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    高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法同時測定羊棲菜5個部位中10種植物激素含量

    2014-08-03 09:26:26徐繼林鄭立洋嚴(yán)小軍駱其君
    色譜 2014年8期
    關(guān)鍵詞:戊烯腺嘌呤乙酸

    李 艷, 徐繼林, 鄭立洋, 李 敏, 嚴(yán)小軍, 駱其君

    (寧波大學(xué)海洋學(xué)院,浙江寧波315211)

    羊棲菜,拉丁學(xué)名 Sargasum fusiforme(Hary.)Seichell,屬于圓子綱馬尾藻屬植物,別名鹿角尖、海大麥等。羊棲菜具有抗腫瘤[1]、調(diào)節(jié)免疫功能[2]、降血糖[3]、降血脂[4]、抗凝血[3]、清除體內(nèi)自由基[3,4]等藥理作用,另有研究證明羊棲菜能夠改善海域水質(zhì)環(huán)境[5]。

    植物激素在植物體內(nèi)的含量極其小,但對植物的生長發(fā)育有重要的調(diào)控作用[6]。它能夠調(diào)節(jié)植物細(xì)胞分裂與生長、各類組織分化、植物成熟與衰敗,還能夠影響植物形態(tài)建成,輔助離體組織培養(yǎng)[7]。對羊棲菜各部位的植物激素成分含量進(jìn)行分析,不但能夠幫助我們了解羊棲菜生長發(fā)育周期的各種生理變化,而且可以通過控制羊棲菜生長發(fā)育過程中外源激素的用量調(diào)控羊棲菜的生長發(fā)育。

    植物激素的檢測方法主要包括光譜法[8,9]、毛細(xì)管電泳法[10]、電化學(xué)生物傳感器檢測法[11]、氣相色譜法[12]、高效液相色譜法[13,14]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等[15-18]。其中光譜法的準(zhǔn)確度較低;毛細(xì)管電泳法重現(xiàn)性較差;電化學(xué)生物傳感器檢測法主要局限于檢測單種植物激素,還有待于進(jìn)一步研究開發(fā);使用氣相色譜法檢測植物激素的缺點是樣品需要預(yù)先進(jìn)行衍生化處理,一方面步驟繁瑣,另一方面不同的植物激素需要采用不同的衍生化方法,不能同時檢測多種植物激素;采用高效液相色譜法檢測植物激素,解決了氣相色譜法需要衍生化的缺點,但是同時檢測多種植物激素時,在幾種成分保留時間非常接近的情況下會出現(xiàn)相互干擾的現(xiàn)象;相比較而言,液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是一種更為可靠的分析植物激素的方法。

    目前尚未有對羊棲菜各個部位的激素含量進(jìn)行全面系統(tǒng)分析的研究。本文建立了一種采用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用方法,對羊棲菜主分支、側(cè)分支、初生葉、次生葉、莖等5個部位的吲哚乙酸(indole-3-acetic acid)、異戊烯腺嘌呤[N6-(2-isopentenyl)adenine]、玉米素(zeatin)、異戊烯腺苷[N6-(2-isopentenyl)adenosine]、反式玉米素核苷(trans-zeatin riboside)、獨角金內(nèi)酯(strigolactone)、水楊酸(salicylic acid)、茉莉酸(jasmonic acid)、脫落酸(abscisic acid)、赤霉素(gibberellin A3)等10種植物激素含量進(jìn)行了分析。該方法便捷、可靠,可以推廣應(yīng)用于同時分析不同植物的多種植物激素。

    1 實驗部分

    1.1 儀器、材料與試劑

    美國ThermoFisher Scientific公司TSQ Quantum Access液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析系統(tǒng);法國Millipore公司超純水系統(tǒng);國產(chǎn)TP300超聲波清洗機(jī)。

    新鮮羊棲菜樣品采集于浙江沿海,包含主分支、側(cè)分支、初生葉、次生葉、莖等5個部位。標(biāo)準(zhǔn)品吲哚乙酸、異戊烯腺苷、異戊烯腺嘌呤、反式玉米素核苷、玉米素、獨角金內(nèi)酯、脫落酸、水楊酸、赤霉素、茉莉酸、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)購自美國Sigma-Aldrich公司。色譜純甲醇、甲酸、乙酸購自美國Tedia公司;超純水系統(tǒng)自制純水;其他為國產(chǎn)分析純試劑。

