纖維蛋白粘合劑對犬皮膚切口愈合的影響

高宇航，陳智華＊，郭慧琳，王雯慧，范希萍，范彩彩，年聚盆

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州730046）

纖維蛋白粘合劑（fibrin adhesive），又稱纖維蛋白膠（fibrin glue），是一種以纖維蛋白原和凝血酶為主要成分的生物粘合劑［1］。由于生物相容性良好、具有生物降解性，不易引起炎癥、異物反應(yīng)、組織壞死或廣泛的纖維變性，可以促進(jìn)血管的生長和形成，防止組織粘連和止血，有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用［2］，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床各個(gè)領(lǐng)域。獸醫(yī)臨床上，至今尚未研制出理想的纖維蛋白粘合劑，多種動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果并不理想，犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的粘合試驗(yàn)報(bào)道更少［3-7］。本試驗(yàn)采用自制纖維蛋白粘合劑粘合犬皮膚切口，進(jìn)行吻合時(shí)間、切口愈合情況、大體形態(tài)學(xué)觀察，以常規(guī)手術(shù)縫合皮膚切口為對照進(jìn)行對比試驗(yàn)，以驗(yàn)證和評估自制纖維蛋白粘合劑的粘合效果，為進(jìn)一步研究和開發(fā)動(dòng)物專用纖維蛋白粘合劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑與儀器 自制豬源纖維蛋白原，純度＞85%，在-10 ℃以下保存；牛凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品，1 000IU／mg，在5℃以下保存，Sigma公司產(chǎn)品；牛抑肽酶凍干粉，5 mg／支，高純度，4 500IU／mg，在4 ℃保存，上海晨易生物科技有限公司產(chǎn)品；絲蛋白粉，分析純，常溫，避光保存，紹興市天初制藥有限公司產(chǎn)品；康派特醫(yī)用膠，2 mL／支，寧波伊萊特商貿(mào)有限公司產(chǎn)品；無水氯化鈣，分析純，上海展云化工有限公司產(chǎn)品；速眠新Ⅱ，吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司產(chǎn)品；青霉素鈉，哈藥集團(tuán)制藥總廠產(chǎn)品。

常規(guī)軟組織手術(shù)器械包，游標(biāo)卡尺。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組及皮膚切口模型的制作與處理 健康犬只均購自蘭州市畜禽交易市場。20只犬，飼喂犬糧、清水，安靜飼養(yǎng)1周未出現(xiàn)任何疾病。隨機(jī)分為縫合組（對照組）與粘合組（試驗(yàn)組），每組10只。

犬切口模型的制作即，術(shù)前禁食12h，腰背部與下腹部臍前至劍狀軟骨區(qū)域大面積徹底剃毛。麻醉前按照0.1mg／kg體重肌肉注射阿托品，15min后按0.4 mL／kg～0.8 mL／kg體重肌肉注射速眠新Ⅱ全身麻醉。妥善保定，術(shù)部常規(guī)消毒，鋪蓋創(chuàng)巾。分別沿背部正中線與臍前腹中線做1號與2號切口，切口長度均為5cm，深至真皮層。

皮膚切口的分組處理：對照組犬以0號黑色絲線行5針～6針的單純間斷縫合閉合1號與2號皮膚切口。試驗(yàn)組犬以粘合劑粘合1號與2號皮膚切口。術(shù)后佩戴伊莉莎白圈，12h后恢復(fù)供應(yīng)適量清潔飼料、飲水，安靜飼養(yǎng)，每日40 000 單位／kg體重青霉素肌肉注射，創(chuàng)口不做任何處理。

1.2 方法

1.2.1 自制纖維蛋白粘合劑粘合皮膚切口的方法

自制纖維蛋白粘合劑A 液與B 液主要組分及各組分添加量見表1和表2。如表1所示，向1mL 生理鹽水中依次添加抑肽酶凍干粉、纖維蛋白原凍干粉與絲蛋白粉，37 ℃水浴中緩慢搖動(dòng)5min左右至完全溶解，制得試劑A；如表2所示，向1mL 生理鹽水中依次添加無水氯化鈣、凝血酶原凍干粉與化學(xué)粘合劑，37 ℃水浴中緩慢搖動(dòng)5min左右至完全溶解，制得試劑B。用A、B注射器各抽取1mL 試劑A 與試劑B，固定于雙聯(lián)注射器兩側(cè)凹槽中。使用前妥善安裝雙聯(lián)注射器剩余部分，排空注射器與針頭內(nèi)空氣，并確保切口相對干燥。助手雙手拇指與食指捏住創(chuàng)口兩端對接創(chuàng)緣，術(shù)者由創(chuàng)口一端向另一端逐段涂抹適量粘合劑，待其在切口處成膠即可［8］。

