甲狀腺乳頭狀癌miR—34b基因表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化的臨床意義研究

董子龍等

【摘要】 目的：探討miR-34b基因表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化（MSP）在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中的臨床意義。方法：收集2008年10月-2013年1月本院治療的42例甲狀腺乳頭狀癌患者癌組織標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)組）和42例甲狀腺腺瘤患者瘤旁組織標(biāo)本（對(duì)照組），檢測(cè)兩組miR-34bmRNA表達(dá)（實(shí)時(shí)定量PCR法）及miR-34b基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化（甲基化特異性PCR法），并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組miR-34b mRNA相對(duì)平均表達(dá)量（0.84±0.04），miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化陽性率71.4%，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組中不同性別、年齡、腫瘤直徑、分期和包膜浸潤之間，甲基化陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲基化率（88.5%）顯著高于不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（43.8%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：miR-34b基因表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化與PTC發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系，建議臨床深入研究。

【關(guān)鍵詞】 甲狀腺乳頭狀癌； miR-34b基因； 甲基化

甲狀腺癌為頭頸部最常見的惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率呈明顯增加趨勢(shì)。乳頭狀癌其中分化較好的病理類型，約占甲狀腺癌的70%，以女性多見[1-2]。甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多種基因的突變和重組，但其具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。miR-34b基因作為重要調(diào)控因子之一，在甲狀腺癌變過程中具有關(guān)鍵作用[3]。本文分析甲狀腺乳頭狀癌（PTC）miR-34b基因表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化，旨在發(fā)現(xiàn)特異性分子標(biāo)志物，為甲狀腺乳頭狀癌的早期發(fā)現(xiàn)及治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2008年10月-2013年1月手術(shù)切除治療的42例PTC患者的癌組織（實(shí)驗(yàn)組）和42例甲狀腺腺瘤患者瘤旁組織（對(duì)照組），實(shí)驗(yàn)組中男18例，女24例；年齡25～74歲，平均（48.6±6.2）歲，≤50歲22例，50歲以上20例；腫瘤直徑≤2 cm共19例，腫瘤直徑>2 cm共23例；TNM分期結(jié)果：Ⅰ期20例，Ⅱ期7例，Ⅲ期12例，Ⅳ期3例；發(fā)生包膜浸潤14例，未發(fā)生包膜浸潤28例；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。對(duì)照組中男17例，女25例；年齡24～73歲，平均（48.3±6.4）歲，≤50歲21例，50歲以上21例；所有標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)檢查明確診斷，所有標(biāo)本在離體10 min內(nèi)完成取材，置于液氮內(nèi)放入-80 ℃冰箱內(nèi)進(jìn)行保存。本實(shí)驗(yàn)患者均簽署知情同意書。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 美國Invitrogen公司生產(chǎn)的Trizol試劑盒及ABI 7900HT PCR儀，日本TAK-ARA公司生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，上海吉瑪公司生產(chǎn)RT-PCR試劑盒，由上海英駿生物工程公司所合成的PCR引物序列，美國 ZYMO RESEARCH生物科技公司銷售的EZ DNA MethylationTM -GOLD Kit試劑盒。美國賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)的Forma88000超低溫冰箱，德國艾本德公司生產(chǎn)的Centrifuge 5810R高速離心機(jī)，Powerpac HC電泳儀（美國 BIO-RAD公司），美國Thermo公司制造的NANODROP 1000紫外分光光度計(jì)，凝膠成像儀及凝膠數(shù)字成像系統(tǒng)（美國UVP公司）。

1.2.2 提取組織RNA 液氮研磨法：研磨新鮮組織成粉末狀，滴加Trizol試劑進(jìn)行混合，參照Trizol試劑盒說明書對(duì)組織總RNA進(jìn)行提取。成功提取后用紫外分光光度計(jì)（光密度值260/280）對(duì)RNA純度進(jìn)行檢測(cè)，總RNA在1.8～2.0 之間，保存于-80 ℃超低溫冰箱中備用。

1.2.3 檢測(cè)miR-34b mRNA表達(dá) RT-PCR 法：參照miRNAs RT-PCR試劑盒以及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中所附說明書進(jìn)行操作，cDNA通過試劑盒內(nèi)的通用逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行合成。反應(yīng)體系：Primer、脫氧核糖核苷三磷酸Mixture及RNA 均為1 μL，dd H2O為7 μL；反應(yīng)條件：42 ℃中作用60 min后72 ℃中作用10 min。以cDNA為模板擴(kuò)增PCR ，反應(yīng)體系：10.0 μL PCR Mix，0.4 μL miR-34b引物，2.0 μL c DNA，0.2 μL Taq DNA多聚酶，7.4 μL dd H2O；反應(yīng)條件：95 ℃內(nèi)3 min預(yù)變性；95 ℃中作用12 s，60 ℃中作用60 s，共循環(huán)40次。內(nèi)參照為β-肌動(dòng)蛋白mRNA。

