洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量測定

蘭 衛(wèi)， 郭玉婷， 耿 直， 倪 健

(1新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)自治區(qū)重點實驗室， 烏魯木齊 830011； 2北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院， 北京 100029；3新疆醫(yī)科大學(xué)對口協(xié)作辦公室， 烏魯木齊 830011)

洋甘菊(Matricariachamomilia)又稱“母菊”，“德國洋甘菊”，維藥名：巴木乃，為菊科甘菊屬的花序或全草，一年生草本植物。其具有補胃開胃、促進消化、散氣消炎、健腦強筋、祛風(fēng)止痛、利尿通經(jīng)的功效[1]。

芹苷元-7-葡萄糖苷，又名：大波斯菊苷，芹菜素-7-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。英文名稱：Apigenin -7-glucoside，Apigenin-7-O-glucoside ，Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside。分子式為C21H20O10，分子量為432.38。溶解性：可溶于熱甲醇、DMSO等溶劑，不溶于石油醚、氯仿。藥理藥效：具有抗腫瘤、消炎、抗病毒的作用。

洋甘菊為維吾爾藥材標準收錄藥材，但標準簡單，未收載含量測定方法。美國藥典收載了洋甘菊的質(zhì)量標準，含量測定項下采用HPLC測定洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，同時指認化合物7-甲氧基香豆素、芹菜素、順式螺醚、反式螺醚。本實驗在美國藥典收載的HPLC方法基礎(chǔ)上，適當調(diào)整色譜條件，采用UPLC測定新疆洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，旨在為洋甘菊藥材標準的提升和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(Waters Acquity UPLC System，BEHC18色譜柱，2.1 mm×50 mm，1.7 μm，Empower色譜工作站)；水浴鍋(PAIRSTIRRER PS-1000,50 HZ,0.75KVA,TOKYO RIKAKIKAI CO.,LTD)；pH計(Satrorius PB-10)；離心機(MULTIFUGE X3R)；分析天平(AB135-S)。

1.2試藥芹苷元-7-葡糖糖苷(成都普瑞科技有限公司，A110222)，乙腈(Fisher Scientific)，甲醇(CHROMADEX) ，甲醇(分析純，天津市富宇精細化工有限公司)，N-N二甲基甲酰胺(分析純，天津市富宇精細化工有限公司)；磷酸二氫鉀(天津市光復(fù)精細化工研究所)，氫氧化鈉(天津市致遠化學(xué)試劑有限公司)，鹽酸(北京化工廠)，磷酸(天津永晟精細化工有限公司)。

洋甘菊樣品采于和田地區(qū)策勒縣博斯坦鄉(xiāng)，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院李永和主任藥師鑒定為德國洋甘菊(Matricariachamomilia)，第一批樣品為花朵開放3/4時采摘，第二批為花朵完全開放時采摘。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制取芹苷元-7-葡萄糖苷，精密稱定后分別溶于適量N-N二甲基甲酰胺后甲醇稀釋，使芹苷元-7-葡萄糖苷濃度為1.32 mg/mL。

2.2供試品溶液的制備取母菊1.0 g精密稱定后置一裝有回流冷凝器和攪拌器的燒瓶中，加80 mL甲醇，攪拌下加熱回流l h。冷至室溫，過濾，收集濾液于100 mL量瓶中。用3.0 mL甲醇沖洗燒瓶，沖洗液過濾后并入容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻并過濾。取25.0 mL上述溶液置一裝有回流冷凝器和攪拌器的圓底燒瓶中，加5.0 mL氫氧化鈉溶液(0.4g氫氧化鈉溶于5.0 mL水)，加熱回流25 min。冷卻，用鹽酸調(diào)該溶液pH至5.0～6.2。定量轉(zhuǎn)移此溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻并過濾，棄去10 mL初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3色譜條件流動相A：0.005 mol/L的磷酸二氫鉀溶液，流動相B：乙睛和甲醇(65∶35)。色譜柱BEHC18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm；流速：0.3 mL/min；檢測波長：350 nm；溫度為37℃；進樣量1.5 μL；流動相A-B為70%～52%進行線性梯度洗脫(圖1)。

1: 木犀草苷; 2: 芹苷元-7-葡萄糖苷; 3: 甲氧基香豆素; 4: 木犀草素; 5: 為芹菜素圖1 洋甘菊典型UPLC色譜圖

2.4線性與范圍精密吸取芹苷元-7-葡萄糖苷對照品溶液適量配置芹苷元-7-葡萄糖苷對照品溶液系列濃度分別進樣，以對照品濃度X(μg/mL)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標計算標準曲線回歸方程，在0.658 5～72.435 0 μg/mL范圍內(nèi):Y=17149X-422.28，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