表1 自制纖維蛋白粘合劑A 液主要組分及各組分添加量Table 1 The main components and contents of fibrin glue A

表2 自制纖維蛋白粘合劑B液主要組分及各組分添加量Table 2 The main components and contents of fibrin glue B

1.2.2 切口閉合時(shí)間及對接效果 用秒表記錄并比較對照組與試驗(yàn)組閉合創(chuàng)口所用的時(shí)間。觀察并記錄出現(xiàn)切口對合不良的犬只數(shù)量（表3）。

1.2.3 切口局部及犬整體狀態(tài)觀察 觀察并記錄術(shù)后第2和8 天兩組出現(xiàn)創(chuàng)口裂開情況，潮紅、腫脹、溫度升高等炎性反應(yīng)及化膿感染的犬只數(shù)量（表4）。同時(shí)，檢測犬T、P、R，飲食、排泄等基本體征與生理活動(dòng)，有無明顯的疼痛反應(yīng)（表5）。

1.2.4 切口愈合時(shí)間、瘢痕寬度及愈合傷口斷裂力測定 記錄創(chuàng)口愈合所需時(shí)間。用游標(biāo)卡尺測定愈合傷口的瘢痕寬度。術(shù)后第2和第8天各取兩組待測犬包括原切口在內(nèi)的皮膚樣本，面積約為1×0.4cm2，深至真皮層，測定皮膚樣本的愈合傷口斷裂力（表6）。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 對測定的數(shù)據(jù)使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用方差分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 切口閉合時(shí)間及對接效果

結(jié)果見表3。

表3 不同方法閉合犬皮膚創(chuàng)口的操作時(shí)間及效果比較Table 3 The closure time and the appearance of repairing the incisions by different methods

從表3可見，對照組縫合1號與2號切口所需時(shí)間均顯著大于試驗(yàn)組，約為試驗(yàn)組的11.5 倍與8.6倍。對照組1號與2號切口出現(xiàn)對接不良情況的犬只數(shù)量顯著高于試驗(yàn)組。兩組1號與2號切口對接時(shí)間和對合情況犬只數(shù)量差異不顯著。

2.2 切口局部及犬整體狀態(tài)觀察

結(jié)果見表4。

表4 術(shù)后第2天與第8天犬皮膚切口局部大體觀察Table 4 The appearance of the canine skin incisions on 2nd and 8th days after surgery

從表4可見，術(shù)后2d與術(shù)后8d，對照組1號與2號切口發(fā)生炎性腫脹、滲出及化膿感染情況的犬只數(shù)量均顯著高于試驗(yàn)組。

從表5可見，術(shù)后第2和第8天，對照組與試驗(yàn)組的所有犬只的T、P、R 及正常生理活動(dòng)均處于正常水平。術(shù)后2d對照組痛感明顯犬?dāng)?shù)量顯著高于試驗(yàn)組，術(shù)后8d對照組大部分犬的疼痛反應(yīng)減輕甚至消失。

2.3 切口愈合情況

結(jié)果見表6。

表5 術(shù)后第2天與第8天犬整體狀態(tài)Table 5 The canine physical indexes on 2nd and 8th days after surgery

表6 犬皮膚切口愈合情況Table 6 The healing process of the canine skin incisions

從表6可見，對照組1號與2號切口愈合所需時(shí)間均顯著高于試驗(yàn)組，約為試驗(yàn)組的1.6 倍與1.5倍。試驗(yàn)組1號與2號皮膚切口愈合后瘢痕寬度僅為對照組的24%與15%。試驗(yàn)組1 號與2 號愈合皮膚切口斷裂力均顯著高于對照組。兩組1號與2號切口間各項(xiàng)指標(biāo)差異不顯著。

3 討論

本試驗(yàn)從操作方法，對切口愈合及動(dòng)物整體狀態(tài)的影響幾個(gè)方面對自制纖維蛋白粘合劑的優(yōu)劣進(jìn)行討論。

3.1 切口閉合時(shí)間及對接效果

傳統(tǒng)閉合皮膚創(chuàng)口的材料和方法操作繁瑣，即使術(shù)者操作熟練，與助手密切配合，完成整個(gè)皮膚創(chuàng)口縫合的時(shí)間也較長。而使用自制纖維蛋白粘合劑粘合犬皮膚創(chuàng)口，只需捏合創(chuàng)口和推注混勻兩個(gè)步驟，實(shí)驗(yàn)組完成1號與2號皮膚切口閉合操作僅需4 s±2s和5s±1s，顯著快于縫合組的46s±2s與43s±3s。結(jié)果表明，采用自制纖維蛋白粘合劑粘合切口可極大程度上縮短手術(shù)時(shí)間。但對粘合皮膚張力較大部位的切口時(shí)，需要適當(dāng)增加捏合固定皮膚創(chuàng)緣的時(shí)間。

