葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統(tǒng)測(cè)定頭孢地尼顆粒中高分子聚合物含量

張宇佳,方夏琴,相莉,陳少華,鄭穩(wěn)生

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所,藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100050)

葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統(tǒng)測(cè)定頭孢地尼顆粒中高分子聚合物含量

張宇佳,方夏琴,相莉,陳少華,鄭穩(wěn)生

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所,藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100050)

目的 建立凝膠色譜法測(cè)定頭孢地尼顆粒中聚合物的方法。方法色譜柱為葡聚糖凝膠G-10柱(400 mm×13 mm,40～120μm),流動(dòng)相A為pH7.0的0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液,流動(dòng)相B為水。流速1.5 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm,進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果該方法在0.247～1.728 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=1.000 0),頭孢地尼顆粒中聚合物含量＜0.1%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高,適用于頭孢地尼顆粒聚合物的控制。

頭孢地尼顆粒;聚合物;色譜法,凝膠

β-內(nèi)酰胺抗生素是目前臨床上最常用的抗感染藥物,但同時(shí)也是臨床上時(shí)常引發(fā)變態(tài)反應(yīng)的藥物[1-2]。研究證明,β-內(nèi)酰胺類抗生素變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生率與制劑中高分子聚合物及內(nèi)源性聚合物的含量有關(guān)[3-4]。因此,對(duì)聚合物的控制是該類藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵。《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版收載了15種需控制聚合物含量的β-內(nèi)酰胺類抗生素,多為供注射用原料及其制劑[5]。研究表明,口服抗生素類藥物同樣會(huì)引起變態(tài)反應(yīng)[6-7]。頭孢地尼為口服第3代頭孢菌素,抗菌譜廣?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2010年版對(duì)頭孢地尼顆粒所含相似聚合物的測(cè)定方法筆者未見有關(guān)報(bào)道,現(xiàn)利用葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了對(duì)頭孢地尼顆粒中高分子聚合物的分離分析,為該藥的質(zhì)量控制提供了一個(gè)新的檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SPD-10A泵LC-10AD檢測(cè)器(日本島津公司),色譜柱:葡聚糖凝膠(sephadex)G-10柱(TIANG400,TIANHE,400 mm×13 mm,40～120μm)。

1.2 試藥 頭孢地尼顆粒(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所自制,批號(hào):110401,110402,110403),頭孢地尼對(duì)照品(USPReference Standard,Cefdinir),200 mg CAT. NO.1097614 USP ROCKVILLE,MD LOT FOG231。高效液相色譜法測(cè)得含量:99.2%;紫外分光光度法測(cè)得含量:99.9%。磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉均為分析純,藍(lán)色葡聚糖2000為Pharmacia公司產(chǎn)品,實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 用葡聚糖凝膠G-10 (40～120μm)為填充劑,柱長(zhǎng)400 mm×13 mm,40～120μm。以pH7.0的0.01 mol·L-1磷酸鹽緩沖液[0.01 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.01 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61∶39)]為流動(dòng)相A,以水為流動(dòng)相B,流速1.5 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。分別以流動(dòng)相A、B為流動(dòng)相,取1 mg·mL-1藍(lán)色葡聚糖2000溶液20μL,注入液相色譜儀,理論板數(shù)按藍(lán)色葡聚糖2000峰計(jì)算均應(yīng)不低于700,拖尾因子均應(yīng)＜2.0。在兩種流動(dòng)相系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰保留時(shí)間的比值應(yīng)在0.93～1.07之間,對(duì)照溶液主峰和供試品溶液中聚合物峰與相應(yīng)色譜系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰保留時(shí)間的比值均應(yīng)在0.93～1.07之間。稱取頭孢地尼約10 mg,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的藍(lán)色葡聚糖溶液稀釋至刻度,精密量取20μL,注入液相色譜儀,以流動(dòng)相A進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖。高聚體的峰高∶單體與高聚體之間的谷高應(yīng)＞2.0。

