Su11248對人重組P450同工酶的體外抑制實驗研究

摘要：目的 通過體外實驗探討SU-11248對CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6酶活性的影響， 為其在臨床與其他藥物的聯(lián)合應(yīng)用提供實驗依據(jù)和理論指導(dǎo)。方法 采用BD公司的人重組P450酶抑制劑篩選試劑盒，測定Su11248對上述三種P450同工酶的體外活性抑制50%的藥物濃度（IC50）。結(jié)果 SU-11248對CYP3A4的IC50=11.85μM，對CYP2C9的IC50=7.74μM，對CYP2D6的IC50>50μM。結(jié)論 Su11248對CYP2C9酶活性有中等程度的抑制作用，對CYP3A4和CYP2D6酶活性無明顯抑制作用。

關(guān)鍵詞：Su11248；重組酶；細(xì)胞色素P450同工酶；藥物-藥物相互作用

Su11248是一種新型多靶向性的治療腫瘤的口服藥物，能選擇性地靶向某些蛋白的受體，臨床上主要用于治療晚期腎細(xì)胞癌、肺癌和腦膜瘤等，是目前腫瘤化療研究的熱點藥物之一[1～3]。本實驗利用人重組CYP450酶，在體外水平上研究Su11258對CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6活性的影響，為Su11248在臨床應(yīng)用中可能出現(xiàn)的藥物-藥物相互作用提供實驗依據(jù)和理論指導(dǎo)。

1資料與方法

1.1一般資料 Su11248（購自biocompound公司），用二甲亞砜（DMSO）溶解， -20℃避光保存?zhèn)溆?。人重組CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6酶抑制劑篩選試劑盒（購自BD公司），-80℃避光保存?zhèn)溆?。BioTek檢測系統(tǒng)（SYNERCYTM4）。

1.2方法

1.2.1酶促反應(yīng)體系 反應(yīng)體系由NADPH 發(fā)生系統(tǒng)（NADP+、 Glucose-6-Phosphate、 Magnesium Chloride Hexahydrate）、KPO4（pH 7.4）、Tris （pH 7.5）、陽性對照和底物組成。CYP3A4的底物為7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素（7-Benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin ，BFC），CYP2C9的底物為3H-1，2-二氫-2-（4-甲基苯胺基）甲基-1-吡咯里嗪酮（3H-1，2-dihydro-2-（4-methyl-phenylamino） methyl-1-pyrrolizinone ，SFZ），CYP2D6的底物為3-[2-（N，N-二乙基-N-甲氨基）乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素（3-[2-（N，N-diethyl-N-methylamino）ethyl]-7-methoxy-4-methylcoumarin，AMMC）右美沙芬。三種酶的陽性化合物分別為酮康唑（CYP3A4）、磺胺苯吡唑（CYP2C9）和奎尼丁（CYP2D6）。Su11248的實驗濃度最大值為50μM，按照3：1濃度稀釋得到8個濃度組，分別為50μM、16.67μM、5.56μM、1.85μM、0.62μM、0.21μM、0.07μM和0.02μM，每個濃度設(shè)置3復(fù)孔。

1.2.2 IC50值測定：按照BD公司的人重組P450酶抑制劑篩選試劑盒說明書操作。其中，CYP3A4和CYP2C9的檢測波長為（400nm/528nm），CYP2D6 的檢測波長為400nm/460nm。根據(jù)酶標(biāo)儀檢測得到數(shù)據(jù)計算相應(yīng)抑制率，抑制率=（受試孔值-空白孔值）/（對照孔值-空白孔值），最后利用Graphpad Prism計算IC50值。

1.3結(jié)果評價 根據(jù)IC50值，判斷Su11248對相關(guān)重組酶的影響。當(dāng)IC50 >10 μM時，抑制作用較弱，1 μM < IC50< 10 μM 屬于中等程度抑制；IC50< 1 μM 時，抑制作用較強(qiáng)。