1.2.4 檢測(cè)甲基化特異性 PCR法檢測(cè)：酚氯仿抽提法提取MSP組織DNA。EZ DNA MethylationTM -GOLD Kit試劑盒修飾及純化甲基化基因組DNA。甲基化條件：15 min 95 ℃， 30 s 95 ℃，30 s 54 ℃，40 s 72 ℃，循環(huán)35次；非甲基化條件：15 min 95 ℃，30 s 95 ℃，30 s 58 ℃，40 s 72 ℃，循環(huán)35次。紫外線下觀察分析PCR凝膠電泳情況（1%瓊脂糖）。甲基化引物序列片段長度為128 bp，上游5-ATTCGTTTCGTTTCGCGTTCGTTTC-3，下游5-CTAAAACTAACTCTCTCGACCCCG-3。

1.3 觀察指標(biāo) 參照文獻(xiàn)[4]應(yīng)用2-△△CT法計(jì)算miR-34b mRNA的相對(duì)平均表達(dá)量，分析甲基化與臨床病理的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 14.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-34b mRNA表達(dá)結(jié)果 miR-34b mRNA相對(duì)平均表達(dá)量結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組（0.84±0.04），對(duì)照組（1.63±0.07），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.354，P=0.021），提示miR-34bmRNA在PTC組織中相對(duì)表達(dá)量顯著低于甲狀腺腺瘤瘤旁組織。

2.2 miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果 MSP產(chǎn)物電泳甲基化陽性為同時(shí)擴(kuò)增顯現(xiàn)U及M條帶，甲基化陰性為只擴(kuò)增U條帶（詳見圖1及圖2）。觀察組甲基化陽性率為71.4%（30/42），對(duì)照組甲基化陽性率為40.5%（17/42），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=8.163， P=0.004）。

2.3 實(shí)驗(yàn)組miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化與臨床病理的關(guān)系 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，患者年齡、性別、腫瘤直徑、TNM分期以及是否存在包膜浸潤對(duì)miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果均無顯著影響，甲基化陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），即有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。見表1。

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是臨床高發(fā)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅患者生命健康。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展是多因素、多基因共同作用的結(jié)果，單純依據(jù)腫瘤細(xì)胞病理組織形態(tài)難以進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和分型[5-6]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，癌基因及編碼蛋白的異常表達(dá)逐漸被證實(shí)與腫瘤形成具有密切關(guān)系。由高等真核生物基因組編碼的miRNA成熟后，保守性、時(shí)序性和組織特異性較高，對(duì)基因表達(dá)和形成腫瘤起重要作用[7]。腫瘤細(xì)胞中最常見的分子改變就是甲基化，目前多項(xiàng)研究證實(shí)基因組甲基化和基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與腫瘤相關(guān)基因異常轉(zhuǎn)錄均有關(guān)，是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一[8-11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-34b在PTC癌組織的表達(dá)量以及甲基化陽性率顯著高于甲狀腺腺瘤瘤旁組織（P<0.05），miR-34b啟動(dòng)子區(qū)甲基化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，淋巴轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移者甲基化陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P<0.05），提示miR-34b對(duì)PTC的形成具有重要作用，miR-34b甲基化水平對(duì)判斷PTC轉(zhuǎn)移情況有重要意義，癌組織中miR-34b mRNA表達(dá)量雖低，但甲基化水平卻高達(dá)71.4%，可能是癌組織中 miR-34b基因啟動(dòng)子存在甲基化異常。miR-34b是miR-34家族成員之一，作為p53信號(hào)通路的重要組成部分，miR-34基因表達(dá)情況與p53狀態(tài)關(guān)系密切，研究證實(shí)p53的直接靶點(diǎn)就是miR-34基因[4]，而p53是DNA損傷及致瘤效應(yīng)有效介導(dǎo)作用，miR-34基因異常表達(dá)將直接影響細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，調(diào)控細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌基因甲基化（包括p53相關(guān)區(qū)域、E鈣黏素基因等），能夠引發(fā)轉(zhuǎn)錄異常，基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化異常促使miRNA基因喪失活性，從而調(diào)控p53通路，干預(yù)細(xì)胞生長過程，影響導(dǎo)致PTC發(fā)生發(fā)展[11-12]。miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化，引發(fā)DNA轉(zhuǎn)錄異常，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，抑制促凋亡作用，最終導(dǎo)致PTC發(fā)生及惡化。綜上所述，miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化與PTC關(guān)系密切，有望成為PTC診斷及預(yù)后的分子生物學(xué)參考指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊昆憲，唐曉丹，牛恒. 改良切口在甲狀腺乳頭狀癌區(qū)域淋巴結(jié)清掃中的臨床應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（5）：18-19.

