原發(fā)性膽汁性肝硬化患者免疫學(xué)指標(biāo)特征分析

張文忠，楊躍杰，崔二平

·短篇論著·

原發(fā)性膽汁性肝硬化患者免疫學(xué)指標(biāo)特征分析

張文忠，楊躍杰，崔二平

目的探討原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）患者外周血T細(xì)胞亞群、免疫球蛋白及自身抗體變化情況。方法采用免疫熒光法檢測(cè)抗線粒體抗體（AMA）、抗核抗體（ANA）和抗平滑肌抗體（SMA）；采用免疫印跡法檢測(cè)AMA-M2；采用BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群；采用免疫比濁法測(cè)定免疫球蛋白。結(jié)果37例PBC患者NK細(xì)胞計(jì)數(shù)比正常人明顯減少[（9.57±4.85）%對(duì)（21.5±28.60）%，P＜0.05]；PBC患者血IgM水平明顯高于正常人[（228.55±49.17）mg/dL對(duì)（108.06±64.66）mg/dL，P＜0.05]；在37例PBC患者中，AMA、AMA-M2、ANA、SMA陽(yáng)性分別為37例（100%）、20例（54.05%）、29例（78.37%）和10例（27.02%）結(jié)論P(yáng)BC患者免疫學(xué)指標(biāo)異常表現(xiàn)在自然殺傷細(xì)胞減少，免疫球蛋白M升高。

原發(fā)性膽汁性肝硬化；T細(xì)胞亞群；免疫球蛋白

原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC）病因未明，以肝內(nèi)中小膽管進(jìn)行性、非化膿性炎癥為特征的慢性膽汁淤積性疾病。多見于中年女性，男：女=1:9。本病的家族聚集傾向明顯，尤其是女性親屬更易受累[1]，遺傳易感性、免疫系統(tǒng)以及環(huán)境因素與PBC的發(fā)病有關(guān)。該病血清抗線粒體抗體（antimitochondrial antibody，AMA）陽(yáng)性，尤其是M2亞型（AMA-M2）陽(yáng)性的特異性高，為本病最突出的免疫學(xué)診斷指標(biāo)?？购丝贵w（ANA）和抗平滑肌抗體（SMA）也可以陽(yáng)性[2]，其特異性的病理學(xué)過(guò)程是進(jìn)行性膽管破壞[3]。血清堿性磷酸酶（ALP）和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）升高為本病突出的生化異常，早期PBC患者血清膽紅素水平無(wú)明顯改變。隨著病程進(jìn)展，膽紅素（主要是直接膽紅素）水平逐步升高。血清膽汁酸水平反映膽汁淤積的敏感性高于血清膽紅素。70%～80%患者血清IgM升高，IgG和IgA正常或輕度升高，補(bǔ)體水平一般正常[4]。熊去氧膽酸（UDCA）治療可以延緩早期PBC的進(jìn)展，終末期PBC患者行肝移植治療可延緩生命。近年來(lái)，我國(guó)PBC的總體發(fā)病率呈上升趨勢(shì)?，F(xiàn)對(duì)我院近4年來(lái)診斷的37例PBC患者進(jìn)行回顧性分析，為臨床診治提供有價(jià)值的信息。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2010年1月至2012年12月我院住院的PBC患者37例，男性9例，女性28例；年齡36～75歲，平均年齡（53.6±12.6）歲。病程1月～9年，平均19.6月。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)肝病學(xué)會(huì)（AASLD）2000年版PBC診斷指導(dǎo)建議：（1）堿性磷酸酶（ALP）等反映膽汁淤積的生化指標(biāo)升高；（2）影像學(xué)檢查示膽管正常；（3）血清AMA或AMA-M2亞型陽(yáng)性；（4）對(duì)AMA及AMA-M2陰性者，肝組織病理學(xué)檢查符合PBC改變。所有病例發(fā)病前無(wú)靜脈藥癮、酗酒、應(yīng)用肝損害藥物及輸血史。排除甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎，丁型肝炎、戊型肝炎。排除EB病毒、巨細(xì)胞病毒感染。另選我院健康體檢者37例作為對(duì)照，男性10例，女性27例；年齡25～60歲，平均年齡（50.3±9.97）歲。

