不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長的影響

龍 芳，張萬萍

(1.貴陽市白云區(qū)蔬菜生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)中心，貴州 貴陽 550014；2.貴州大學農(nóng)學院，貴州 貴陽 550025)

不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長的影響

龍 芳1，張萬萍2

(1.貴陽市白云區(qū)蔬菜生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)中心，貴州 貴陽 550014；2.貴州大學農(nóng)學院，貴州 貴陽 550025)

松乳菇是1種外生菌根真菌，目前還難以完全實現(xiàn)人工代料栽培，本試驗設(shè)計研究4種不同的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長的影響。結(jié)果表明，分別添加濃度為40 mg·L-1的維生素Bl、5 mg·L-1的赤霉素、1.0 mg·L-1的三十烷醇和40 mg·L-1的肌醇時，菌絲的生長速度最快。其中，添加濃度為5 mg·L-1的赤霉素對松乳菇菌絲生長的促進作用最為顯著。

松乳菇；菌絲；生長調(diào)節(jié)物質(zhì)

松乳菇Lactariusdeliciosus(L.ex Fr.) Gray，顏色近于藏紅花橙紅色，它是1種外生菌根真菌，系紅菇科，乳菇屬，又叫松菌、寒菌、松樹蘑、紫花菌等。松乳菇子實體含有豐富的營養(yǎng)成分，特別是含豐富的氨基酸；谷氨酸、天冬氨酸含量較高；各項氨基酸含量都高于香菇[2]。松乳菇還含有豐富的礦物質(zhì)元素，每人每天食用100 g(干品)就能滿足人體對Fe元素的需要，且大部分必需元素如Cr、Cu、Zn、Mn、Ni、Ca、Mg等也能被補充。另外，松乳菇具有抑制腫瘤，抗菌等作用，其提取物對肉瘤180和艾氏腹水癌有抑制作用。

在松乳菇菌絲生長的營養(yǎng)需求方面的研究目前主要是有碳源、氮源、礦質(zhì)元素及微量元素、維生素、pH值及一些土壤浸出液[3-6]。松乳菇菌絲生長的條件因研究實驗設(shè)計的不同和培養(yǎng)基的不同最適宜值亦有所差異。松乳菇礦質(zhì)元素及微量元素研究主要涉及鐵、鋅、鎂、錳、銅、鈣等，維生素主要是維生素B族，且發(fā)現(xiàn)當這些元素使用過量時對菌絲生長具有抑制作用[3]。目前，人們對生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長方面影響方面的研究不多，尚缺乏系統(tǒng)報道。

目前在菇類生產(chǎn)上噴施適量生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對食用菌質(zhì)量和產(chǎn)量均有一定的提高，同時這些生長調(diào)節(jié)物質(zhì)能夠促進菌絲體的發(fā)育加速細胞成熟并可防止生長停滯，從而促進菌絲生長速度[7]，縮短培養(yǎng)周期[8]，同時也能夠調(diào)節(jié)栽培料中的碳氮比[9]，但濃度使用不當則抑制其生長。目前，野生松乳菇還難以完全實現(xiàn)人工代料栽培，方平夷曾采用袋栽的方式進行培育子實體試驗，在栽培種培養(yǎng)基中接入菌絲體，有些子實體在生長初期即死亡，因此培養(yǎng)健壯的菌絲是保證馴化成功的首要條件。通過研究幾種不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長的影響，篩選出適合配方組合，將為松乳菇野生馴化及生產(chǎn)實踐提供借鑒依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試材料

野生松乳菇于2010年9月～2011年12月采自貴陽花溪區(qū)黔陶鄉(xiāng)松林，選擇無病蟲害、無機械損壞、無畸形的幼嫩松乳菇子實體和近成熟子實體作為分離松乳菇菌絲體的材料，帶回實驗室，迅速接種子實體。

1.1.2 主要試劑藥品與儀器

主要試劑藥品：瓊脂、蔗糖、酵母膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、赤霉素、肌醇、三十烷醇、維生素B1等。

主要儀器：蒸汽高壓滅菌鍋、恒溫箱、超凈工作臺、冰箱、電爐、電子天平等。

1.2 試驗方法

1.2.1 松乳菇母種分離、純化及培養(yǎng)

母種純化培養(yǎng)培養(yǎng)基配方設(shè)計處理：蔗糖10 g、瓊脂20 g、酵母膏10 g、VB110 mg、硫酸鎂0.5 g、磷酸二氫鉀1.5 g、松葉土120 g，水1 000 mL。

