貴州省牛傳染性鼻氣管炎、副結(jié)核病和新孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查

皮 泉，陳善忠，洪尼寧

（1.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽 550008；2.貴州省夏云農(nóng)場，貴州安順 561104；3.貴陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，貴州貴陽 550004）

養(yǎng)牛業(yè)是畜牧業(yè)的重要組成部分，積極預(yù)防控制嚴(yán)重影響?zhàn)B牛業(yè)及社會穩(wěn)定的口蹄疫、牛海綿狀腦病等重大傳染病的同時(shí)，加強(qiáng)其他病毒、細(xì)菌和寄生蟲類傳染病防控也日益顯得重要。牛傳染性鼻氣管炎（Infectious bovine rhinotracheitis，IBR）是由牛皰疹病毒1型（Bovine hepervirus-1，BHV-1）引起的以牛呼吸道為主要癥狀的急性、熱性、接觸勝傳染病，其流行病學(xué)潛伏性及再活化周期對控制BHV-1格外重要［1］。該病在世界各地都有發(fā)生，常引起大規(guī)模飼養(yǎng)場暴發(fā)流行，影響奶牛產(chǎn)奶量、公牛繁殖力、役牛使役力，還可導(dǎo)致孕牛流產(chǎn)、犢牛死亡，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）定為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，也是我國二類動(dòng)物疫病，血清學(xué)調(diào)查表明該病在我國部分?。▍^(qū)）普遍存在［2-6］。副結(jié)核病是分支桿菌屬副結(jié)核分支桿菌（Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis，MAP）引起的一種以發(fā)病后期過度消瘦和持續(xù)腹瀉為主要癥狀的牛慢性傳染病，該病屬多種動(dòng)物共患病，主要影響牛等反芻動(dòng)物，也可能與人類克羅恩病有關(guān)［7］。牛新孢子蟲病是原生動(dòng)物頂覆門的犬新孢子蟲（Neosporacaninum）引起的一種主要以孕畜流產(chǎn)、死胎及新生畜運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的傳染病，其病原體可寄生于牛、綿羊、山羊、犬、馬、鹿、小鼠等中間宿主或終末宿主犬，主要傳播途徑是先天性感染和卵囊散播，該病是奶牛流產(chǎn)一個(gè)重要的原因，迄今已有70多個(gè)國家和地區(qū)報(bào)道奶牛感染新孢子蟲［8］，國內(nèi)大部分牛場也不能幸免［9-12］。為深入了解牛傳染性疫病在貴州省的流行狀況，我們對牛傳染性鼻氣管炎、副結(jié)核病和新孢子蟲病這3種病毒、細(xì)菌及寄生蟲代表性疫病進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 待檢血清采自省內(nèi)28個(gè)場（戶），按常規(guī)方法采血、分離血清，置-20℃冷凍備用。

1.1.2 試劑 牛皰疹病毒1型，CATTLETYPE BHV1gB Ab（德國 Labor Diagnostik Leipzig）；副結(jié)核分支桿菌 Cattle typeA Map Ab（德國 Labor Diagnostik Leipzig）；犬新孢子蟲抗體檢測試劑，Neospora Caninum Antbody Test（美國Idexx）。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 按商業(yè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，樣品稀釋時(shí)說明書中規(guī)定的血清及稀釋液體積增加1倍，便于充分混勻以減少檢測誤差。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 χ2檢驗(yàn)使用下載軟件《卡方檢驗(yàn)計(jì)算器》，使用發(fā)生數(shù)格式，將發(fā)生數(shù)（陽性數(shù)）和樣本數(shù)（總數(shù)）輸入相應(yīng)位置，即可得χ2值及P范圍。