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[5] 范自平，喬智，吳德敬.甲狀腺癌診斷及復(fù)發(fā)因素分析[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2010，17（1）：68-72.

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[7] 張明，劉衛(wèi)輝，尤楠，等.7種microRNAs在原發(fā)性肝癌組織和癌旁組織間的差異表達(dá)及與血清腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性研究[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2010，17（6）：562-566.

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[9] Wong K Y，Yu L，Chim C S.DNA methylation of tumor suppressor miRNA genes：a lesson from the miR-34 family[J]. Epigenomics，2011，3（1）：83-92.

[10] 吳凱，李欣，馬茂強(qiáng)，等. DAPK基因啟動(dòng)子區(qū)過甲基化與頸段食管癌的關(guān)系[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（27）：3-5.

[11] Majid S， Dar A A， Saini S， et al. miRNA-34b inhibits prostate cancer through demethylation， active chromatin modifications， and AKT pathways[J].Clin Cancer Res，2013，19（1）：73-84.

[12] Mathe E， Nguyen G H，F(xiàn)unamizu N， et al. Inflammation regulates microRNA expression in cooperation with p53 and nitric oxide[J].Int J Cancer，2012，131（3）：760-765.

（收稿日期：2014-02-07）（本文編輯：陳丹云）

2.2 miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果 MSP產(chǎn)物電泳甲基化陽性為同時(shí)擴(kuò)增顯現(xiàn)U及M條帶，甲基化陰性為只擴(kuò)增U條帶（詳見圖1及圖2）。觀察組甲基化陽性率為71.4%（30/42），對(duì)照組甲基化陽性率為40.5%（17/42），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=8.163， P=0.004）。

2.3 實(shí)驗(yàn)組miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化與臨床病理的關(guān)系 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，患者年齡、性別、腫瘤直徑、TNM分期以及是否存在包膜浸潤對(duì)miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果均無顯著影響，甲基化陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），即有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。見表1。

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是臨床高發(fā)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅患者生命健康。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展是多因素、多基因共同作用的結(jié)果，單純依據(jù)腫瘤細(xì)胞病理組織形態(tài)難以進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和分型[5-6]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，癌基因及編碼蛋白的異常表達(dá)逐漸被證實(shí)與腫瘤形成具有密切關(guān)系。由高等真核生物基因組編碼的miRNA成熟后，保守性、時(shí)序性和組織特異性較高，對(duì)基因表達(dá)和形成腫瘤起重要作用[7]。腫瘤細(xì)胞中最常見的分子改變就是甲基化，目前多項(xiàng)研究證實(shí)基因組甲基化和基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與腫瘤相關(guān)基因異常轉(zhuǎn)錄均有關(guān)，是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一[8-11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-34b在PTC癌組織的表達(dá)量以及甲基化陽性率顯著高于甲狀腺腺瘤瘤旁組織（P<0.05），miR-34b啟動(dòng)子區(qū)甲基化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，淋巴轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移者甲基化陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P<0.05），提示miR-34b對(duì)PTC的形成具有重要作用，miR-34b甲基化水平對(duì)判斷PTC轉(zhuǎn)移情況有重要意義，癌組織中miR-34b mRNA表達(dá)量雖低，但甲基化水平卻高達(dá)71.4%，可能是癌組織中 miR-34b基因啟動(dòng)子存在甲基化異常。miR-34b是miR-34家族成員之一，作為p53信號(hào)通路的重要組成部分，miR-34基因表達(dá)情況與p53狀態(tài)關(guān)系密切，研究證實(shí)p53的直接靶點(diǎn)就是miR-34基因[4]，而p53是DNA損傷及致瘤效應(yīng)有效介導(dǎo)作用，miR-34基因異常表達(dá)將直接影響細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，調(diào)控細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌基因甲基化（包括p53相關(guān)區(qū)域、E鈣黏素基因等），能夠引發(fā)轉(zhuǎn)錄異常，基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化異常促使miRNA基因喪失活性，從而調(diào)控p53通路，干預(yù)細(xì)胞生長過程，影響導(dǎo)致PTC發(fā)生發(fā)展[11-12]。miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化，引發(fā)DNA轉(zhuǎn)錄異常，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，抑制促凋亡作用，最終導(dǎo)致PTC發(fā)生及惡化。綜上所述，miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化與PTC關(guān)系密切，有望成為PTC診斷及預(yù)后的分子生物學(xué)參考指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

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[5] 范自平，喬智，吳德敬.甲狀腺癌診斷及復(fù)發(fā)因素分析[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2010，17（1）：68-72.

