北敗醬多糖的提取及其抑制亞硝化作用研究

楊輝

摘要：采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測(cè)定其多糖含量，紫外光解法測(cè)定北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除率。結(jié)果表明，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關(guān)鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào)：S647；S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發(fā)現(xiàn)北敗醬中的多糖含量較高。本試驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)法對(duì)北敗醬多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)其抑制亞硝化反應(yīng)的作用進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將葡萄糖對(duì)照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確吸取該葡萄糖對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對(duì)照，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時(shí)間及料液比3個(gè)因素作為考察對(duì)象，以多糖含量為測(cè)定指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化多糖提取工藝，試驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經(jīng)95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準(zhǔn)確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設(shè)計(jì)方案的條件進(jìn)行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無(wú)水乙醇，攪勻，靜置過(guò)夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測(cè)定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對(duì)亞硝酸鹽的清除作用[5]的測(cè)定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應(yīng)液于7 cm的培養(yǎng)皿中，加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測(cè)吸光度值（Ax），同時(shí)用不含多糖的反應(yīng)液作空白（A0），每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取其平均值。按下面公式計(jì)算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定葡萄糖對(duì)照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結(jié)果表明，當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為0.04～0.24 mg/mL時(shí)，其質(zhì)量濃度與吸光度成良好的線性關(guān)系。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、C、B；方差分析結(jié)果（表3）表明，提取溫度和提取時(shí)間對(duì)北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對(duì)北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗(yàn)證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優(yōu)選出的工藝條件進(jìn)行多糖提取，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗(yàn)證結(jié)果表明，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選最佳工藝穩(wěn)定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，當(dāng)多糖液用量為6 mL時(shí)，相當(dāng)于濃度為12.00%的多糖，其對(duì)亞硝酸鈉的清除率達(dá)到峰值，為67.00%。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對(duì)北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗(yàn)結(jié)果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價(jià)值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過(guò)高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質(zhì)地致密，因此提取根部多糖所用時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，而料液比對(duì)提取率沒(méi)有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統(tǒng)的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質(zhì)N-亞硝胺的合成，起到預(yù)防癌癥的目的。對(duì)北敗醬多糖加以適當(dāng)分離提純，開(kāi)發(fā)其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第三卷. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002. 55-61.

[2] 劉 巍，楊智鋒，姜姍姍.北敗醬乙醇提取物消腫排膿作用研究[J].陜西中醫(yī)，2007，28（1）：111-112.

[3] 張洪民，渠桂榮，吳立軍，等.裂葉苣荬菜的研究進(jìn)展[J].中草藥，1997，28（11）：691-693.

[4] 郁 瑋，楊小明，劉偉民，等.苯酚-硫酸法測(cè)定無(wú)花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，34（10）：256-258.

[5] 黃高凌，翁聰澤，倪 輝，等.琯溪蜜柚果皮提取物抑制亞硝化反應(yīng)的研究[J].食品科技，2007，28（12）：36-39.