2 結(jié)果

隨機(jī)抽取9市（州）11縣的13個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）散養(yǎng)戶及存欄數(shù)超過50頭的15個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場，采集牛血清920份，抗體檢測結(jié)果（表1）表明牛血清牛皰疹病毒1型、副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體牛群陽性率分別為64.29%（18／28）、57.14%（16／28）和53.57%（15／28），其中規(guī)模養(yǎng)殖場群陽性率分別為73.33%（11／15）、66.67%（10／15）和66.67%（10／15），散養(yǎng)戶群陽性率分別為 46.15% （6／13）、46.15%（6／13）和38.46%（5／13）；奶牛群陽性率分別為62.50%（5／8）、100%（8／8）和100%（8／8），肉牛群陽性率分別為65.00%（13／20）、40.00%（8／20）和35.00%（7／20）。牛皰疹病毒1型和副結(jié)核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲以及副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲雙抗體群陽性率分別為35.71%（10／28）、35.71%（10／28）和 50.00%（14／28），3種抗體群陽性率為25.00%（7／28），其中規(guī)模養(yǎng)殖場2種抗體群陽性率分別為46.67%（7／15）、53.33%（8／15）和60.00%（9／15），3種抗體牛群陽性率為40.00%（6／15）。散養(yǎng)戶群2種抗體陽性率分別為23.07%（3／13）、15.38%（2／13）和38.46%（5／13），3種抗體牛群陽性率為7.69%（1／13）；奶牛2種抗體群陽性率分別為62.50%（5／8）、62.50%（5／8）和 100% （8／8），3種抗體牛群陽性率為62.50%（5／8），肉牛2種抗體群陽性率分別為25.00%（5／20）、25.00%（5／20）和30.00%（6／20），3種抗體牛群陽性率為10.00%（2／20）。

表1 貴州牛血清抗體檢測結(jié)果Table 1 Results of bovine serum antibody detection in Guizhou

牛血清牛皰疹病毒1型、副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體總體陽性率分別為66.85%（615／920）、29.89%（275／920）和32.61%（300／920），其中規(guī)模養(yǎng)殖場陽性率分別為78.47%（565／720）、27.78%（200／720）和35.42%（255／720）。散養(yǎng)戶陽性率分別為25.00%（50／200）、37.50%（75／200）和22.50%（45／200），兩種養(yǎng)殖方式同病種陽性率差異顯著（P＜0.01）；奶牛群總體陽性率分別為82.50%（495／600）、28.33%（170／600）和36.67%（220／600），肉牛群總體陽性率分別為 37.50%（120／320）、32.81% （105／320）和 25.00% （80／320），奶牛與肉牛副結(jié)核病陽性率差異不顯著（P＞0.05），牛傳染性鼻氣管炎和新孢子蟲病陽性率差異顯著（P＜0.01）。牛皰疹病毒1型和副結(jié)核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲以及副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲2種抗體陽性率分別為15.76%（145／920）、23.37%（215／920）和9.24%（85／920），3種抗體陽性率為4.35%（40／920），其中規(guī)模養(yǎng)殖場2種抗體陽性率分別為18.06%（130／720）、28.47%（205／720）和6.94%（50／720），3種抗體陽性率為4.17%（30／720），散養(yǎng)戶2種抗體陽性率分別為7.50%（15／200）、5.00%（10／200）和17.50%（35／200），3種抗體陽性率為5.00%（10／200），兩種養(yǎng)殖方式同病種2種抗體陽性率差異顯著（P＜0.01），3種抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）；奶牛2種抗體陽性率分別為19.17%（115／600）、28.33%（170／600）和7.50%（45／600），3種抗體陽性率為4.17%（25／600），肉牛2種抗體陽性率分別為9.38%（30／320）、14.06%（45／320）和12.50%（40／320），3種抗體陽性率為4.69%（15／320），奶牛與肉牛同病種2種抗體陽性率差異顯著（牛皰疹病毒1型和副結(jié)核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲P＜0.01，副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲0.01＜P＜0.05），3種抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

