伊柔抗皺美白精華素延緩裸鼠皮膚衰老作用研究

摘 要：目的：探討伊柔抗皺美白精華素延緩老鼠皮膚衰老的作用機(jī)制。方法：采用D-半乳糖對裸鼠頸背部皮下連續(xù)注射，并結(jié)合長波長和短波長紫外線照射裸鼠皮膚，建造裸鼠皮膚亞急性衰老及光老化動物模型，測定皮膚組織中與皺紋產(chǎn)生的幾種生化指標(biāo)：超氧化物歧化酶（SOD）的活性、丙二醛（MDA）以及羥脯氨酸（HYP）含量。結(jié)果：正常組、對照組和實(shí)驗(yàn)組與模型組裸鼠皮膚比較，皮膚組織中的超氧化物歧化酶（SOD）活力、HYP的含量明顯高于模型組，而丙二醛（MDA）的含量明顯低于模型組。結(jié)論：伊柔抗皺美白精華素具有延緩裸皮膚衰老的作用。

關(guān)鍵詞： 伊柔抗皺美白精華素；皮膚衰老；SOD；MDA；HYP

衰老最直觀的變化即為皮膚晦暗、出現(xiàn)皺紋、色素沉著等，不僅有損美容，而且同許多皮膚病如脂溢性角化、日光性角化、基底細(xì)胞癌等的發(fā)生有著病因?qū)W的關(guān)系。因此，預(yù)防和延緩皮膚衰老已成為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用D-半乳糖注射和光照聯(lián)用，建立亞急性皮膚衰老和光老化模型，對裸鼠皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、羥脯氨酸(HYP)含量、丙二醛(MDA)含量進(jìn)行檢測，探討伊柔抗皺美白精華素延緩皮膚衰老的作用機(jī)制，為其抗衰老作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[1~2]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試藥

D-半乳糖（上海聚源生物試廠提供 批號：090902）； SOD試劑盒(南京建成生物研究所 批號：091117 )；MDA試劑盒（南京建成生物研究所 批號;091117）；HYP試劑盒（南京建成生物研究所 批號：091121）；羽西凝無痕精華素（9F197）；伊柔抗皺美白精華素（第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院提供 批號：091103）；生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司號;091012）其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 動物

健康1月齡雄性裸鼠40只，體重14±2g（中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證號：SCXK-(軍)2007-004）。

1.3 儀器

超聲粉碎儀（VCX750型美國SONICS）；低溫離心機(jī)（C5-15R型 美國BECKMAN）；低溫冰箱(NU-6352E型 日本NUAIR)；紫外分光光度計(jì)（DU-800型 美國BECKMAN）；電子天平（BP110型 德國Sartorius）；高溫試驗(yàn)箱（WG-01型 重慶萬達(dá)儀器有限公司）；電熱恒溫水溫箱（BHW-2型 北京醫(yī)療設(shè)備廠）；紫外線強(qiáng)度計(jì)（KUV254型 武漢康威達(dá)衛(wèi)生保健有限公司）；長波長和短波長紫外燈各2支。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組、給藥及制造模型[3]

每組10只，隨機(jī)分為4組：①正常組：正常條件飼養(yǎng)，不做注射和光照處理。②模型組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖（1000mg/kg），并結(jié)合長波長（365nm）和短波長（254nm）紫外線照射背部皮膚，長波長紫外線累積照射強(qiáng)度為259.5J/㎝2，短波長累積照射強(qiáng)度6.482J/㎝2。③對照組：注射和光照同模型組，在注射和光照的基礎(chǔ)上再向其背部涂抹羽西凝無痕精華素，每日2次，0.2g/次。④實(shí)驗(yàn)組：注射和光照同模型組，在注射和光照的基礎(chǔ)上再向其背部涂抹伊柔皺抗皺美白精華素，每日2次，0.2g/次。

連續(xù)注射和光照6周，待模型組行動遲緩，背部皺紋明顯，呈現(xiàn)明顯的衰老體征，停藥2天后處死取皮進(jìn)行各項(xiàng)生化指標(biāo)的測定，并對四組裸鼠體重及臟器質(zhì)量進(jìn)行比較。