    1.2 激素提取方法

    參照文獻(xiàn)[19,20]的樣品處理方法,準(zhǔn)確稱取新鮮采集的羊棲菜樣品1 g(每組3份平行樣),冷凍干燥、液氮冰浴研磨后,加入1 mL甲醇/水/甲酸(15∶4∶1,v/v/v)(含 0.5%BHT),超聲(功率 30 W,頻率40 kHz)提取20 min,放入-20℃冰箱內(nèi)避光浸泡提取16 h,然后在4℃、10 000 r/min條件下離心10 min,吸取上清液置于4 mL棕色樣品瓶中,用0.5 mL 甲醇/水/甲酸(15∶4∶1,v/v/v)(含 0.5%BHT)再提取2次;合并上清液,于35℃下減壓蒸發(fā)至干,用 0.5 mL 甲醇/水/乙酸(90∶10∶0.05,v/v/v)復(fù)溶,于4℃、10 000 r/min條件下離心10 min,取上清液供LC-MS分析。每個樣品平行分析3次,取均值。

    1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液

    1.3.1 用于正離子掃描模式的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液

    準(zhǔn)確稱取吲哚乙酸、異戊烯腺嘌呤、玉米素、異戊烯腺苷、反式玉米素核苷、獨角金內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品各10.0 mg。其中異戊烯腺苷、異戊烯腺嘌呤、反式玉米素核苷、玉米素標(biāo)準(zhǔn)品在甲醇中不易溶解,需先用少量的1 mol/L鹽酸溶解;吲哚乙酸、獨角金內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品用少量甲醇溶解;將二者混合后用甲醇定容至10.0 mL,配成1 g/L用于正離子掃描模式的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

    1.3.2 用于負(fù)離子掃描模式的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液

    準(zhǔn)確稱取水楊酸、茉莉酸、脫落酸、赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品各10.0 mg,用少量甲醇溶解、定容至10.0 mL,配成1 g/L用于負(fù)離子掃描模式的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

    1.4 色譜-質(zhì)譜條件

    色譜條件:Hypersil Gold C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)(美國 Thermo Fisher Scientific公司),流動相為水(A)和甲醇(B)。洗脫梯度:20 min內(nèi)B相由15%升到100%,保持5 min;然后B相在1 min內(nèi)降到10%,保持10 min。流速為0.3 mL/min,柱溫為30℃,進(jìn)樣量為15 μL。

    質(zhì)譜條件:電噴霧電離源電離,在正離子電離模式下噴霧電壓為3 kV,負(fù)離子電離模式下噴霧電壓為2.5 kV;鞘氣壓力為30 L/min;輔助氣流量為2 L/min;離子傳輸毛細(xì)管溫度為300℃,Q2碰撞室碰撞誘導(dǎo)解離電壓為1.5 V,采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)模式掃描;氬氣的碰撞氣壓為0.199 5 Pa。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 提取方法的優(yōu)化

    按1.4節(jié)的色譜-質(zhì)譜條件檢測已提取了植物激素的羊棲菜樣品殘渣,殘渣中沒有檢出10種植物激素。將該殘渣干燥,取1 g干燥樣品(每組3個平行樣),加入20 μL 1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,再加入1 mL 甲醇/水/甲酸(15∶4∶1,v/v/v)(含 0.5%BHT),超聲(功率30 W,頻率40 kHz)提取20 min,放入-20℃冰箱內(nèi)避光浸泡提取;分別提取1、8、16、24 h,然后進(jìn)行測定,計算目標(biāo)物的回收率,結(jié)果如圖1所示??梢钥闯?,隨著提取時間的延長,回收率逐漸提高,但是提取16 h和24 h的回收率變化不大,甚至有個別植物激素在提取24 h時其回收率略有降低,這是因為植物激素較不穩(wěn)定,提取時間過長反而引起部分損失。綜合考慮,選取提取16 h。

    圖1 提取時間對10種植物激素回收率的影響Fig.1 Effect of extraction time on the recoveries of the ten phytohormones

    2.2 植物激素標(biāo)準(zhǔn)品的LC-MS分析

    取1.3節(jié)中配制的10種植物激素混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液,稀釋成1 mg/L的植物激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.4節(jié)的色譜-質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析,從10種植物激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖(見圖2)可以看出,在該LC-MS條件下,10種植物激素互不干擾,能夠得到較好的分離。

