HPLC法同時(shí)測定黃酒中4種非法食品添加劑

陳軍

(常州市糧油質(zhì)量監(jiān)督檢測站，江蘇常州 213000)

HPLC法同時(shí)測定黃酒中4種非法食品添加劑

陳軍

(常州市糧油質(zhì)量監(jiān)督檢測站，江蘇常州 213000)

建立高效液相色譜同時(shí)測定黃酒中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉4種非法食品添加劑的方法。黃酒中的待測物質(zhì)經(jīng)提取后，采用C18柱分離，以甲醇-乙酸銨溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，在波長230 nm處用高效液相色譜-二極管陣列檢測器進(jìn)行測定。安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的質(zhì)量濃度在0.5～200.0 μg/mL范圍內(nèi)與其色譜峰面積的線性關(guān)系良好(r＞0.999 7)，檢出限為0.29～0.74 μg/L。在0.5，1.0，2.5，5.0，7.5 mg添加水平時(shí)的平均回收率在95.6%～104.0%范圍內(nèi)，測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～1.5%(n=6)。該方法操作簡便，分離效果好，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定可靠，適合于黃酒中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的同時(shí)測定。

黃酒；高效液相色譜法；安賽蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精鈉

黃酒是一種低酒精度的釀造酒，含有多種氨基酸及微量元素，被譽(yù)為“液體蛋糕”［1］。黃酒以大米、黍米等為主要原料，經(jīng)加曲、酵母等糖化發(fā)酵劑釀制而成［2］。著名的黃酒有無錫惠泉酒、紹興加飯酒、丹陽封缸酒、福建龍巖沉缸酒和即墨老酒等［3］。在黃酒生產(chǎn)過程中生產(chǎn)企業(yè)可以根據(jù)需要適量添加焦糖色素(通過普通法、氨法或亞硫酸銨法制得)［4］，但禁止添加安賽蜜(乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉［5］，這4種食品添加劑分別有增加甜味及防腐作用。在江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局主導(dǎo)的黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督抽查中，根據(jù)《黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督抽查實(shí)施規(guī)范》要求必須檢測這4個(gè)指標(biāo)［6］。目前，國內(nèi)已有分別測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的方法［7-10］，但沒有出臺(tái)同時(shí)測定這4種物質(zhì)的國家標(biāo)準(zhǔn)。分開檢測費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不但不能提高儀器使用效率，還影響整個(gè)監(jiān)督抽查工作的進(jìn)度。筆者研究了同時(shí)檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的方法，旨在為大批量的黃酒樣品的快速、準(zhǔn)確檢測與便捷數(shù)據(jù)處理提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1200LC型，帶G1315D型二極管陣列檢測器和LC 3D系統(tǒng)化學(xué)工作站，美國安捷倫科技有限公司；

電子天平：BSA2202S型，德國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；

超聲波清洗器：AS20500A型，天津奧賽恩斯儀器有限公司；

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-6型，常州國華電器有限公司；

超純水機(jī)：Direct-Q3型，法國Millipore公司；

黃酒樣品：生產(chǎn)企業(yè)成品庫隨機(jī)抽取；

亞鐵氰化鉀溶液：106 g/L；

乙酸鋅溶液：220 g/L；

氨水溶液：0.1%；

乙酸銨溶液：0.02 mol/L；

甲醇：色譜純，美國Sigma-Aldrich公司；

苯甲酸溶液[GBW(E)100006]、山梨酸溶液[GBW(E)100007]、糖精鈉溶液[GBW(E)100008]：均為1 mg/mL，中國計(jì)量科學(xué)研究院；

安賽蜜溶液（BW3510）：5，50，100，500，1 000 μg/mL，中國計(jì)量科學(xué)研究院；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋配制成所需濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉為20，40，100，200 μg/mL，安賽蜜為0.5，10，100，200 μg/mL；

實(shí)驗(yàn)所用試劑除注明外均為分析純；

實(shí)驗(yàn)用水：一級(jí)水。

1.2 樣品處理

稱取5.00 g試樣于50 mL比色管中，在水浴鍋上去除酒精，用0.1%氨水調(diào)節(jié)pH至中性，分別加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液和2 mL乙酸鋅溶液(用于沉淀蛋白質(zhì))，定容至標(biāo)線，混勻，放置2 h，取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，待上機(jī)分析。

1.3 液相色譜條件

色 譜 柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫科技有限公司）；流動(dòng)相：甲醇-乙酸銨溶液(體積比為5∶95)，流量為0.7 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.4 測定方法

按1.3測定標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液，以待測物色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。同時(shí)記錄待測物質(zhì)的光譜圖，并與標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖(見圖1～圖4)對(duì)照進(jìn)行定性分析。

圖1 安賽蜜(乙酰磺胺酸鉀)標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

圖2 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

圖3 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

圖4 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

1.5 色譜圖

按1.3色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖5。

圖5 安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件試驗(yàn)

2.1.1 檢測波長

在214，220，225，230 nm處分別檢測混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，出峰順序依次為安賽蜜(6.4 min)、苯甲酸(7.9 min)、山梨酸(11.0 min)和糖精鈉(13.2 min)。結(jié)果表明，安賽蜜、山梨酸在214 nm處峰高最小，在225，230 nm處峰高較大；苯甲酸峰高變化不大；糖精鈉在230 nm處峰高最小，在214 nm處峰高最大。綜合考慮檢測的適用性和靈敏度，實(shí)驗(yàn)選擇230 nm為檢測波長。

2.1.2 流動(dòng)相

固定檢測波長，分別考察乙酸銨溶液(0.02 mol/L)、甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙酸銨溶液等作為流動(dòng)相對(duì)于待測物色譜峰的影響。