培養(yǎng)基制作：將去皮馬鈴薯稱取200 g，切碎，放入鍋中用清水煮至軟而不爛為止，過濾，然后取濾液，再加入瓊脂繼續(xù)加熱，待瓊脂溶化后，添加糖及其它成分，補足水分至1 000 mL，攪拌均勻煮沸后準備裝管。經(jīng)過分裝試管，滅菌(滅菌條件：1.4 MPa，121℃，30 min)，擺試管斜面等步驟，冷卻后待用。

子實體分離時，選擇無病蟲害的且菌蓋未完全展開的子實體。母種分離方法采取組織分離法，常規(guī)操作分別取菌蓋、菌柄與菌蓋交界處、柄上部、柄中部、菌褶、柄基處黃豆大小的組織塊接入培養(yǎng)基斜面上，將分離好的試管置25℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，3 d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況，每隔3 d檢查1次，除去污染，獲得松乳菇母種菌絲純培養(yǎng)物。

1.2.2 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對菌絲生長影響的試驗設(shè)計

菌絲培養(yǎng)基設(shè)計如下：以母種分離純化培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，對照為無生長調(diào)節(jié)物質(zhì)處理，其他處理分別添加維生素B1、肌醇、三十烷醇和赤霉素4種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，各種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度設(shè)計見表1，采用單因素實驗設(shè)計，實驗重復5次。超凈工作臺上接種松乳菇母種菌絲純培養(yǎng)物，在25℃恒溫箱進行培養(yǎng)，每隔3 d測量1次菌絲生長長度直至滿管。

表1 各種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度設(shè)計

1.2.3 測定指標

感官評價：食用菌菌絲生長的外觀特征以及生長勢是評判菌種質(zhì)量的一個重要感官評價指標。用目測法觀察菌絲生長的情況，包括菌絲長勢以及形態(tài)特征；+表示生長稀疏，生長勢弱；++表示生長較致密、粗壯，生長勢中等；+++表示生長致密、粗壯潔白，生長勢強[10]。

菌絲生長速度測定：食用菌菌絲生長速度是評價菌種生活力的重要指標，是體現(xiàn)培養(yǎng)基中生長因子對菌絲生長情況影響的重要指標，也是最常使用的方法。采用試管斜面培養(yǎng)法，測量菌絲生長長度，菌絲生長速度(mm·d-1)[10]。本實驗以菌絲生長平均速度，進行比較分析，判定最優(yōu)的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)以及最佳濃度。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析處理

使用Excel軟件和DPS數(shù)據(jù)處理軟件，進行數(shù)據(jù)分析和差異顯著性處理等方法。

2 結(jié)果與分析

松乳菇母種的分離、純化及培養(yǎng)是本實驗能夠順利完成的先決條件，通過母種分離進行純化及培養(yǎng)獲得菌絲乳白色，很密，呈絨毛狀生長，長勢強的純菌株，來進行生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長情況的實驗。

2.2 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲生長的影響

2.2.1 不同濃度的維生素B1對菌絲生長的影響

不同濃度的維生素B1對菌絲生長的影響見表2。

表2 不同濃度的維生素B1對菌絲生長影響

注：+生長勢較弱；++生長勢中等；+++生長勢較強。下同。

食用菌菌絲生長的外觀特征以及生長勢是評判菌種質(zhì)量的一個重要感官評價指標。由表2可知，添加維生素B1的培養(yǎng)基菌絲生長均表現(xiàn)出較好的長勢，濃度為20 mg·L-1、30 mg·L-1、40 mg·L-1的培養(yǎng)基對菌絲均有促進生長，當維生素B1濃度為40 mg·L-1時，菌絲生長速度最快，且菌絲生長致密、粗壯潔白。

不同濃度維生素B1對松乳菇菌絲平均生長速率的影響見圖1。

由圖1可知，添加不同濃度維生素B1時，菌絲生長的速度快慢依次為40 mg·L-1、30 mg·L-1、20 mg·L-1、10 mg·L-1、對照、50 mg·L-1。維生素B1濃度為40 mg·L-1的生長速度極顯著高于添加維生素B1濃度為50 mg·L-1和對照(0 mg·L-1)；顯著高于添加維生素B1濃度為10 mg·L-1。因此，維生素B1添加的最佳濃度為40 mg·L-1。