2.2 線性關(guān)系考察 取頭孢地尼對(duì)照品溶液0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5 mL,分別置7個(gè)100 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,即得頭孢地尼系列溶液,分別進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。得線性回歸方程:Y= 24 272.051 0X+79.750 8,r=1.000 0。結(jié)果表明,在0.247～1.728 mg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 稱取藍(lán)色葡聚糖2000適量,加水溶解并稀釋成每毫升中含1 mg的溶液,精密量取20μL,分別以流動(dòng)相A、B為流動(dòng)相,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;取小試樣品約0.1 g,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的藍(lán)色葡聚糖溶液稀釋至刻度,精密量取20μL,以流動(dòng)相A為流動(dòng)相,依法測(cè)定;取頭孢地尼對(duì)照品適量,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解制成1 mg·mL-1的溶液,作為對(duì)照品溶液,精密量取20μL,以流動(dòng)相B為流動(dòng)相,依法測(cè)定。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:流動(dòng)相B中,葡聚糖與對(duì)照液主峰的保留時(shí)間比值為0.93;流動(dòng)相A中,葡聚糖與供試液聚合物峰的保留時(shí)間比值為1.0。葡聚糖在流動(dòng)相B與流動(dòng)相A中保留時(shí)間的比值為0.97,高聚體的峰高與高聚體與單體之間的谷高的分離度達(dá)到了51,分離度良好。此方法的系統(tǒng)適用性良好。見表1。

表1 聚合物檢查系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 min

2.4 檢測(cè)限 取小試樣品溶液(按頭孢地尼計(jì), 0.05 mg·mL-1)20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,根據(jù)樣品中聚合物含量計(jì)算可得,頭孢地尼聚合物的檢測(cè)限(S/N≥3)為1.1 ng。

2.5 穩(wěn)定性考察 取本品適量,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至每毫升中約含頭孢地尼1 mg的溶液,室溫放置,分別于0,1.5,3.0,4.5,6.0, 7.5 h進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。結(jié)果表明,放樣7.5 h后,聚合物峰面積無明顯變化趨勢(shì),溶液穩(wěn)定性較好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品約0.1 g,精密稱定,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,平行制備供試品溶液6份,分別取20μL,注入液相色譜儀,進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明,本方法的測(cè)定重復(fù)性良好。

2.7 樣品測(cè)定 取本品適量(約含頭孢地尼10 mg),精密稱定,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取20μL注入液相色譜儀,以流動(dòng)相A為流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖。另精密量取對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀,以流動(dòng)相B為流動(dòng)相,同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,含頭孢地尼聚合物以頭孢地尼計(jì)不得超過2.0%。檢查了3批頭孢地尼顆粒的聚合物,結(jié)果均符合規(guī)定。見表2。

表2 頭孢地尼顆粒聚合物測(cè)定結(jié)果 %,n=2

3 討論

溶解度實(shí)驗(yàn)表明,頭孢地尼不溶于水,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和1 mol·L-1的氫氧化鈉。以葡聚糖凝膠G-10為填料時(shí),不宜使用有機(jī)溶劑,且強(qiáng)堿條件下,樣品降解產(chǎn)生的雜質(zhì)干擾聚合物測(cè)定,故上述溶劑均不適用。通過研究發(fā)現(xiàn),用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]作為溶劑,既解決了溶解度的問題,又能滿足葡聚糖凝膠G-10凝膠柱的適用范圍。因?yàn)榱姿猁}溶液為流動(dòng)相中使用部分,有效避免了干擾。用葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了對(duì)本品中高分子雜質(zhì)的分離分析。本法操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可作為頭孢地尼顆粒中高分子聚合物檢測(cè)的常規(guī)方法。

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DOI 10.3870/yydb.2014.12.025

R978.1;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1634-02

2013-12-12

2014-03-21

張宇佳(1977-),女,北京人,助理研究員,學(xué)士,從事藥物制劑及質(zhì)量研究工作。電話:010-63165233,E-mail:zhyj@imm.ac.cn。

鄭穩(wěn)生(1966-),男,安徽潛山人,副研究員,博士,從事藥物制劑及質(zhì)量研究工作。電話:010-63165233,E-mail:zhengwensheng@imm.ac.cn。