高效液相色譜法測(cè)定酚類化合物

林 芳

(昆明市城市排水監(jiān)測(cè)站，云南 昆明 650031)

1 引言

高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn);進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜的特點(diǎn):高壓，高速，高效，高靈敏度。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn):速度快，分辨率高，靈敏度高，色譜柱可反復(fù)使用，樣品量少，容易回收。

酚類化合物是造成環(huán)境污染的重要工業(yè)化學(xué)品，不但有毒，而且它可使水帶有討厭的氣味和顏色，因而水中酚類物質(zhì)測(cè)定具有重要意義［1］。目前水質(zhì)分析中常用4－氨基安替比林萃取光度法測(cè)定揮發(fā)酚［2，3］，而用高效液相色譜測(cè)對(duì)苯酚、間甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚等酚類的測(cè)定不常用。

測(cè)定中影響高相液相色譜儀測(cè)定酚類化合物出峰因素較多，本文主要通過(guò)不同梯度淋洗來(lái)研究4種酚的出峰時(shí)間，從而找到最合適的測(cè)定淋洗梯度。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 主要儀器和試劑

美國(guó)Waters公司高相液相色譜儀，包括2690Alliance分離系統(tǒng) (四元泵及自動(dòng)進(jìn)樣器)，2487紫外檢測(cè)器。乙腈:高效液相色譜專用 (fisher公司)。甲醇:色譜純，無(wú)酚高純水。苯酚、間甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

2.2 色譜條件

色譜柱:Waters spherisorb C－18(4.6×250mm，5μm);流動(dòng)相:A乙腈，B無(wú)酚高純水。進(jìn)樣量:10μl。檢測(cè)器:UV －280nm［4］。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

苯酚、間甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度均為1000mg/L，將1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇稀釋成所需的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。所有標(biāo)準(zhǔn)溶液在0～4℃下保存。

2.4 定性與定量方法

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間、色譜圖定性，依次配制不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。

3 結(jié)果與討論

3.1 淋洗梯度

梯度淋洗1:開(kāi)始 (30%A+70%B)，15min(80%A+20%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗2:開(kāi)始 (30%A+70%B)，15min(80%A+20%B)，16min(30%A+70%B)，20min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗3:開(kāi)始 (30%A+70%B)，20min(80%A+20%B)，21min(30%A+70%B)，25min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗4:開(kāi)始 (30%A+70%B)，25min(80%A+20%B)，26min(30%A+70%B)，30min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

3.2 不同梯度出峰時(shí)間

梯度1出峰時(shí)間:苯酚:3.830;間甲酚:5.443;2，4－二氯酚:10.108;2，4，6－三氯酚:13.417。

梯度2出峰時(shí)間:苯酚:5.037;間甲酚:6.228;2，4－二氯酚:9.423;2，4，6－三氯酚:11.02。

梯度3出峰時(shí)間:苯酚:5.566;間甲酚:6.889;2，4－二氯酚:10.647;2，4，6－三氯酚:12.561。

梯度4出峰時(shí)間:苯酚:6.154;間甲酚:7.659;2，4－二氯酚:11.047;2，4，6－三氯酚:13.261。

從圖1可以看出梯度1中4個(gè)酚類所用的出峰時(shí)間最長(zhǎng)，雖然梯度1只用15min所有峰就分離完全，但該梯度經(jīng)15min后未經(jīng)緩沖就直接進(jìn)入下一個(gè)樣品梯度，即80%A+20%B直接就進(jìn)入開(kāi)始(30%A+70%B)，4個(gè)峰之間間隔時(shí)間太長(zhǎng)，單個(gè)酚峰重疊性不好。

梯度2的出峰時(shí)間是4個(gè)梯度最少的，各個(gè)峰分離度最好，每一個(gè)樣品所用時(shí)間是4個(gè)梯度中最少，所用流動(dòng)相也是4個(gè)梯度中最少的。該梯度15min后經(jīng)緩沖才進(jìn)入下一個(gè)樣品梯度，單個(gè)酚峰重疊性最好。苯酚出峰時(shí)間RSD為1.23%，間甲酚出峰時(shí)間RSD為0.07%，2，4－二氯酚出峰時(shí)間RSD為0.07%，2，4，6－三氯出峰時(shí)間RSD為0.05%。苯酚峰面積RSD為0.13%，間甲酚峰面積RSD為0.16%，2，4－二氯酚峰面積RSD為0.03%，2，4，6－三氯峰面積RSD為0.18%。苯酚峰高RSD為0.82%，間甲酚峰高RSD為1.39%，2，4－二氯酚峰高RSD為0.87%，2，4，6－三氯峰高RSD為0.42%。

梯度3和梯度4的出峰時(shí)間沒(méi)有梯度2少，各個(gè)峰分離度雖然好，但是每一個(gè)樣品所用時(shí)間都比梯度2長(zhǎng)。

4 結(jié)論

經(jīng)過(guò)對(duì)4種酚類物質(zhì)4種不同梯度的分析比較，做這4種酚類物質(zhì)的時(shí)候，選用梯度2在運(yùn)行大批量樣品時(shí)可以節(jié)約很多時(shí)間和流動(dòng)相。進(jìn)樣過(guò)程中，進(jìn)完樣后的緩沖很重要，緩沖能增加樣品之間峰的重疊性，保證分析的準(zhǔn)確性。

［1］胡秋芬，楊光宇，黃章杰，等．固相萃?。咝б合嗌V法測(cè)定水中酚類物質(zhì)［J］．分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào)，2002，5(5):560－563．

［2］本書編委會(huì)．水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法(第3版) ［M］．北京:中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)出版社，1989:411．

［3］徐泠，孫東紅．關(guān)于揮發(fā)酚測(cè)定中有關(guān)問(wèn)題的探討［J］．中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)，1997，(13):57．

［4］本書編委會(huì)．水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法 (第4版)［M］．北京:中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2002．