摘要：采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測(cè)定其多糖含量，紫外光解法測(cè)定北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除率。結(jié)果表明，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關(guān)鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào)：S647；S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發(fā)現(xiàn)北敗醬中的多糖含量較高。本試驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)法對(duì)北敗醬多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)其抑制亞硝化反應(yīng)的作用進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將葡萄糖對(duì)照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確吸取該葡萄糖對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對(duì)照，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時(shí)間及料液比3個(gè)因素作為考察對(duì)象，以多糖含量為測(cè)定指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化多糖提取工藝，試驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經(jīng)95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準(zhǔn)確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設(shè)計(jì)方案的條件進(jìn)行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無(wú)水乙醇，攪勻，靜置過(guò)夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測(cè)定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對(duì)亞硝酸鹽的清除作用[5]的測(cè)定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應(yīng)液于7 cm的培養(yǎng)皿中，加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測(cè)吸光度值（Ax），同時(shí)用不含多糖的反應(yīng)液作空白（A0），每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取其平均值。按下面公式計(jì)算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定葡萄糖對(duì)照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結(jié)果表明，當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為0.04～0.24 mg/mL時(shí)，其質(zhì)量濃度與吸光度成良好的線性關(guān)系。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、C、B；方差分析結(jié)果（表3）表明，提取溫度和提取時(shí)間對(duì)北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對(duì)北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗(yàn)證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優(yōu)選出的工藝條件進(jìn)行多糖提取，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗(yàn)證結(jié)果表明，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選最佳工藝穩(wěn)定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，當(dāng)多糖液用量為6 mL時(shí)，相當(dāng)于濃度為12.00%的多糖，其對(duì)亞硝酸鈉的清除率達(dá)到峰值，為67.00%。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對(duì)北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗(yàn)結(jié)果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價(jià)值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過(guò)高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質(zhì)地致密，因此提取根部多糖所用時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，而料液比對(duì)提取率沒(méi)有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統(tǒng)的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質(zhì)N-亞硝胺的合成，起到預(yù)防癌癥的目的。對(duì)北敗醬多糖加以適當(dāng)分離提純，開(kāi)發(fā)其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第三卷. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002. 55-61.

[2] 劉 巍，楊智鋒，姜姍姍.北敗醬乙醇提取物消腫排膿作用研究[J].陜西中醫(yī)，2007，28（1）：111-112.

[3] 張洪民，渠桂榮，吳立軍，等.裂葉苣荬菜的研究進(jìn)展[J].中草藥，1997，28（11）：691-693.

[4] 郁 瑋，楊小明，劉偉民，等.苯酚-硫酸法測(cè)定無(wú)花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，34（10）：256-258.

[5] 黃高凌，翁聰澤，倪 輝，等.琯溪蜜柚果皮提取物抑制亞硝化反應(yīng)的研究[J].食品科技，2007，28（12）：36-39.

摘要：采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測(cè)定其多糖含量，紫外光解法測(cè)定北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除率。結(jié)果表明，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關(guān)鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào)：S647；S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發(fā)現(xiàn)北敗醬中的多糖含量較高。本試驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)法對(duì)北敗醬多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)其抑制亞硝化反應(yīng)的作用進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將葡萄糖對(duì)照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確吸取該葡萄糖對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對(duì)照，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時(shí)間及料液比3個(gè)因素作為考察對(duì)象，以多糖含量為測(cè)定指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化多糖提取工藝，試驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經(jīng)95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準(zhǔn)確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設(shè)計(jì)方案的條件進(jìn)行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無(wú)水乙醇，攪勻，靜置過(guò)夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測(cè)定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對(duì)亞硝酸鹽的清除作用[5]的測(cè)定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應(yīng)液于7 cm的培養(yǎng)皿中，加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測(cè)吸光度值（Ax），同時(shí)用不含多糖的反應(yīng)液作空白（A0），每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取其平均值。按下面公式計(jì)算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定葡萄糖對(duì)照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對(duì)吸光度（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結(jié)果表明，當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為0.04～0.24 mg/mL時(shí)，其質(zhì)量濃度與吸光度成良好的線性關(guān)系。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序?yàn)锳、C、B；方差分析結(jié)果（表3）表明，提取溫度和提取時(shí)間對(duì)北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對(duì)北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗(yàn)證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優(yōu)選出的工藝條件進(jìn)行多糖提取，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗(yàn)證結(jié)果表明，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選最佳工藝穩(wěn)定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，當(dāng)多糖液用量為6 mL時(shí)，相當(dāng)于濃度為12.00%的多糖，其對(duì)亞硝酸鈉的清除率達(dá)到峰值，為67.00%。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對(duì)北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗(yàn)結(jié)果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價(jià)值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過(guò)高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質(zhì)地致密，因此提取根部多糖所用時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，而料液比對(duì)提取率沒(méi)有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優(yōu)化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統(tǒng)的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗(yàn)結(jié)果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質(zhì)N-亞硝胺的合成，起到預(yù)防癌癥的目的。對(duì)北敗醬多糖加以適當(dāng)分離提純，開(kāi)發(fā)其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

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