2.2.2 不同濃度的赤霉素對菌絲生長的影響

云會計最大的特點就是企業(yè)買到的并非是云會計軟件的所屬權(quán)，而是使用權(quán)。過去的情況是企業(yè)所買到的會計軟件將作為自己的一項產(chǎn)品，而云會計則是將信息通過網(wǎng)絡(luò)導入給企業(yè)。

不同濃度的赤霉素對菌絲生長的影響見表3。

表3 不同濃度的赤霉素對菌絲生長的影響

菌絲生長勢是評判菌種質(zhì)量的一個重要感官評價指標。由表3可知，當赤霉素濃度為5 mg·L-1時，菌絲生長速度最快，且菌絲生長致密、粗壯潔白。

不同濃度赤霉素對松乳菇菌絲生長速率的影響見圖2。

由圖2可知，添加不同濃度赤霉素時,菌絲生長的速度快慢依次為5 mg·L-1、10 mg·L-1、2 mg·L-1、1 mg·L-1、對照、0.5 mg·L-1。赤霉素濃度為5 mg·L-1的生長速度極顯著高于濃度為1 mg·L-1、0.5 mg·L-1的處理和對照；與赤霉素濃度為10 mg·L-1和2 mg·L-1的處理相比無顯著差異。而赤霉素濃度為10 mg·L-1的生長速度極顯著高于濃度為0.5 mg·L-1的處理和對照。添加赤霉素濃度為2 mg·L-1的生長速度極顯著高于0.5 mg·L-1，顯著高于對照。因此，赤霉素添加適宜濃度可選擇2 mg·L-1～10 mg·L-1，而最佳濃度為5 mg·L-1。

2.2.3 不同濃度的肌醇對菌絲生長的影響

不同濃度的肌醇對菌絲生長的影響見表4。

由表4可知，當肌醇濃度為10 mg·L-1～40 mg·L-1時，菌絲生長速度均較對照快，其中肌醇濃度為40 mg·L-1時長速最快且菌絲生長致密、粗壯潔白。

不同濃度肌醇對松乳菇菌絲生長速率的影響見圖3。

表4 不同濃度的肌醇對菌絲生長的影響

由圖3可知，添加不同濃度肌醇時，菌絲生長速度的快慢依次為40 mg·L-1、20 mg·L-1、10 mg·L-1、30 mg·L-1、5 mg·L-1、對照；添加肌醇濃度為40 mg·L-1、30 mg·L-1、20 mg·L-1、10 mg·L-1的長速極顯著高于對照，顯著高于肌醇濃度5 mg·L-1。因此，添加肌醇的適宜濃度范圍為10 mg·L-1～40 mg·L-1之間，最佳濃度為40 mg·L-1。

2.2.4 不同濃度的三十烷醇對菌絲生長的影響

不同濃度的三十烷醇對菌絲生長的影響見表5。

表5 不同濃度的三十烷醇對菌絲生長的影響

由表5可知，當三十烷醇濃度為1.0 mg·L-1時，菌絲生長速度最快，且菌絲生長致密、粗壯潔白。

不同濃度三十烷醇對松乳菇菌絲生長速率的影響見圖4。

由圖4可知，添加不同濃度三十烷醇時，菌絲生長速度的快慢依次為1.0 mg·L-1、1.5 mg·L-1、2.0 mg·L-1、0.5 mg·L-1、對照、0.1 mg·L-1。三十烷醇濃度1.0 mg·L-1時的長速極顯著高于濃度為0.1 mg·L-1的處理和對照。添加三十烷醇濃度為1.5 mg·L-1、2.0 mg·L-1時菌絲的長速極顯著高于濃度0.1 mg·L-1，其兩者與濃度為1 mg·L-1的菌絲長勢無顯著差異。因此，三十烷醇添加的適宜濃度范圍為1.0 mg·L-1～2.0 mg·L-1之間，而最佳濃度為1.0 mg·L-1。

2.2.5 不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對菌絲生長的影響

不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)最佳添加濃度對菌絲生長的影響見圖5。

由圖5可知，添加維生素B1的菌絲長速顯著高于對照。添加5 mg·L-1赤霉素、1.0 mg·L-1三十烷醇、40 mg·L-1肌醇的培養(yǎng)基上松乳菇的菌絲生長速度均極顯著高于不添加生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的對照處理，但3個處理之間沒有顯著差異。但從菌絲生長速度的來看，添加5 mg·L-1赤霉素的處理菌絲生長速度最快。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