2.2 裸鼠皮膚組織勻漿（10%）的制備[4]-【6】

取裸鼠背部皮膚組織塊1g左右，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，出去皮下脂肪和其他結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織9倍重量的生理鹽水，去2/3倒入裝有組織塊的燒研缽中，眼科小剪剪碎后，研磨15分鐘后將粗勻漿倒入到小燒杯內(nèi)，用剩余1/3的生理鹽水沖洗研缽，用超聲粉碎儀（強(qiáng)度25%）冰浴中連續(xù)粉碎3分鐘，然后反復(fù)凍融3次，使細(xì)胞內(nèi)容物完全游離于液相中。將組織勻漿在離心機(jī)中3500r/min離心15分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2.3 皮膚組織勻漿中生化指標(biāo)的測定

2.3.1 皮膚組織勻漿中SOD活力、（HYP）含量、MDA含量的測定

參照南京建成生物工程公司SOD、HYP和MDA試劑盒說明書方法測定，單位分別為U.mL-1、g.mL-1 和 nmol.mL-1。

2.3.2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，正態(tài)性檢驗(yàn)，采用方差分析計(jì)算資料以X±s表示，以P﹤0.05，P﹤0.01表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

裸鼠皮膚組織中生化指標(biāo)的測定結(jié)果表1。

表 1裸鼠皮膚組織中生化指標(biāo)的測定結(jié)果

（ n=10X±s ）

從表1中SOD數(shù)據(jù)顯示，正常組和模型組相比，模型組裸鼠皮膚組織中SOD活力明顯降低，具有顯著性差異（P﹤0.01），提示皮膚自由基防護(hù)功能下降，對照組和實(shí)驗(yàn)組與正常組相比無顯著性差異（P﹥0.01）；HYP檢測數(shù)據(jù)顯示，模型組比正常組裸鼠皮膚組織中的羥脯氨酸含量顯著減少（P﹤0.05），而對照組和實(shí)驗(yàn)組與模型組相比，裸鼠皮膚組織中羥脯氨酸含量顯著增加（P﹤0.01）；MDA檢測數(shù)據(jù)顯示，模型組與正常組比較有極顯著性差異（P﹤0.01）、對照組、實(shí)驗(yàn)組與正常組比較無顯著性差異(P﹥0.05)，說明皮膚脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物堆積增加。

4討論

隨著年齡增長，皮膚衰老是人體老化的外在表現(xiàn)，體內(nèi)抗氧化酶類逐漸減少，皮膚防護(hù)功能減退或發(fā)生障礙，自由基累積性增加，造成皮膚內(nèi)各種大分子損傷，導(dǎo)致皮膚的衰老和病變。HYP是真皮內(nèi)含量豐富而且比較穩(wěn)定的氨基酸，是膠原蛋白特有的氨基酸之一，其含量可以間接反映出真皮內(nèi)膠原蛋白量的變化，而膠原含量的變化可以提示皮膚的衰老程度。故可作為判定皮膚衰老程度的一個特殊而敏感的指標(biāo) ；SOD是一種生物活性蛋白質(zhì)，在抗衰老防御物質(zhì)中，可阻斷各種色斑、粉刺、皺紋的發(fā)生與發(fā)展，是最有效的抗氧化劑和自由基清除劑；MDA是脂質(zhì)過氧，其含量可以間接反映自由基的產(chǎn)生情況和機(jī)體組織細(xì)胞的過氧化程度。紫外線照射會造成小鼠皮膚組織SOD活性顯著下降，HYP含量下降及MDA含量增加，可以造成裸鼠皮膚光老化。

結(jié)果顯示：D-半乳糖注射和光照聯(lián)用所致的裸鼠皮膚亞急性衰老與光老化模型建造可靠，實(shí)驗(yàn)組與對照組涂抹供試品后能提高裸鼠皮膚組織中SOD活性和HYP含量，并能降低MDA含量。本實(shí)驗(yàn)提示：抗皺美白精華素有延緩皮膚衰老化作用，分析其作用機(jī)制主要是通過提高SOD活性和羥脯氨酸的含量，減少自由基代謝產(chǎn)物的堆積等方面的而發(fā)揮協(xié)同作用。

參考文獻(xiàn)：

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