1.2 檢測(cè)使用HITACHI7600全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血生化指標(biāo)；采用免疫熒光法檢測(cè)AMA、ANA和SMA[歐蒙（北京）醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)有限公司]；采用免疫印跡法檢測(cè)AMA-M2亞型[歐蒙（北京）醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)有限公司]；采用BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群（北京東迅天地醫(yī)療儀器有限公司）；采用免疫比濁法測(cè)定免疫球蛋白（山東濰坊三維生物工程團(tuán)體有限公司）。

1.3 肝活檢常規(guī)行肝組織病理學(xué)檢查。病理學(xué)診斷為累及肝內(nèi)細(xì)小膽管的慢性非化膿性的膽管炎，病理學(xué)表現(xiàn)分為4期：I期，匯管區(qū)小葉間膽管炎；Ⅱ期，匯管區(qū)小葉問(wèn)膽管消失，匯管區(qū)周邊細(xì)小膽管增生，同時(shí)伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；Ⅲ期，肝組織纖維化變形；IV期：存在再生結(jié)節(jié)的肝硬化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PBC患者免疫細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化與正常人比，PBC患者NK細(xì)胞明顯減低（P＜0.05，表1）。

2.2 PBC患者免疫球蛋白水平的變化與正常人比，PBC患者IgM水平明顯升高（P＜0.05，表2）。

2.3 PBC患者自身抗體陽(yáng)性情況在本組37例PBC患者中，AMA、AMA-M2、ANA、SMA陽(yáng)性分別為37例（100%）、20例（54.05%）、29例（78.37%）和10例（27.02%）。

表1 PBC患者與正常人外周血T細(xì)胞計(jì)數(shù)（%，±s）比較

表1 PBC患者與正常人外周血T細(xì)胞計(jì)數(shù)（%，±s）比較

①P＜0.05

PBC例數(shù)37 CD4+CD8+CD4+/CD8+NK細(xì)胞43.14±10.5430.77±4.721.40±2.239.57±4.85①對(duì)照組37 t 39.43±9.8131.08±4.281.26±2.2921.5±28.60 1.5670.2960.2662.502 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05

表2 PBC患者與正常人免疫球蛋白水平（mg/dL，±s）的比較

表2 PBC患者與正常人免疫球蛋白水平（mg/dL，±s）的比較

①P＜0.05

IgMIgGIgA PBC228.55±49.17①297.98±48.18127.43±60.16對(duì)照組108.06±64.66289.44±34.79112.23±59.10 t 9.0230.8741.096 P＜0.05＞0.05＞0.05

3 討論

PBC多見于中年女性，是一種慢性進(jìn)行性、有一定遺傳易感性的疾病，病理學(xué)特征為累及肝內(nèi)細(xì)小膽管的慢性非化膿性膽管炎，膽管上皮細(xì)胞凋亡。

自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）從骨髓中衍生，其發(fā)育成熟依賴于骨髓的微環(huán)境。實(shí)驗(yàn)表明，胸腺細(xì)胞可誘導(dǎo)出NK細(xì)胞。脾臟可促進(jìn)NK細(xì)胞的分化。NK細(xì)胞主要分布于外周血中，淋巴結(jié)和骨髓中也有NK活性。NK細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，但在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。NK細(xì)胞在PBC患者中的作用，目前無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)說(shuō)明，需進(jìn)一步觀察。本文資料顯示PBC患者NK細(xì)胞較對(duì)照組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮NK細(xì)胞水平下降，導(dǎo)致細(xì)菌、病毒特異性感染，參與PBC的發(fā)生[5～7]。

IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，參與機(jī)體早期抗感染免疫。血清某種特異性IgM型抗體陽(yáng)性提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。在感染過(guò)程中，IgM首先出現(xiàn)，但持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)。因此，可以認(rèn)為IgM升高提示患者持續(xù)存在感染。免疫球蛋白IgM升高是PBC的一個(gè)特點(diǎn)。王兆彬[8]報(bào)道86例PBC患者血清IgA和IgG正常，但48%患者IgM水平明顯升高，平均為（3.6±2.4）g/L。張嫣[9]認(rèn)為PBC患者存在先天性免疫系統(tǒng)紊亂，在肝臟損害的發(fā)生和發(fā)展上起著重要的作用,特征性表現(xiàn)包括對(duì)細(xì)菌抗原應(yīng)答的血清IgM水平升高、上皮性肉芽腫的形成、細(xì)胞因子應(yīng)答水平的升高、NK細(xì)胞及單核細(xì)胞對(duì)病原體相關(guān)分子應(yīng)答提高等。本資料顯示PBC患者IgM水平升高，與相關(guān)報(bào)道一致，提示PBC患者體液免疫功能異常。