前人的研究中雖然對培養(yǎng)基上添加維生素B可以促進菌絲的生長有所報道，但未研究具體的濃度范圍[6]。促進菌絲的生長原因可能是，在菌絲進行新陳代謝中維生素作為輔酶加速了反應(yīng)，而加速了菌絲的生長。此次研究了維生素B1濃度從10 mg·L-1～50 mg·L-1，添加濃度為50 mg·L-1的長速顯著低于40 mg·L-1(圖1)，維生素B1濃度過高則抑制菌絲的生長。這種現(xiàn)象產(chǎn)生的具體原因還有待研究。

當培養(yǎng)基上添加赤霉素可以顯著促進菌絲生長(圖2)。其中濃度為5 mg·L-1的培養(yǎng)基上松乳菇菌絲長度顯著大于其他濃度處理(圖5)，但菌絲出現(xiàn)的黃色分泌物較多，原因可能是由于赤霉素促進細胞分離，而使菌絲增長較快，因此菌絲易老化。所以，赤霉素適用于現(xiàn)轉(zhuǎn)母種現(xiàn)接原種，在做菌種保存時則需慎用。

肌醇對菌絲生長有不同程度的促進作用，肌醇適宜濃度范圍為10 mg·L-1～40 mg·L-1，但濃度高于40 mg·L-1對菌絲生長的影響還有待研究。而適宜濃度的三十烷醇處理，可以促進菌絲的萌發(fā)和生長，使菌絲長速加快，而高于1.0 mg·L-1則逐步抑制松乳菇菌絲的生長,其原因還有待研究。

3.2 創(chuàng)新點

對四種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對松乳菇菌絲的影響進行了系統(tǒng)研究，摸索出最適濃度和最佳培養(yǎng)時間，為縮短食用菌育種和生產(chǎn)周期提供了直接依據(jù)。

前人的研究中除維生素B，其他的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)均未見系統(tǒng)報道。

3.3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明，添加維生素B1濃度為40 mg·L-1的培養(yǎng)基在各個時間段菌絲生長較快，添加濃度為50 mg·L-1的生長速度顯著低于40 mg·L-1，提示維生素B1濃度過高則抑制菌絲的生長。

當培養(yǎng)基上添加赤霉素可以顯著促進菌絲生長。赤霉素添加適宜濃度可選擇2 mg·L-1～10 mg·L-1，其中濃度為5 mg·L-1時，菌絲生長速度最快。

實驗發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基上添加肌醇對菌絲生長亦有促進作用，其中肌醇濃度為40 mg·L-1時生長速度最快，且菌絲生長致密、粗壯潔白。菌絲長度增長較平穩(wěn)規(guī)律，且長度最長。肌醇適宜濃度范圍為10 mg·L-1～40 mg·L-1，但濃度高于40 mg·L-1對菌絲生長的影響還有待研究。

三十烷醇對松乳菇的生長表現(xiàn)出促進作用的適宜濃度為1.0 mg·L-1～2.0 mg·L-1，最佳濃度為1.0 mg·L-1，而濃度高于1.0 mg·L-1的三十烷醇處理，則逐步抑制松乳菇菌絲的生長。

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Effects of Four Different Types of Plant Growth Regulators on the Mycelia Growth ofLactariusdeliciosus

LONG Fang1, ZHANG Wan-ping2

(1.Guiyang Baiyun District Vegetable Production Technology Service Center, GuiyangGuizhou550014; 2.Agronomy Courtyard of Guizhou university, GuiyangGuizhou550025)

Lactariusdeliciosuswas one type of ectomycorrhizal mushrooms. It was difficult to fully realize human generation of material culture, and the effects of four different types of plant growth regulators on the mycelia growth were investigated. The data showed that the vitamin B1, gibberellins, triacontanol and inositol prompt the mycelia growth ofLactariusdeliciosus. It was found that most effective concentration for stimulating growth of vitamin B1, gibberellins, triacontanol and inositol was 40 mg·L-1, 5 mg·L-1, 1 mg·L-1and 40 mg·L-1, respectively. Among those plant growth regulators, gibberellins at 5 mg·L-1showed the most significant effect on enhancing the mycelia growth ofLactariusdeliciosus.

Lactariusdeliciosus; Mycelia; Plant growth regulators

龍芳(1988-)，女，助理農(nóng)藝師，主要從事蔬菜種植及新品種、加工、菌種選育等研究工作。

2014-03-20

S646.9

A

1003-8310(2014)03-0027-04