結(jié)果表明，采用乙酸銨溶液作為流動(dòng)相時(shí)出峰時(shí)間較長；采用甲醇-水溶液、乙腈-水作為流動(dòng)相時(shí)幾乎不出峰，基線出現(xiàn)漂移；采用甲醇-0.02 mol/L乙酸銨溶液(體積比為5∶95)作為流動(dòng)相，能夠很好地分離出4個(gè)峰，15 min內(nèi)就可以完成一次檢測，為了盡量減少黃酒中夾雜物質(zhì)(如糖分)對(duì)色譜柱的污染，實(shí)驗(yàn)設(shè)置檢測時(shí)間為25 min，以保證一定的時(shí)間沖洗色譜柱。

2.1.3 色譜柱與柱溫

實(shí)驗(yàn)選用安捷倫公司配備的ZORBAX Eclipse XDB-C18柱進(jìn)行檢測，待測物質(zhì)的峰形和保留時(shí)間都較好，故沒有考慮其它型號(hào)的色譜柱。

在檢測波長和流動(dòng)相固定以后，對(duì)不同的柱溫(25，30，35℃)進(jìn)行考察。結(jié)果表明，柱溫的改變，對(duì)待測物質(zhì)的保留時(shí)間和靈敏度影響不大，但隨著柱溫降低柱壓有所下降，實(shí)驗(yàn)選擇柱溫為30℃，既接近常溫，又有較小的柱壓，可以得到較為理想的色譜峰形和保留時(shí)間。

2.1.4 流速的選擇

固定檢測波長、流動(dòng)相、柱溫、色譜柱，選擇流速為0.7 mL/min與1.0 mL/min進(jìn)行比較。結(jié)果表明，選用流速為1.0 mL/min時(shí)，雖然出峰時(shí)間縮短，但4個(gè)峰緊密的排列在一起；選用流速為0.7 mL/min時(shí)峰形分離效果較好，故選擇流動(dòng)相流速為0.7 mL/min。

2.2 工作曲線及檢出限

根據(jù)所確定的實(shí)驗(yàn)條件，取系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測，其中安賽蜜的濃度為0.5，10，100，200 μg/mL，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的濃度為20，40，100，200 μg/mL。在上述質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度c與其對(duì)應(yīng)的峰面積A呈良好線性關(guān)系(r＞0.999 7)，線性方程與線性相關(guān)系數(shù)見表1。

表1 線性方程與線性相關(guān)系數(shù)

按3倍信噪比除以線性方程的斜率計(jì)算檢出限［11］，本次檢測的儀器噪音為0.008 1，進(jìn)樣量10 μL。則各待測物質(zhì)檢出限：安賽蜜為0.57 μg/L；苯甲酸為0.53 μg/L；山梨酸為0.29 μg/L；糖精鈉為0.74 μg/L。

2.3 精密度試驗(yàn)與加標(biāo)回收試驗(yàn)

在1.3色譜條件下，以未檢出本底的某黃酒樣品做基質(zhì)，在0.5，1.0，2.5，5.0，7.5 mg添加水平時(shí)，每個(gè)添加水平重復(fù)6次測定，計(jì)算平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見表2。

表2 黃酒中4種添加劑的加標(biāo)回收試驗(yàn)與精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的加標(biāo)平均回收率在95.6%～104.0%范圍內(nèi)，測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.3%～1.5%范圍內(nèi)，回收率和精密度均滿足實(shí)驗(yàn)要求。

3 結(jié)語

建立了用高效液相色譜儀同時(shí)檢測黃酒中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的方法。該方法簡便、快速、結(jié)果穩(wěn)定可靠，檢出限、回收率和精密度均符合殘留分析要求，適用于大批量的黃酒樣品的快速準(zhǔn)確檢測與便捷數(shù)據(jù)分析。

［1］傅金泉.黃酒生產(chǎn)技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005: 9-10.

［2］GB/T 13662-2008 黃酒［S］.

［3］黃酒.360百科［OL］：http://baike.so.com/doc/2704012.html.

［4］郝利平.食品添加劑［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004: 112-113.

［5］GB 2760-2011 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.

［6］CCGF 103.3-2010 黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督抽查實(shí)施規(guī)范［Z］.

［7］GB/T 5009.28-2003 食品中糖精鈉的測定［S］.

［8］GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的測定［S］.

［9］GB/T 5009.140-2003 飲料中乙?；前匪徕浀臏y定［S］.

［10］GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法［S］.

［11］GB/T 5009.1-2003 食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則［S］.

Simultaneous Determination of Four Kinds of Illegal Food Additives in Chinese Rice Wine by HPLC

Chen Jun
(Supervision and Examination Station of Grain and Oil Products Quality of Changzhou City，Changzhou 213000，China)

A method of simultaneous determination of four kinds of illegal food additives in Chinese rice wine by high performance liquid chromatography(HPLC)-diode array detector was established. The sample was extracted by water，detection wavelength was 230 nm，ZORBAX Eclipse XDB-C18was used for chromatographic separation，and methanol-ammonium acetate aqueous solution was used as mobile phase. The mass concentration has good relationship with the chromatographic peak area in the range of 0.5-200.0 μg/mL(r＞0.999 7)，and the detection limit was 0.29-0.74 μg/L. The relative standard deviations of determination results were 0.3%-1.5%(n=6). The average recovery rates were 95.6%-104.0%. This method is simple，accurate，sensitive and suitable for the simultaneous determination of illegal food additives in Chinese rice wine.

Chinese rice wine; HPLC; acesulfame-K; benzoic acid; sorbic acid; sodium saccharin

O657.7

A

1008-6145(2014)03-0061-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2014.03.017

聯(lián)系人：陳軍；E-mail: chen_jun05@yeah.net

2014-02-12