HE常規(guī)染色技術(shù)對(duì)鼻咽癌小組織處理分析

摘要：目的 分析HE常規(guī)染色技術(shù)對(duì)鼻咽癌小組織的處理。方法 采用本院自2010年10月～2012年10月收治的60例鼻咽癌患者，采取60例患者鼻咽癌小組織進(jìn)行標(biāo)本處理，將這60例患者按照隨機(jī)分配的原則分成觀察組和對(duì)照組兩組，每組各30例患者，對(duì)觀察組采用10%中性福爾馬林固定，固定時(shí)間為48h，然后進(jìn)行脫水、包埋、切片、HE染色。對(duì)對(duì)照組采用同等比例的中性福爾馬林進(jìn)行固定，時(shí)間從48h縮減到7h，然后再進(jìn)行脫水、包埋、切片、HE染色。結(jié)果 觀察組的切片完整，厚薄均勻，無褶皺，無刀痕，染色核漿分明，透明潔凈，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)清晰。在對(duì)照組的鼻咽癌小組織切片中，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核之間清晰度不高，而且切片不完整，厚薄不均勻，染色也不規(guī)則。結(jié)論 鼻咽癌小組織送檢必須確保送檢組織質(zhì)量，檢驗(yàn)人員要規(guī)范行為，嚴(yán)格按照科學(xué)的染色技術(shù)進(jìn)行染色，從而為鼻咽癌的診斷提供科學(xué)保障。

關(guān)鍵詞：HE常規(guī)染色；鼻咽癌小組織；處理

鼻咽癌是我國當(dāng)前臨床中常見的惡性腫瘤之一，主要發(fā)生在鼻咽部咽隱處，其病灶可呈現(xiàn)出多種形態(tài)。從我院當(dāng)前臨床資料中可以得知，造成鼻咽癌的主要因素有遺傳和病毒感染兩種因素。鼻咽癌的臨床表現(xiàn)主要是鼻血涕、鼻塞、膿樣涕等癥狀。鼻咽癌病給鼻咽癌患者以及患者家屬都造成了極大的影響，如果不能及時(shí)的治療，將會(huì)危及到患者的生命。鼻咽癌疾病，其早期無明顯的病癥，因此常不會(huì)引起人們的注意，從而造成鼻咽癌發(fā)展成晚期。此次研究就鼻咽癌的診斷進(jìn)行了相關(guān)的分析，采用鼻咽癌小組織進(jìn)行樣本送檢，其對(duì)象為我院自2010年10月～2012年10月收治的60例鼻咽織患者，現(xiàn)將有關(guān)情況匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 此次研究采取的是本院自2010年10月～2012年10月收治的60例鼻咽癌患者，采用耳鼻喉科送檢活體小組織標(biāo)本，將這60例患者隨機(jī)分成觀察組和對(duì)照組兩組，每組各30例，在觀察組患者中，男性患者24例，女性患者6例，男女比例為4：1，年齡為27～68歲，平均年齡為（47±1.5）歲。在對(duì)照組中的30例患者中，男性患者與女性患者分別為28例、2例，男女比例為14：1，年齡為26～72歲，平均年齡為（49±1.5）歲。

1.2方法 送檢鼻咽癌小組織標(biāo)本分組進(jìn)行檢查，首先對(duì)觀察組采用10%中性福爾馬林固定，固定時(shí)間為48h，然后進(jìn)行常規(guī)脫水、包埋、切片、HE染色。再對(duì)對(duì)照組采用同等比例的中性福爾馬林固定，固定時(shí)間為6～7h，然后再進(jìn)行常規(guī)脫水、包埋、切片、HE染色。

2 結(jié)果

觀察組的切片完整，厚薄均勻，厚度為4～6μm，無褶皺，無刀痕，染色核漿分明，透明潔凈，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)清晰。在對(duì)照組的鼻咽癌小組織切片中，小組織細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核之間清晰度不高，而且切片不完整，厚薄不均勻，染色也不規(guī)則。

3 討論

在我國當(dāng)前臨床疾病中，鼻咽癌是一種常見的惡性疾病。鼻咽癌主要發(fā)生在男性，且黃種人居多，而我國則是鼻咽癌高發(fā)的國家之一[1]。近年來，本院接受治療的鼻咽癌患者不斷增加，鼻咽癌的診斷通常采用活體組織標(biāo)本。當(dāng)臨床醫(yī)生取活體標(biāo)本送檢時(shí)，由于鼻咽癌發(fā)病部位的特殊性，取材過淺就會(huì)取不到病灶，取材過深就會(huì)造成傷口過大，不僅對(duì)患者的健康造成很大影響，同時(shí)取出來的結(jié)果對(duì)病理制片及診斷造成困擾。