血清AMA陽(yáng)性為診斷PBC的基本條件，具有高度的特異性，是最重要的診斷手段，其中M2、M4、M8、M9亞型與PBC密切相關(guān)，且M2抗原只在肝臟的膽管上皮表達(dá)，在肝細(xì)胞不表達(dá)，故M2對(duì)PBC的診斷最具特異性，AMA-M2診斷PBC的敏感性為98%，特異性為96%[10]。王仲霞[11]報(bào)道61例PBC患者中73.8%AMA和（或）AMA-M2亞型陽(yáng)性，而57.4%患者ANA陽(yáng)性。查翔遠(yuǎn)[12]報(bào)道23例PBC患者中19例（82.6%）血清AMA及其M2亞型陽(yáng)性，14例（60.9%）ANA陽(yáng)性。本資料顯示在37例PBC患者中，AMA陽(yáng)性患者37例（100%），AMA-M2陽(yáng)性20例（50.05%），ANA陽(yáng)性29例（78.37%）。PBC患者免疫學(xué)指標(biāo)異常表現(xiàn)為自然殺傷細(xì)胞減少，免疫球蛋白M升高、及AMA、AMA-M2、ANA陽(yáng)性，其自然殺傷細(xì)胞減少的原因需進(jìn)一步探討。

[1]Hirschfield GM，Liu X，Xu C，et al.Primary biliary cirrhosis associated with HLA，IL12A，and IL12RB2 variants.N Engl J Med，2009，360（24）:2544-2555.

[2]Leuschner U.Primary biliary cirrhosis-presentation and diagnosis.Clin Liver Dis，2003，7（16）：741-758.

[3]張文忠，姚萍.原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病的分子機(jī)制研究進(jìn)展.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（21）：2740-2741.

[4]張?？?原發(fā)性膽汁性肝硬化研究進(jìn)展.中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志（電子版），2012，4（7）:46-51.

[5]Selmi C，Bowlus C，Gershwin ME，et al.Primary biliary cirrhosis.Lancet，2011，377（21）:1600-1609.

[6]Selmi C，Gershwin ME.The retroviral myth of primary biliary cirrhosis:is this（finally）the end of the story.Hepatology，2009，51（12）:412-413.

[7]Masol AL，Zhang G.Linking human beta retrovirus infection with primary biliarycirrhosis.Gastroenterologie Cliniqueet Biologique，2010，34（9）:359-368.

[8]王兆彬.原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床研究.中外醫(yī)療，2012，33（6）:92-94.

[9]張嫣等．雌激素受體α基因多態(tài)性對(duì)女性原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化患者T細(xì)胞亞群及其相關(guān)細(xì)胞因子變化影響的研究．中醫(yī)臨床醫(yī)師雜志，2010，4（10）：954-961.

[10]Wesiersk-Gadek J，Penner E，Buttezzati PM，et al．Correlation of initial autoantibody profile and clinical outcome in primary biliary cinhosis．Hepatology，2006，43（5）:1135-1144．

[11]王仲霞，王立福，白云峰.61例原發(fā)性膽汁性肝硬化主要癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)及病理分析.傳染病信息，2011，24（3）: 179-181.

[12]查翔遠(yuǎn)，翟群超，宋有良，等.23例原發(fā)性膽汁性肝硬化患者臨床特征分析.實(shí)用肝臟病雜志，2012，15（2）:149-150.

（收稿：2014-04-08）

（校對(duì)：陳宗炳）

Peripheral T lymphocyte subsets and serum IgM levels in patients with primary biliary cirrhosis

Zhang Wenzhong，Yang Yuejie，Cui Erping.ICU，Sixth People’s Hospital，Zhengzhou 450000，China

Primary biliary cirrhosis；T lymphocyte subsets；IgM

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.05.024

450000鄭州市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科

張文忠，男，48歲，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師。研究方向：重癥肝病的診治研究。E-mail：hnzwz@163.com