HPLC法測定復(fù)方金甲合劑中黃芩苷的含量

摘要：目的 建立復(fù)方金甲合劑中黃芩苷的含量測定方法。方法 采用HPLC法，C18 ODS為色譜柱，甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.4）為流動相；流速為1.0ml/min；檢測波長為280nm。結(jié)果 黃芩苷進樣濃度在15.2～243.2μg/ml范圍內(nèi)線性良好，方法平均回收率為99.5%，RSD為1.17%（n=6）。結(jié)論 本文建立的HPLC法可作為復(fù)方金甲合劑質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：HPLC； 復(fù)方金甲合劑； 黃芩苷

復(fù)方金甲合劑由黃芩、當(dāng)歸、紅花、郁金、柴胡、陳皮等中藥材組成，是我院胸外科醫(yī)院制劑，具有疏肝理氣，活血化瘀，消腫止痛，用于胸肋跌打損傷、淤血，傷積于肋下疼痛難忍者，效果良好。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)屬于安徽省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)，無含量測定項，為控制本品的質(zhì)量，采用高效液相色譜法測定黃芩有效成分黃芩苷的含量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（L6-DP6型）（生產(chǎn)廠家：北京普析通用設(shè)備科技有限公司）；色譜柱為依利特C18（5？滋m，4.6mm×150mm）。

黃芩苷對照品（含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110715-200212）；甲醇（色譜純，美國天地）、磷酸（國藥）；水為去離子純化水；其他試劑均為分析純；復(fù)方金甲合劑（太和縣中醫(yī)院，批號20140506、20140509、20140511，規(guī)格250ml/瓶）。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為依利特 C18（5？滋m，4.6mm×150mm）；甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.4）為流動相；流速為1ml/min；檢測波長為280nm；柱溫為30℃；進樣量為10？滋l。

2.2樣品溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷14.16mg，加甲醇制成含黃芩苷μg/ml的溶液，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備[1] 取本品2ml，置于50ml容量瓶中，精密量取25ml甲醇于容量瓶內(nèi)，再用0.4%的磷酸溶液定容至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按處方量稱取除黃芩外的處方成份，照復(fù)方金甲合劑制備工藝制成陰性樣品。精密稱取陰性樣品2ml，照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，用0.45μm微孔濾按照上述色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液，分別注入色譜儀。實驗結(jié)果表明：陰性樣品不干擾供試品溶液的測定。

2.4線性及范圍 黃芩苷對照品儲備液：精密稱取黃芩苷對照品19.02mg，置50ml量瓶中，用流動相制成每1ml含黃芩苷0.38mg的溶液，作為對照品試液。

分別精密吸取1、2、4、8、16ml于25ml棕色量瓶中，以流動相稀釋至刻度，分別精密吸取各20μl，注入液相色譜儀測定，以進樣濃度（μg/ml）對峰面積A進行線性回歸分析，得回歸方程y=5.51791×10-9x -0.0025749（r=0.9994）。表明黃芩苷濃度在15.2～243.2μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗 取同一對照品溶液（30.4μg/ml），在選定的色譜條件下，依法測定，重復(fù)進樣6次，以黃芩苷峰面積計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.87%（n=6）。

2.6重復(fù)性試驗 取同一樣品（批號140726）6份，按供試品溶液的制備方法制備，依法測定。平均含量為1.5 mg/ml，RSD為1.01%（n=6）。

2.7加樣回收試驗[2] 取已知含量的樣品（批號：20140726，含量為： 1.5 ㎎/ml，）6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品溶液（0.94 mg/ml）2ml，按供試品溶液的制備項下的方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率。

2.8穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號140726），分別在放置0、2、4、8、12、24h后，依法測定。RSD為1.09%（n=6）。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.9樣品含量測定 取供試品溶液（批號為140726，140728，140730）和對照品溶液各20？l，注入色譜儀，依法測定。每批測定6次。

3討論

3.1考察了甲醇-0.4%磷酸水（體積比47∶53）、甲醇-0.2%磷酸水（體積比47∶53）[3，4]等流動相，以甲醇-0.4%磷酸水（體積比47∶53）的保留時間較為適宜，且分離度良好，其余幾種條件黃芩苷保留時間短，分離度差。

3.2 對樣品和對照品處理進行了考察，結(jié)果表明樣品用純甲醇處理的樣品和對照品峰出現(xiàn)前沿，而用流動相處理后，峰對稱性、分離度良好。

3.3采用HPLC法測定復(fù)方金甲合劑中黃芩苷的含量，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方金甲合劑的質(zhì)量控制、穩(wěn)定性考察和有效期，可為我院復(fù)方金甲合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

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編輯/許言