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[7] 張明，劉衛(wèi)輝，尤楠，等.7種microRNAs在原發(fā)性肝癌組織和癌旁組織間的差異表達(dá)及與血清腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性研究[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2010，17（6）：562-566.

[8] Hiroki E， Suzuki F， Akahira J， et al. MicroRNA-34b functions as a potential tumor suppressor in endometrial serous adenocarcinoma[J].Int J Cancer，2012，131（4）：E395-E404.

[9] Wong K Y，Yu L，Chim C S.DNA methylation of tumor suppressor miRNA genes：a lesson from the miR-34 family[J]. Epigenomics，2011，3（1）：83-92.

[10] 吳凱，李欣，馬茂強(qiáng)，等. DAPK基因啟動(dòng)子區(qū)過甲基化與頸段食管癌的關(guān)系[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（27）：3-5.

[11] Majid S， Dar A A， Saini S， et al. miRNA-34b inhibits prostate cancer through demethylation， active chromatin modifications， and AKT pathways[J].Clin Cancer Res，2013，19（1）：73-84.

[12] Mathe E， Nguyen G H，F(xiàn)unamizu N， et al. Inflammation regulates microRNA expression in cooperation with p53 and nitric oxide[J].Int J Cancer，2012，131（3）：760-765.

（收稿日期：2014-02-07）（本文編輯：陳丹云）

2.2 miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果 MSP產(chǎn)物電泳甲基化陽性為同時(shí)擴(kuò)增顯現(xiàn)U及M條帶，甲基化陰性為只擴(kuò)增U條帶（詳見圖1及圖2）。觀察組甲基化陽性率為71.4%（30/42），對(duì)照組甲基化陽性率為40.5%（17/42），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=8.163， P=0.004）。

2.3 實(shí)驗(yàn)組miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化與臨床病理的關(guān)系 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，患者年齡、性別、腫瘤直徑、TNM分期以及是否存在包膜浸潤對(duì)miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果均無顯著影響，甲基化陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，miR-34b基因啟動(dòng)子甲基化陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），即有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。見表1。

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是臨床高發(fā)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅患者生命健康。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展是多因素、多基因共同作用的結(jié)果，單純依據(jù)腫瘤細(xì)胞病理組織形態(tài)難以進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和分型[5-6]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，癌基因及編碼蛋白的異常表達(dá)逐漸被證實(shí)與腫瘤形成具有密切關(guān)系。由高等真核生物基因組編碼的miRNA成熟后，保守性、時(shí)序性和組織特異性較高，對(duì)基因表達(dá)和形成腫瘤起重要作用[7]。腫瘤細(xì)胞中最常見的分子改變就是甲基化，目前多項(xiàng)研究證實(shí)基因組甲基化和基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與腫瘤相關(guān)基因異常轉(zhuǎn)錄均有關(guān)，是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一[8-11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-34b在PTC癌組織的表達(dá)量以及甲基化陽性率顯著高于甲狀腺腺瘤瘤旁組織（P<0.05），miR-34b啟動(dòng)子區(qū)甲基化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，淋巴轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移者甲基化陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P<0.05），提示miR-34b對(duì)PTC的形成具有重要作用，miR-34b甲基化水平對(duì)判斷PTC轉(zhuǎn)移情況有重要意義，癌組織中miR-34b mRNA表達(dá)量雖低，但甲基化水平卻高達(dá)71.4%，可能是癌組織中 miR-34b基因啟動(dòng)子存在甲基化異常。miR-34b是miR-34家族成員之一，作為p53信號(hào)通路的重要組成部分，miR-34基因表達(dá)情況與p53狀態(tài)關(guān)系密切，研究證實(shí)p53的直接靶點(diǎn)就是miR-34基因[4]，而p53是DNA損傷及致瘤效應(yīng)有效介導(dǎo)作用，miR-34基因異常表達(dá)將直接影響細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，調(diào)控細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌基因甲基化（包括p53相關(guān)區(qū)域、E鈣黏素基因等），能夠引發(fā)轉(zhuǎn)錄異常，基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化異常促使miRNA基因喪失活性，從而調(diào)控p53通路，干預(yù)細(xì)胞生長過程，影響導(dǎo)致PTC發(fā)生發(fā)展[11-12]。miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化，引發(fā)DNA轉(zhuǎn)錄異常，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，抑制促凋亡作用，最終導(dǎo)致PTC發(fā)生及惡化。綜上所述，miR-34b基因及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化與PTC關(guān)系密切，有望成為PTC診斷及預(yù)后的分子生物學(xué)參考指標(biāo)。

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（收稿日期：2014-02-07）（本文編輯：陳丹云）