全部犬只均設(shè)置背正中線與腹正中線兩條切口。對照組皮膚切口以絲線進(jìn)行5針～6針單純間斷縫合，試驗(yàn)組皮膚切口以纖維蛋白粘合劑進(jìn)行粘合。在完成創(chuàng)口對接后，觀察各切口的外觀。結(jié)果表明，試驗(yàn)組全部犬只粘合后皮膚切口均較為平整，粘合后無需調(diào)整創(chuàng)緣，減少了手術(shù)時(shí)間。而對照組的兩條切口中，3條犬只的1號切口出現(xiàn)了內(nèi)翻或外翻情況，4條犬只的2 號切口出現(xiàn)了內(nèi)翻或外翻情況。間斷縫合切口，若操作不當(dāng)，則會造成創(chuàng)口對接與密封不良，縫合完成后需用器械進(jìn)行調(diào)整至平整。粘合切口時(shí)，僅需在粘合前捏合對齊切口創(chuàng)緣即可保證切口粘合后的平整程度，操作相對簡單。用自制纖維蛋白粘合劑粘合的皮膚切口創(chuàng)緣對合良好，可初步保證切口愈合后的美觀程度。

3.2 切口局部狀態(tài)及犬整體狀態(tài)觀察

術(shù)后第2天，對照組僅有1 條犬的1 號切口哆開，系該犬術(shù)后后肢搔抓所致。同時(shí)，有2 條犬的2號切口哆開，原因包括犬在地面摩擦切口，以及由于運(yùn)動(dòng)，飽食和腹腔臟器自身重力的導(dǎo)致縫合線無法承受2號切口產(chǎn)生強(qiáng)大張力而哆開。試驗(yàn)組用粘合劑粘合，出現(xiàn)1號與2號皮膚切口哆開情況的犬只較對照組顯著增多，分別有1條犬的1號切口和4條犬的2號切口發(fā)生裂開情況。

術(shù)后第8天，出現(xiàn)傷口裂開情況的犬只數(shù)量繼續(xù)增多。對照組新增一例2號切口裂開犬只，試驗(yàn)組變化幅度較大，新增了一例1號切口裂開與2號切口裂開情況。除重力等外力作用及犬的自殘行為的原因，自制纖維蛋白粘合劑成膠強(qiáng)度不足也是重要原因之一。有研究報(bào)道稱，粘合創(chuàng)口的纖維蛋白粘合劑中的纖維蛋白降解后的片段可以大幅度提高創(chuàng)口局部的纖維蛋白濃度，具有促進(jìn)愈合的作用，同時(shí)凝膠在形成和水解過程中均會發(fā)生固縮，并與周圍組織良好相容，因此在術(shù)后2d 可達(dá)到最高強(qiáng)度［9］。但本試驗(yàn)證明，自制纖維蛋白粘合劑雖在2d時(shí)達(dá)到最高強(qiáng)度，但卻難以長時(shí)間維持這種高粘合強(qiáng)度，也是導(dǎo)致多數(shù)創(chuàng)口裂開的另一重要原因，未來仍需著眼于提升其粘合強(qiáng)度及強(qiáng)度維持時(shí)間。

