量。在CE進(jìn)樣方式中，HDI是一種最常見、重現(xiàn)性最好的方式。本文采用HDI方式考察其精密度。日內(nèi)連續(xù)6次測定的結(jié)果可見，4種TCs出峰時(shí)間的RSD在0.42%～0.56%之間，峰面積的RSD在2.24%～2.95%之間;連續(xù)5日測定的日間RSD也均低于5%。采用HPLC方法，TCs出峰時(shí)間和峰面積的RSD范圍分別為0.13%～0.77%和1.62%～3.05%(見表2)?？梢奀E-HDI和HPLC方法均具有良好的精密度，均可以對一定濃度的樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析。

(3)線性范圍及LOD:采用CE和HPLC兩種方法對不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，得到峰面積平均值(重復(fù)3次)與濃度的線性關(guān)系。采用CE-HDI方法，4種TCs在所考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其相關(guān)系數(shù)R2平均為0.996 4;LOD(S/N=3)為0.28～0.62 mg/L。采用HPLC分析時(shí)，為避免背景電解質(zhì)濃度變化引起的基線波動，實(shí)驗(yàn)選擇用流動相稀釋得到系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，4種TCs在所考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5;LOD(S/N=3)在4.6～22.0 μg/L之間(見表2)?？梢?，采用 HPLC方法比CE-HDI具有更高的靈敏度，其平均LOD約為CE的1/40，因此提高CE對TCs分析的靈敏度是增加其實(shí)用性的關(guān)鍵。

2.4 加標(biāo)回收率

采用CE-HDI方法對采集的自來水及魚塘水進(jìn)行檢測，均未檢出TCs的存在。以自來水和魚塘水作為空白基質(zhì)，考察了4種TCs的加標(biāo)回收率。分別在自來水和魚塘水中添加3.0 mg/L的TCs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率測定試驗(yàn)，譜圖見圖5d。結(jié)果顯示，該添加水平下TC、CTC、OTC及DC在自來水中的平均回收率(n=3)分別為101.4%、96.3%、107.2%、97.2%，魚塘水中的平均回收率分別為92.4%、87.1%、91.4%、105.2%，表明本文所建立的分析方法可靠。

表2 CE-HDI、CE-FASI和HPLC方法測定TCs的線性范圍、重現(xiàn)性及靈敏度比較Table 2 Comparison of linear ranges，repeatabilities and sensitivities of CE-HDI，CE-FASI and HPLC methods for the determination of TCs

圖54 種TCs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的(a)HPLC、(b)CE-HDI和(c)CE-FASI分析譜圖及(d)CE-HDI檢測魚塘水中添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.0 mg/L)的電泳譜圖Fig.5 Chromatograms of mixed solutions of the four TCs by(a)HPLC，(b)CE-HDI and(c)CE-FASI，and(d)a fishpond water sample spiked with 3.0 mg/L TCs by CE-HDI

2.5 FASI技術(shù)對TCs分析靈敏度的提高

上述實(shí)驗(yàn)表明，采用CE-HDI-UV技術(shù)對TCs的分析靈敏度在mg/L級，而自然環(huán)境水體中TCs的含量通常為痕量，故需要進(jìn)一步提高CE方法的靈敏度。在CE進(jìn)樣方式中，場放大電動進(jìn)樣(FASI)是一種簡單有效的柱內(nèi)預(yù)濃縮技術(shù)，通常樣品的電導(dǎo)率遠(yuǎn)低于BGE的電導(dǎo)率，當(dāng)毛細(xì)管整體被施加一定電壓時(shí)，樣品區(qū)帶處的電場強(qiáng)度會遠(yuǎn)高于BGE處的場強(qiáng)。當(dāng)樣品離子遷入BGE時(shí)，由于場強(qiáng)突降，樣品離子的移動速度迅速變小，因此離子就會在不同區(qū)帶的界面處堆積。將4種TCs的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度降為原來的1/10(即0.3 mg/L)，在HDI進(jìn)樣模式下檢測不到目標(biāo)峰。另外，此濃度樣品的pH值約為4.6，而TCs的等電點(diǎn)(pI)為5.0左右［23］，因此，被分析物是以正離子形態(tài)存在。在進(jìn)樣口施加+10 kV電壓，進(jìn)樣時(shí)間優(yōu)化后為2.0 min(避免樣品超載的同時(shí)盡量增加進(jìn)樣量)，得到的電泳譜圖如圖5c所示。在FASI進(jìn)樣模式下4種TCs在0.2～2.0 mg/L范圍內(nèi)峰面積與濃度的線性關(guān)系良好(R2=0.995 8)，各組分的LOD在17.8～35.5 μg/L之間，其靈敏度較HDI提高(平均約為HDI的1/16)，可以滿足畜禽養(yǎng)殖場水環(huán)境中TCs污染水平的檢測要求，達(dá)到了HPLC的數(shù)量級(μg/L)。為了考察FASI方法的重現(xiàn)性，日內(nèi)連續(xù)6次進(jìn)樣，結(jié)果(見表2)顯示，出峰時(shí)間的RSD在0.85%～0.95%之間，峰面積的RSD在1.69%～3.43%之間;連續(xù)5日測定的日間RSD也均小于5%，表明CE-FASI具有良好的重現(xiàn)性。

3 結(jié)論

本研究建立了水體中4種TCs的CE分析方法，考察了BGE組成、pH值、添加劑及分離電壓等因素對4種TCs分離的影響。詳細(xì)考察了水體的基質(zhì)(pH值和水硬度)對TCs分離的影響，發(fā)現(xiàn)在強(qiáng)堿性條件下，金霉素易形成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，其出峰與強(qiáng)力霉素重疊，影響兩者的定量分析。通過在BGE中添加EDTA，可消除水體中鈣、鎂離子因與TCs形成配合物而對TCs分離產(chǎn)生的嚴(yán)重干擾。采用FASI進(jìn)樣方式，將CE方法的靈敏度提高(檢出限約為CE-HDI的1/16)，在同樣采用紫外檢測的條件下，LOD 達(dá)到 μg/L級，在17.8～35.5 μg/L之間，該靈敏度與本文中的HPLC-UV方法及文獻(xiàn)報(bào)道的SPEHPLC-UV方法［8］處于同一數(shù)量級，但分析時(shí)間、采集樣品量及樣品前處理等方面，CE方法具有顯著優(yōu)勢，能夠滿足畜禽養(yǎng)殖場水環(huán)境中TCs的檢測要求。因此，CE方法具有巨大的潛力，結(jié)合樣品前處理或開發(fā)柱內(nèi)預(yù)濃縮技術(shù)，進(jìn)一步改善其分析靈敏度，將極大地促進(jìn)CE方法在水環(huán)境監(jiān)測中的廣泛應(yīng)用。

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