    以流動注射方式對10種植物激素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行ESI-MS分析,吲哚乙酸、異戊烯腺嘌呤、玉米素、異戊烯腺苷、反式玉米素核苷、獨角金內(nèi)酯在正離子模式下主要產(chǎn)生[M+H]+準(zhǔn)分子離子峰,其m/z分別為 176.0、204.2、220.0、336.1、352.0 和 299.3;水楊酸、茉莉酸、脫落酸和赤霉素在負(fù)離子模式下主要產(chǎn)生[M-H]-準(zhǔn)分子離子峰,m/z分別為137.0、209.0、263.0、345.0。

    在SRM模式下獲得10種植物激素的特征碎片離子(見表1)。選取通道1的離子為定量離子,其他離子為輔助定性離子。

    圖2 10種植物激素標(biāo)準(zhǔn)品的選擇反應(yīng)監(jiān)測離子流圖Fig.2 Selected reaction monitoring chromatograms of the ten phytohormone standards

    表1 10種植物激素標(biāo)準(zhǔn)品在SRM模式下獲得的特征碎片離子Table 1 Characteristic fragment ions of the ten phytohormone standards obtained by TQMS in SRM mode

    2.3 線性范圍與檢出限

    用混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液分別配制用于正、負(fù)離子掃描模式的系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,并進(jìn)行測定,每個濃度測定3次,以目標(biāo)組分定量離子的峰面積平均值(Y)對質(zhì)量濃度(X,μg/L)進(jìn)行線性回歸分析,得到10種植物激素的線性方程和相關(guān)系數(shù)(r);以信噪比(S/N)為3確定10種組分的檢出限(LOD),結(jié)果見表2。

    表2 10種植物激素的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限Table 2 Regression equations,linear ranges,correlation coefficients(r)and limits of detection(LODs)of the ten phytohormones

    2.4 加標(biāo)回收率和精密度

    將已提取過植物激素的羊棲菜樣品殘渣干燥,取1 g干燥樣品,加入質(zhì)量濃度為1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL,按照1.2節(jié)的方法處理樣品,然后按1.4節(jié)的條件進(jìn)行LC-MS分析,計算得到的加標(biāo)回收率見表3。可見方法的加標(biāo)回收率在72.24%~91.31%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均不高于6.59%,表明本實驗的可靠性較高。

    表3 空白基質(zhì)中10種植物激素的加標(biāo)回收率和RSD(n=3)Table 3 Recoveries and RSDs of the ten phytohormones spiked in blank matrix(n=3)

    2.5 羊棲菜各部位激素含量的測定

    按照建立的方法對羊棲菜5個部位的10種植物激素含量進(jìn)行了分析,每個部位樣品測定3個平行樣品,取平均值。表4為新鮮羊棲菜5個部位樣品中10種植物激素含量的檢測結(jié)果,可以看出,在新鮮樣品中,各種激素的含量范圍為未檢出至4 041.431 ng/g。其中,吲哚乙酸、脫落酸在羊棲菜中總體含量比較高,吲哚乙酸主要分布在羊棲菜的莖中,含量達(dá)到4 041.431 ng/g,脫落酸主要分布在羊棲菜的主分支中,含量達(dá)到1 469.515 ng/g;茉莉酸和水楊酸都是特定環(huán)境刺激下誘導(dǎo)產(chǎn)生的植物激素,這兩種激素在羊棲菜次生葉中含量較高,分別為259.983 ng/g和314.855 ng/g;異戊烯腺苷、異戊烯腺嘌呤、反式玉米素核苷和玉米素都屬于細(xì)胞分裂素,表4中可見羊棲菜各部位異戊烯腺嘌呤的含量均高于異戊烯腺苷,這是因為在植物中異戊烯腺苷是游離態(tài),異戊烯腺嘌呤是結(jié)合態(tài)。這也驗證了植物中結(jié)合態(tài)細(xì)胞分裂素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于游離態(tài)的細(xì)胞分裂素這一結(jié)論[21]。赤霉素在羊棲菜次生葉及莖中含量較高,它的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞的伸長。獨角金內(nèi)酯是結(jié)構(gòu)形式較新的一類植物激素,主要參與調(diào)控植物側(cè)枝的形成[22-24],其含量在主分支中最高,達(dá)到534.833 ng/g,其次是在莖中,含量最低是在次生葉中,含量為3.360 ng/g。

