非酒精性脂肪肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的標準化及評價

摘要：隨著人民生活水平的提高、生活方式的改變，非酒精性肪性肝?。╪onalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）在我國發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年增高趨勢，但迄今為止非酒精性脂肪肝的發(fā)病機制仍不明確。目前非酒精性脂肪肝大鼠模型運用廣泛，尤其是最常用的高脂飼養(yǎng)（highfattydiet，HFD）大鼠模型。為了對該模型有更進一步地了解以及更深層次把握其運用。本文主要通過查閱近10年運用此模型造模的文獻，從中收集相關(guān)造模數(shù)據(jù)等資料，得出該模型合理、常用的造模方法。

關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪肝；高脂飼養(yǎng)；大鼠模型

1 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的研究背景

非酒精性脂肪性肝是指除外酒精和其他明確的肝損害因素所致的，其發(fā)病與遺傳-環(huán)境-代謝等因素相關(guān)，但其發(fā)病機理至今尚未明確。中醫(yī)學認為該病病因與嗜食肥甘厚味，多逸少勞有關(guān)，其病位在肝，與脾、腎等臟腑密切相關(guān)。而現(xiàn)代醫(yī)學角度看，脂肪肝的發(fā)病機制主要為肝細胞中的甘油三酯、極低密度脂蛋白合成和排出不平衡形成。為了對該病進行進一步研究，研究者們針對該病設(shè)計出了多種動物模型[1]。目前，國內(nèi)外用于科學研究的非酒精性脂肪肝動物模型主要分為兩類。而本文主要通過查閱近10年運用此模型造模的文獻，從中收集相關(guān)造模數(shù)據(jù)等資料，通過分析探討，得出該模型合理、常用的造模方法，現(xiàn)綜述如下。

2 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的應用

高脂飼養(yǎng)大鼠模型誘發(fā)脂肪肝是國內(nèi)最常用的非酒精性脂肪肝模型。由于大鼠對膽固醇飼料較易耐受，因而不易形成動脈粥樣硬化病變，但其對營養(yǎng)成分改變敏感，特別是在氨基酸、膽堿等供應不足時，可出現(xiàn)肝細胞脂肪變性、壞死等營養(yǎng)缺乏表現(xiàn)，因而是實驗研究的好對象。樊麗琳，陳東風等用健康成年雄性8w齡Wistar大鼠，高脂飼料為基礎(chǔ)飼料88%，豬油10%，膽固醇2%造模，分別于第4、8w取肝組織觀察。發(fā)現(xiàn)第4w時，大鼠肝組織顯示散在肝細胞脂肪變，細胞內(nèi)見大泡形脂肪滴，但肝小葉形態(tài)完整，匯管區(qū)界限清楚，無明顯炎性細胞浸潤。第8w時，大鼠肝細胞脂肪變明顯，多為大泡性脂肪變，見部分肝細胞氣球樣變，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，同時小葉內(nèi)見局灶性肝細胞壞死，有明顯淋巴細胞浸潤[2]。因此，找到該模型的造模主線，在此基礎(chǔ)上根據(jù)需要再進一步改善，對我們更全面地掌握該模型的運用以及推廣于臨床研究具有重要意義。

3 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型文獻發(fā)現(xiàn)

經(jīng)過查閱近10年的文獻，收集運用高脂飼養(yǎng)大鼠造模非酒精脂肪肝模型相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)：①非酒精性脂肪肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的造模大鼠的類型有兩種：SD大鼠和wistar大鼠。這也是目前大鼠運用于其他實驗比較多的大鼠類型；②對于飼料的的選擇，對照組的飼料均為基礎(chǔ)飼料，雖然不同研究者所用的基礎(chǔ)飼料出自不同場地，但其與模型中所用的高脂飼料配料中的基礎(chǔ)飼料配料是統(tǒng)一的，所有對于基礎(chǔ)對照組中的基礎(chǔ)飼料，也是不存在差異的；③對于飼養(yǎng)時間，從文獻中發(fā)現(xiàn)有飼養(yǎng)3、4、5w甚至12w。這主要取決于模型所要用于的實驗所需以及高脂飼料的配方；④觀察指標和測定方法，文獻中者們觀察的主要有：①一般情況觀察如毛色、食欲動、糞便、對外界刺激的反應情況等。②病理組織學檢查肉眼觀察大鼠肝臟大體變化，并作病理切片HE染色，光鏡下觀察大鼠肝臟脂肪變性情況，其判斷標準詳見《非酒精性脂肪肝診斷標準》（2002-10中華肝病學會脂肪肝和酒精性肝病學組制定）或做蘇丹W染色和電鏡檢查了解肝細胞內(nèi)脂滴的存在情況。③血清生化指標。④肝組織甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）含量的測定等等一些列觀測方法。其中所有模型觀測指標中都存在肝臟病理組織學檢查[3]。