2.5精密度試驗

2.5.1 日內(nèi)精密度:取同一供試品溶液連續(xù)進樣6次，測得含量的RSD為1.56%。

2.5.2 日間精密度:取同一供試品溶液連續(xù)進樣6 d，測得芹苷元-7-葡萄糖苷素含量的RSD為0.83%。

2.6穩(wěn)定性試驗取同一批供試品溶液適量，連續(xù)在0、1、2、4、8、12、24 h分別進樣，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，芹苷元-7-葡萄糖苷峰面積的RSD=1.35%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗精密稱取洋甘菊樣品粗粉適量，共6份，分別按“2.2”項下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積。結(jié)果，RSD=1.54%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

2.8回收率試驗精密稱取已知含量的樣品約0.5 g，共9份，分為3組，按低、中、高濃度分別加入芹苷元-7-葡萄糖苷對照品儲備液，制備供試品溶液，進樣測定，計算加樣回收率,結(jié)果見表1。

2.9樣品測定樣品2批，每批樣品取3份進行測定，按供試品溶液制備法進行樣品處理并進行測定，計算樣品中含量(表2)。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表2 洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量測定(n=2)

3 討論

洋甘菊在歐洲、美國及日本等地早被廣泛利用，具有消炎、抑制真菌、解痙等藥理作用[3]，洋甘菊中含母菊內(nèi)酯、母菊內(nèi)酯酮、芹菜素、蕓香苷、金絲桃苷、豆甾醇和豆甾醇-3-葡萄糖苷等成分[1]。芹菜素(5,7,4-三羥基黃酮)和其葡萄糖苷是洋甘菊中主要的黃酮類化合物。

本實驗參照美國藥典收載的HPLC方法，適當調(diào)整流動相，采用梯度洗脫測定洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量，同時指認了木犀草苷、甲氧基香豆素、木犀草素和芹菜素，但未檢測到順式螺醚和反式螺醚，兩批洋甘菊樣品中芹苷元-7-葡萄糖苷含量分別為5.2(0.519%)、5.8(0.586%) mg/g。采用UPLC法可在15 min內(nèi)完成5個成份的測定和指認，適用于洋甘菊藥材的質(zhì)量控制。

洋甘菊因產(chǎn)地不同、功效不同而分為羅馬甘菊和德國甘菊[4]，據(jù)國家衛(wèi)生部藥品標準(維吾爾藥分冊)記載具有補益神經(jīng)、止痛消腫、發(fā)汗通便、利尿通經(jīng)的功效。用于機體異常腐敗體液，頭痛久治不愈，大便秘結(jié)，汗出不暢，小便不利，月經(jīng)不通等病癥[5],但標準中對洋甘菊只做了生藥顯微的要求，未對洋甘菊中的活性成分做含量測定的要求。而美國藥典[2]規(guī)定了HPLC測定芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，同時要求有其他四個化合物的特征圖譜，采用多指標對洋甘菊藥材進行質(zhì)量控制，標準明顯高于國家衛(wèi)生部藥品標準(維吾爾藥分冊)。

芹菜苷為洋甘菊中的一種活性黃酮類物質(zhì)[6]，可作為平滑肌的解痙劑，醛糖還原酶抑制劑和鎮(zhèn)靜劑。USP藥典中測定芹苷元-7-葡萄糖苷的含量不少于0.3%，策勒縣出產(chǎn)的洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量符合美國藥典的規(guī)定。

參考文獻:

[1] 新疆衛(wèi)生廳.維吾爾藥標準(上冊)[S].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1993:255.

[2] 徐莉. 美國藥典24版母菊(Chamomiles)[J].國外醫(yī)藥：植物藥分冊，2002，17(2)：82-83.

[3] 鄭金臣,全山叢,張虹,等.值得重視的歸化藥用和香料植物-母菊(洋甘菊)[J].中草藥,1996,27(9):568-571.

[4] 韓松林，李新霞，勉強輝，等.薄層生物自顯影技術(shù)比較新疆 2種洋甘菊抗氧化活性[J].中國中藥雜志，2013,38(2)：193-197.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準維吾爾藥分冊[S].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:76.

[6] 賈佳，謝靜莉，許學(xué)書.芹菜苷體外活性的研究[J].食品科學(xué)，2008，29(12)：99-101．