    表4 羊棲菜5個部位樣品中10種植物激素的含量Table 4 Contents of the ten phytohormones in five parts of Sargasum fusiforme(Hary.)Seichell

    3 結(jié)論

    本文建立了一種采用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析系統(tǒng)、電噴霧電離正/負(fù)離子掃描模式同時分析羊棲菜主分枝、側(cè)分枝、初生葉、次生葉、莖等5個部位中吲哚乙酸、異戊烯腺苷、異戊烯腺嘌呤、反式玉米素核苷、玉米素、獨角金內(nèi)酯、脫落酸、水楊酸、赤霉素、茉莉酸等10種植物激素含量的方法。該方法的精密度良好,可靠性較高,可以用于同時分析多種植物激素。

    [1] Luan Z W,Dong F,Ji Y B.Heilongjiang Medicine Journal(欒志偉,東方,季宇彬,等.黑龍江醫(yī)藥),2013,26(4):592

    [2] Wang W,Lu J B,Wang C,et al.Inte J Biolog Macromole,2013,58:127

    [3] Xie H J,Ye H X,Shen T,et al.Journal of Zhejiang Agricultural Sciences(謝何杰,葉慧嫻,沈婷,等.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)),2014(4):487

    [4] Yu Z Q,Shuai L,Li S Y,et al.Journal of Medical Research(于竹芹,帥莉,李生堯,等.醫(yī)學(xué)研究雜志),2011,40(8):43

    [5] Si Y Y,Yu X Y,Li S B,et al.Guangdong Agricultural Sciences(司圓圓,余祥勇,李雙波,等.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)),2013,40(4):144

    [6] Zhang S S,Cai Z Y,Wang X L.PNAS,2009,106(11):4543

    [7] Santner A,Calderon-Villalobos L I A,Estelle M.Nat Chem Biol,2009,5(5):301

    [8] Li Y N,Wu H L,Zhu S H,et al.Anal Sci,2009,25:83

    [9] Zhang L,Guan H L,He Z K.Science China:Chemistry,2010,53(1):245

    [10] Ji Y B,Wang C,Wu T,et al.Chinese Journal of Chromatography(季宇彬,王翀,吳濤,等.色譜),2007,25(3):322

    [11] Li Q,Wang R Z,Huang Z G,et al.Chinese Chemical Letters,2010,21:472

    [12] Liu Z Y,Shen C Z,Dong Y Y.Chemistry and Bioengineering(劉志勇,沈春章,董元彥.化學(xué)與生物工程),2006,23(2):55

    [13] Zhou Y M,Xin X.Food Science(周艷明,忻雪.食品科學(xué)),2010,31(18):301

    [14] Zhang Y Q,Zhong Y L,Gao C Y,et al.Chinese Journal of Chromatography(張玉瓊,仲延龍,高翠云,等.色譜),2013,31(8):800

    [15] Durgbanshi A,Arbona V,Pozo O,et al.J Agric Food Chem,2005,53:8437

    [16] Chiwocha S D S,Cutler A J,Abrams S R,et al.Plant J,2005,42:35

    [17] Pan X,Welti R,Wang X.Phytochemistry,2008,69:1773

    [18] Xie H B,Zhou M Y,Zhao H F,et al.Chinese Journal of Chromatography(謝寒冰,周明瑩,趙海峰,等.色譜),2014,32(5):493

    [19] Kojima M,Kamada-Nobusada T,Komatsu H,et al.Plant Cell Physiol,2009,50(7):1201

    [20] Wu Q,Wang L,Wu D P,et al.Chinese Journal of Chromatography(吳倩,王璐,吳大朋,等.色譜),2014,32(4):319

    [21] Olsson J,Claeson K,Karlberg B,et al.J Chromatogr A,1998,824:231

    [22] Rameau C.C R Biologies,2010,333:344

    [23] Gomez-Roldan V,F(xiàn)ermas S,Brewer P B,et al.Nature,2008,455:189

    [24] Umehara M,Hanada A,Yoshida S,et al.Nature,2008,455:195

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