HE常規(guī)染色技術(shù)又稱蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining），在鼻咽癌臨床診斷中，對(duì)鼻咽癌小組織染色常用的液體就是蘇木精和伊紅染液。蘇木精染液的作用主要是通過化學(xué)作用將鼻咽癌小組織細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體染成紫藍(lán)色。為了中和蘇木精染色的堿性，同時(shí)利用伊紅這種酸性染料，將鼻咽癌小組織細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞外基質(zhì)染成紅色，從而與蘇木精的染色效果形成對(duì)比。在伊紅染色過程中，其著色情況與鼻咽癌小組織的種類有關(guān)，也隨其病理變化而改變。HE染色法是我國臨床組織學(xué)、病理學(xué)中使用最為廣泛的一種技術(shù)方法。將鼻咽癌小組織標(biāo)本進(jìn)行蘇木精染色后，通過觀察可以發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌小組織內(nèi)的細(xì)胞核呈現(xiàn)出藍(lán)色，此時(shí)再用鹽酸酒精進(jìn)行分化，經(jīng)過處理后，在顯微鏡下，細(xì)胞核顯示為深藍(lán)色。當(dāng)小組織標(biāo)本分化后，再利用伊紅進(jìn)行染色，直至細(xì)胞漿呈現(xiàn)出粉紅色。鼻咽癌小組織通過HE常規(guī)染色后期細(xì)胞成分與病變將逐漸顯現(xiàn)出來，為鼻咽癌的診斷提供精確的數(shù)據(jù)。HE常規(guī)染色液配置為取0.8g的伊紅酒精溶液，加少量蒸餾水溶解后，再加冰醋酸直至漿糊狀，以濾紙過濾，將濾渣放在烘烤箱中烤干，再以95%酒精100ml溶解[2]。蘇木素染液配方為蘇木精6g、乙醇100ml、蒸餾水2100ml、冰醋酸130ml、碘酸鈉1.3g硫酸鋁鉀145g，甘油950ml。先利用無水乙醇將小組織進(jìn)行脫水，再將蘇木精染液與乙醇進(jìn)行互溶，當(dāng)兩種液體達(dá)到飽和后，再將事先已經(jīng)與蒸餾水溶合的硫酸鋁鉀進(jìn)行混合，觀察混合過程中發(fā)生的變化。常規(guī)HE染色步驟為：①二甲苯（Ⅰ）5～10min；②二甲苯（Ⅱ）5～10min；③100%乙醇1～3min；④90%乙醇1～3min；⑤80%乙醇 1min；⑥蒸餾水3min；⑦蘇木精液染色 10min；⑧流水稍洗去蘇木精液1～3s；⑨1%鹽酸乙醇1～3s；⑩稍水洗10～30s；〇11促藍(lán)液返藍(lán)10～30s；〇12流水沖洗 10～15min；〇13蒸餾水過洗 1～2s；〇14 0.5%曙紅液染色1～3min；〇15蒸餾水稍洗 1～2s；〇1680%乙醇稍洗1～2s；〇1795%乙醇（Ⅰ） 3～5min；〇1895%乙醇（Ⅱ） 3～5min；〇19無水乙醇5～10min；〇20無水乙醇5～10min；〇21二甲苯（Ⅰ）3～5min；〇22二甲苯（Ⅱ）2～5min；〇23二甲苯（Ⅲ）3～5min；〇24中性樹膠封固。

對(duì)對(duì)照組采用同等比例的中性福爾馬林進(jìn)行固定，時(shí)間從48h縮減到7h，然后再進(jìn)行脫水、包埋、切片、HE染色，其制片出來的蠟塊表面粗糙，小組織細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核之間清晰度不高，而且切片不完整，厚薄不均勻，染色也不規(guī)則[3]。為此研究人員在此基礎(chǔ)上進(jìn)行詳細(xì)的分析，并對(duì)制片過程進(jìn)行總結(jié)發(fā)現(xiàn)，切片過厚，蘇木精染色過深，從而造成小組織標(biāo)本不理想。同時(shí)研究人員在時(shí)間上適當(dāng)?shù)难娱L，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)，最終確定中性福爾馬林固定的時(shí)間為48h最為恰當(dāng)，然后進(jìn)行常規(guī)脫水、包埋、切片、HE染色[4]。對(duì)鼻咽癌小組織進(jìn)行脫水就是利用化學(xué)試劑浸泡組織將小組織內(nèi)的水分置換出來，在此次研究中使用的脫水液為乙醇。在HE常規(guī)染色處理后，鼻咽癌小組織蠟塊切片完整，厚薄均勻，厚度為4～6μm，無褶皺，無刀痕，染色核漿分明，透明潔凈，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)清晰[5]。

通過此次研究，HE常規(guī)染色技術(shù)在臨床組織學(xué)、病理學(xué)當(dāng)中有著積極的作用，鼻咽癌疾病對(duì)患者的危害極大，對(duì)鼻咽癌的診斷必須做到準(zhǔn)確無誤。此次組織蠟塊切片厚度適中，著色均勻，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)清晰可見，對(duì)鼻咽癌的診斷提供了良好病理依據(jù)，從而有利于患者的治療[6]。

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編輯/哈濤