本試驗(yàn)對術(shù)后不同時(shí)間兩種對接方法處理后的皮膚切口的局部情況和犬的整體狀態(tài)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，術(shù)后2d，對照組分別有7條和6條犬的1號與2號切口產(chǎn)生了不同程度的炎性腫脹，創(chuàng)緣肉眼可見潮紅，腫脹，術(shù)者手背觸診可感到溫度升高，犬痛感明顯。其中又分別有4條與5條犬只出現(xiàn)了不同程度的滲出，滲出液初期為血液，后期為組織液與淋巴外滲。由于組織中的絲線始終作為一種異物刺激其周圍組織，產(chǎn)生明顯的紅、腫、熱、痛等炎癥反應(yīng)。若皮膚切口對接不良，同時(shí)縫合針線造成形成醫(yī)源性竇道與瘺管等因素，均會導(dǎo)致密封性較差。外界環(huán)境中的病原和異物極易通過切口和縫合線孔進(jìn)入切口內(nèi)部，造成皮膚切口的感染，最終影響組織愈合?？p合后存在死腔，導(dǎo)致壓迫程度不足是造成滲出的主要原因。而試驗(yàn)組出現(xiàn)炎性腫脹的犬只數(shù)量較對照組顯著減少，僅1條犬的兩條切口出現(xiàn)輕微的炎癥反應(yīng)，幾乎全部犬只均未出現(xiàn)滲出。用纖維蛋白粘合劑粘合犬皮膚切口，對犬切口處皮膚組織刺激性較小，因此未出現(xiàn)或僅出現(xiàn)輕微的炎癥反應(yīng)，疼痛反應(yīng)也較輕微。同時(shí)自制纖維蛋白粘合劑的2種液體成分在形成凝膠之前可以完全填充死腔，膠封切口，密封性與阻止?jié)B出的作用顯著優(yōu)于縫線組，滲出和感染得到明顯控制。術(shù)后8d，對照組中1號與2號犬切口的炎性腫脹明顯減輕，但存在該情況的犬只數(shù)量仍未大幅度減少。同時(shí)，有多只犬出現(xiàn)了感染化膿情況。相比于對照組，試驗(yàn)組1號與2號犬切口的炎性反應(yīng)、滲出和化膿感染的情況均得到了極好控制?？梢姡诮M織對接后，不進(jìn)行任何外科處理的情況下，自制纖維蛋白粘合劑閉合切口的密封性更好，對周圍組織的刺激也更加輕微。術(shù)后2d，試驗(yàn)組僅1條犬出現(xiàn)輕微疼痛反應(yīng)，術(shù)后8d，全部犬只疼痛反應(yīng)消失，試驗(yàn)組全部犬只生理指標(biāo)正常。上述結(jié)果表明，自制纖維蛋白粘合劑可以減輕切口愈合過程中的炎癥和動(dòng)物的痛感。

3.3 切口愈合情況

試驗(yàn)組皮膚切口愈合速度僅為7d±1d和8d±2d，與對照組相比顯著加快。結(jié)果表明，自制纖維蛋白粘合劑能夠加速切口愈合。皮膚切口的愈合速度與創(chuàng)口纖維蛋白和新生血管數(shù)量有關(guān)，而膠原蛋白含量決定瘢痕組織的大小。同時(shí)，有研究稱，纖維蛋白可作為創(chuàng)口愈合過程中細(xì)胞游走的支架而加速傷口的愈合［3］。自制纖維蛋白粘合劑的主要成分之一為高濃度纖維蛋白原，將其應(yīng)用于皮膚切口粘合，大幅度提升了切口局部纖維蛋白原濃度，因此加快了傷口愈合速度。

試驗(yàn)組與對照組相比，愈合后皮膚切口的瘢痕寬度顯著降低，僅為0.06 mm±0.01 mm 與0.03 mm±0.02mm。結(jié)果表明，自制纖維蛋白粘合劑可以有效的減小切口愈合后的瘢痕組織。瘢痕是創(chuàng)傷修復(fù)過程中的必然產(chǎn)物。廣義上說，沒有瘢痕就沒有組織的愈合。但瘢痕組織過于明顯，則會影響動(dòng)物的美觀。自制纖維蛋白粘合劑可以從保證創(chuàng)緣對合良好、增加創(chuàng)口密閉性、減少額外損傷和可被機(jī)體完全吸收等多個(gè)角度保證組織良好對合與愈合過程順利進(jìn)行，最終導(dǎo)致愈合后瘢痕組織較少，愈合后切口更加美觀。

試驗(yàn)組與對照組相比，愈合切口斷裂力顯著提高，約為0.534kg／cm2±0.001kg／cm2與0.527 kg／cm2±0.006kg／cm2。結(jié)果表明，瘢痕處皮膚的拉伸剪切力顯著低于健康組織。用自制纖維蛋白粘合劑粘合皮膚切口，形成瘢痕組織不明顯，愈合后皮膚的拉伸剪切力更接近健康皮膚。

綜上所述，自制纖維蛋白粘合劑粘合犬皮膚切口與常規(guī)絲線縫合皮膚相比，操作簡單，節(jié)省時(shí)間，切口愈合速度快，不良反應(yīng)輕微，可減少瘢痕形成，但存在粘合強(qiáng)度及維持強(qiáng)度時(shí)間不足的缺點(diǎn)。

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