2結(jié)果

2.1 Su11248對CYP3A4活性的影響：酮康唑（ketoconazole）對CYP3A4有顯著抑制作用且抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)，說明利用該實驗體系進(jìn)行CYP3A4活性抑制實驗方法可行。Su11248對CYP3A4活性抑制的IC50=11.85μM，IC50 >10 μM，說明Su11248僅能較弱地抑制CYP2C9酶活性。

Fig.1 Su1248 對CYP3A4的體外抑制作用

（A）酮康唑（ketoconazole）（B）Su11248

2.2 Su11248對CYP2C9活性的影響：磺胺苯吡唑（sulfaphenazolum）對CYP2C9有顯著抑制作用且抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)，說明利用該實驗體系進(jìn)行CYP2C9活性抑制實驗方法可行。Su11248對CYP2C9活性抑制的IC50=7.74μM，其1 μM < IC50< 10 μM ，說明Su11248能夠中等程度地抑制CYP2C9酶活性。

Fig.2 Su1248 對CYP2C9的體外抑制作用

（A）磺胺苯吡唑（sulfaphenazolum）（B）Su11248

2.3 Su11248對CYP2D6活性的影響 奎尼?。╭uinidine）對CYP2D6有顯著抑制作用且抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)，說明利用該實驗體系進(jìn)行CYP2D6活性抑制實驗方法可行。Su11248對CYP2D6活性抑制的IC50>50μM，說明Su11248基本不抑制CYP2D6活性。

Fig.3 Su1248 對CYP2D6的體外抑制作用

（A）奎尼丁（quinidine） （B）Su11248

3討論

人類細(xì)胞色素P450（Cytochrome P450，CYPs）的編碼基因有57個，共18個家族和42個亞型[4]。CYPs主要表達(dá)于肝臟，在小腸、胰腺、腦、肺、腎、骨髓、皮膚等組織以及腫瘤組織，其主要功能是通過I相生物轉(zhuǎn)化，對體內(nèi)分子量較?。?2-1203Dd）的化合物進(jìn)行代謝，以利于化合物的排出。因此，CYP450s在調(diào)節(jié)機(jī)體與外界環(huán)境的相互作用以及保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中起重要作用。人類肝細(xì)胞中CYP450以CYP1、CYP2和CYP3為主， CYP3A4是CYP酶家族中含量最大的亞家族，參與大約38個類別共150多種藥物（約占全部藥物50%）的代謝， CYP2D6和CYP2C9參與了大約40%的藥物代謝。因此，研究CYP450的功能和新化學(xué)實體的代謝，為安全有效的用藥、個體化治療、藥物研發(fā)等提供科學(xué)的基礎(chǔ)。目前歐美各國已經(jīng)把CYP450s及其同工酶測定用于新藥的篩選及安全性評價[5]。本研究利用基因重組的P450 酶系探討Su11248對CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6的影響。結(jié)果顯示，Su11248對CYP3A4具有較弱的抑制作用，對CYP2C9具有較強(qiáng)的抑制作用，對CYP2D6無明顯抑制作用。（SU-11248對CYP2C9活力有抑制作用，對CYP3A4和CYP2D6酶基本沒有抑制作用）。本研究對于預(yù)防和減輕Su11248與其它藥物間的相互作用，最大限度的提高其臨床用藥的有效性和安全性及臨床合理用藥具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]Demetri GD.Efficacy and safety of sunitinib in patients with advanced gastrointestinal stromal tumour after failure of imatinib： a randomised controlled trial[J].Lancet，2006，368 （9544）： 1329-1338.

[2]Motzer RJ et al. Sunitinib versus interferon alfa in metastatic renal-cell carcinoma[J].N Engl J Med 2007， 356 （2）： 115-124.

[3]Hui K Gan.Sunitinib in solid tumors[J].Expert Opin Investig Drugs，2009， 18 （6）： 821-834.

[4]張嫡群等.藥物代謝在新藥研究中的作用.[J]中國藥學(xué)雜志，2006，41（11）：810-814.

[5]European Medicines Agency （EMA） guideline on the investigation of drug interactions [J].DDI，2013.

編輯/許言