本次牛傳染性疫病血清學(xué)調(diào)查涉及貴州省內(nèi)9市（州）11縣的13個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）散養(yǎng)戶及15個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場，樣品隨機(jī)抽取，采樣畜群未接種過所調(diào)查病種疫苗。血清牛皰疹病毒1型、副結(jié)核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體總體陽性率分別為66.85%、29.89%和32.61%，群陽性率分別為64.29%、57.14%和53.57%，這為區(qū)別防控這類疫病提供了依據(jù)。

希尼尼根等［2］報(bào)道內(nèi)蒙古牛皰疹病毒1型抗體總體陽性率為29.5%（135／457），賀曉龍等［3］報(bào)道青海陽性率為47.62%（200／420），楊澤林等［4］報(bào)道重慶總體陽性率為4.61%，其中奶牛、黃牛和水牛陽性率分別為5.34%、4.92%和0%。相比之下，貴州省牛血清牛皰疹病毒1型抗體檢測陽性率相對較高（P＜0.01），雖然群陽性率64.29%（18／28）低于河南省場陽性率100%（24／24）［5］（P＜0.01）。這次調(diào)查奶牛總體陽性率為82.50%（495／600），明顯高于2004年血清中和試驗(yàn)5.43%（29／534）的總體陽性率［6］（P＜0.01），考慮到檢測試劑及采樣地點(diǎn)等因素的影響，該病在貴州省的流行情況有待進(jìn)一步調(diào)查。

動(dòng)物機(jī)體感染副結(jié)核分支桿菌后，呈現(xiàn)細(xì)胞免疫和體液免疫的規(guī)律變化，機(jī)體抵抗力強(qiáng)時(shí)，常表現(xiàn)為細(xì)胞免疫反應(yīng)，機(jī)體出現(xiàn)腹瀉、消瘦，甚至衰竭時(shí)，抗體水平提高，ELISA可用于識別感染牛群、篩選確定可能受感染的動(dòng)物個(gè)體，相對于糞便培養(yǎng)檢測感染動(dòng)物早期疾病過程，ELISA檢測率在27%～45%之間，但這也取決于所抽樣的牛群，重度排菌者檢出率可達(dá)75%，輕度排菌者檢出率僅15%［13-14］。亞臨床感染動(dòng)物過境的結(jié)果不僅僅是感染動(dòng)物進(jìn)入未感染牛群，而是一個(gè)國家牛群整體MAP患病率的提高，2002年—2007年間美國陽性奶牛群增加了一倍多、日本檢出54%的感染／患病動(dòng)物來自美國就是例證［15］。此次調(diào)查顯示我省副結(jié)核分支桿菌抗體總體陽性率為29.89%、總體群陽性率為57.14%，其中奶?？傮w陽性率為 28.33% （170／600），群陽性率為100%（8／8），考慮我省畜群管理和經(jīng)濟(jì)效益的實(shí)際情況，選用國際上認(rèn)可的商業(yè)ELISA試劑，在引種、分群等環(huán)節(jié)加強(qiáng)監(jiān)測對防控副結(jié)核病非常重要。

奶牛犬新孢子蟲病呈世界分布，我國及周邊國家和地區(qū)均有報(bào)道，感染率在10%～40%不等，嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展，鄒世穎等［9］曾報(bào)道我國北方6省市的血清陽性率為8.6%，沈莉萍等［10］報(bào)道上海奶牛陽性率為5.08%（63／1 239），各場陽性率變幅較大（0～44.23%）。此次調(diào)查顯示貴州省新孢子蟲抗體總體陽性率為32.61%、群陽性率為53.57%，而奶?？傮w陽性率為36.67%（220／600）、群陽性率為100%（8／8），檢測結(jié)果不容樂觀。

血清學(xué)調(diào)查表明貴州省部分牛群存在不同程度的牛皰疹病毒1型、副結(jié)核分支桿菌或犬新孢子蟲感染，深入開展病原學(xué)調(diào)查、采取綜合防控措施顯得非常必要。

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