4 非酒精性脂肪性肝高脂飼養(yǎng)大鼠模型的主線

通過資料分析，我們對大鼠高脂飼養(yǎng)模型主線有了較為明確的認識。下面就是得出的大鼠高脂飼養(yǎng)模型造模方法的主線：選取適當周齡體重的SD大鼠或wistar雄性大鼠若干，分為正常組和模型組。給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)一周后，模型組給予高脂飼料飼養(yǎng)，高脂飼料配方為：膽固醇2%，豬油10%，基礎(chǔ)飼料88%；對照組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)8～12w，根據(jù)實驗所需可與2、4、8、12w對若干大鼠進行處理，進行大鼠肝臟病理組織學檢查和血清生化指標觀測[4-5]。以及運用相關(guān)統(tǒng)計學方法對所得數(shù)據(jù)進行分析如肝組織勻漿指標以及血清生化結(jié)果采用的單因素方差分析。有了標準化的造模方法，就能造出想要的模型。

5 結(jié)語

高脂飼養(yǎng)大鼠模型是目前為國內(nèi)外最常用的非酒精性脂肪肝動物模型，模型模擬了人類NAFLD的形成過程及病變特征，還能出現(xiàn)胰島素抵抗、代謝綜合征等全身代謝紊亂表現(xiàn)，病變有漸進性發(fā)展過程符合肝臟病變多具有漸進性發(fā)展的特點，造模停止后病變逆轉(zhuǎn)緩慢便于藥物干預研究，且該模型制作方法簡便、重復性好、價格低廉、模型復制率和造模動物成活率均高。是目前研究非酒精性脂肪肝的發(fā)病機理和篩選新藥的一種較好的動物模型。但目前讓研究者們不滿意的是該模型造模時間較長，為此研究者們也進行了各種改造，可仍然沒有沒有得出一個合理的造模方法。同時，高脂飼料配方膽固醇、豬油等物質(zhì)，致使飼料性質(zhì)發(fā)生改變，動物易出現(xiàn)厭食、腹瀉，造模所需時間長、病變輕等不足。另外，該模型還存在不能完全涵蓋人類非酒精性脂肪肝的疾病譜及發(fā)病機制的不足。因此，希望在今后的研究中研究者們更多地致力于高脂飼料配方的改良，以及探索新的造模方法，使該模型更符合人類疾病的特點及研究的需要。同時建立統(tǒng)更為統(tǒng)一穩(wěn)定的模型標準評價體系，更客觀地反映該模型的復制率、穩(wěn)定性及科研應用價值。

總之，建立更理想的非酒精性脂肪肝動物模型，為科研提供更高質(zhì)量的研究材料，有助于廣大學者對非酒精性脂肪肝進行更深入的研究，從而盡快闡明其發(fā)病機制，更好的用于對臨床該類患者進行診斷治療以及防止其轉(zhuǎn)變惡化，減輕患者的痛苦，提高患者的生活質(zhì)量。同時，也有助于人們在日常生過中合理的預防非酒精性脂肪肝的發(fā)生，做到如《素問.四氣調(diào)神大論》中說：“不治已病治未病；不治已亂治未亂”。從而對該病的預防診斷治療有更全面的把握，使人類不在受此病困擾，生活更加幸福。

參考文獻：

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[5]Alina P，Ralucaais，Vlad R.An overview of nonalcoholic steatohepatitis：past，present and puture directions[J].J Gastrointestin Liver Dis，2010，19（4）：415.

編輯/王敏