胡楊花序乙醇提取物體內抗氧化活性研究

汪河濱，蘇 華，張 博

（省部共建國家重點實驗室培育基地 新疆生產建設兵團塔里木盆地生物資源保護與利用重點實驗室，新疆 阿拉爾 843300）

胡楊（Populus euphraticaOliv.）別名梧桐、異葉楊，屬于楊柳科（Salicaceae）楊屬（Populus）胡楊亞屬木本植物，是自白堊紀起源并保存下來的古老樹種，也是楊屬中最古老的一個種。

胡楊研究現(xiàn)狀主要涉及其獨特的形狀、起源、分類歸屬等同題，以后逐漸擴展到其他方面，取得了一定的研究成果，近年來，胡楊潛在的基因資源價值和在造紙等工業(yè)方面的用途也逐漸受到有關人士的關注。

本研究以胡楊花序為研究材料，初步研究胡楊花序乙醇提取物對小鼠血清和肝勻漿中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量的影響，以初步揭示胡楊花序抗氧化能力，因此對其進行研究和開發(fā)有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胡楊花序：實驗所用胡楊花序采自新疆阿拉爾市塔里木大學校內及周邊地區(qū)，干燥后粉碎，用乙醇浸泡提取3次，提取液45 ℃減壓濃縮成浸膏，干燥后待用。

實驗動物：小鼠，雌、雄各半，6～8周齡，體質量（20±2）g，購自塔里木大學動物科技學院實驗動物中心，實驗動物中心內恒溫18～22 ℃，恒濕50%～80%，自由攝入無菌水和滅菌標準詞料。

劑量選擇：試驗設胡楊花序乙醇提取物低劑量組（165 mg/kg BW）、胡楊花序中劑量組（330 mg/kg BW）、胡楊花序高劑量組（660 mg/kg BW）和空白對照組（生理鹽水灌胃）。

試劑及試劑盒：冰醋酸（分析純，純度＞99%）：上?；瘜W試劑公司；無水乙醇（純度＞99%）：洛陽市化學試劑廠；生理鹽水（0.9%、0.86%）：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；雙蒸水實驗室自制；超氧化物歧化酶（SOD）測試盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

DZF6050MBE型真空干燥箱：上海博迅實業(yè)有限公司；BS124S電子天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；SK3200H超聲波清洗機：上?？茖С晝x器公司；DK-8D數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市醫(yī)療儀器廠；T6新世紀紫外-可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司；TGLL-18B臺式高速冷凍離心機：江蘇太倉醫(yī)療器械廠；FSH-2A型可調高速勻漿機：江蘇金元市醫(yī)療儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 試驗設計

小鼠按性別隨機分為4組，每個試驗組10只小鼠，雌雄各半，分別用低、中、高三個劑量組的胡楊花序乙醇提取物和空白對照組，給試驗小鼠每日每只灌胃胡楊花序提取物一次，飼喂普通飼料，30d后處死，檢測小鼠血清中的SOD的活性以及肝組織中MDA的含量進行分析測定，并比較各處理對小鼠血清中的SOD的活性以及肝組織中MDA的含量的影響。

1.3.2 試驗方法

小白鼠的分組灌胃：小鼠按性別隨機分為4組，每個試驗組10只小鼠，雌雄各半，分別用低、中、高三個劑量組的乙醇提取物和空白對照組，給試驗小鼠每日每只灌胃胡楊花序一次，飼喂普通飼料，30 d后將小鼠摘眼球取血液，并制備肝組織勻漿，檢測各項指標。

SOD活力檢測：血清凝固后4 ℃，3 000 r/min離心10 min，輕取血清20 μL，按照SOD檢測試劑盒說明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37 ℃恒溫水浴鍋加熱40 min，加入顯色劑，混勻，室溫靜置10 min，于波長550 nm處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調零，比色。測定測試管及對照管的吸光度（OD550nm）值。

取肝組織樣品4 μL，3 000 r/min離心10 min，按照SOD檢測試劑盒說明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37 ℃恒溫水浴鍋加熱40 min，加入顯色劑，混勻，室溫靜置10min，于波長550 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調零，進行比色。測定測試管及對照管的吸光度OD550nm值。

活力定義：每毫升反應液中SOD（MDA）抑制率達到50%時所對應的SOD（MDA）量為一個亞硝酸鹽單位，U。

SOD活力的計算：

血清中SOD含量=（對照管吸光度值-測定管吸光度值）×反應體系的稀釋倍數(shù)/（對照管吸光度值×50%）

組織中SOD含量=（對照管吸光度值-測定管吸光度值）×反應體系的稀釋倍數(shù)/（對照管吸光度值×50%×蛋白含量）

（SOD活力的表示單位：U/mg）

組織勻漿蛋白含量的測定：準確稱取待測肝組織的重量，按體重體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，1 000 r/min～3 000 r/min離心10 min，然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%組織勻漿，待測。

取肝組織勻漿20 μL，按照考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒說明書的要求，依次加入各種試劑，混勻，靜置10 min，于波長595 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調零，進行比色。測定各管的OD值。

MDA含量的檢測：血清中MDA含量的測定：取血清15 μL，按照丙二醛（MDA）測定試劑盒說明書的要求，依次加入各種試劑，混勻器混勻，試管口用封口膜扎緊，用針頭刺一小孔，95 ℃水浴40 min，取出后流水冷卻，然后4 000 r/min離心10min，取上清液，于波長532 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調零，進行比色。測定各管的OD532nm值。

肝組織勻漿中MDA含量的測定：取肝組織勻漿20 μL，按照丙二醛（MDA）測定試劑盒說明書的要求，依次加入各種試劑，混勻器混勻，試管口用封口膜扎緊，用針頭刺一小孔，95 ℃水浴40 min，取出后流水冷卻，然后4 000 r/min離心10 min，取上清液，于波長532 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調零，進行比色。測定各管的OD值[5-7]。

2 結果與分析

2.1 胡楊花序對血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

表1 胡楊花序對血清中超氧化物歧化酶活性的影響Table 1 Effect of P.euphratica inflorescence on SOD content in mice serum（mean±sd）

由表1可知，實驗組與對照組間血清SOD活力都有顯著差異（F=165，df=3，P＜0.05），中劑量組和高劑量組的血清SOD活力均顯著高于生理鹽水對照組，但3個實驗組間的血清SOD活力沒有達到顯著差異。

2.2 胡楊花序對血清中丙二醛（MDA）含量的影響

表2 胡楊花序對血清中丙二醛含量的影響Table 2 Effect of P.euphratica inflorescence on MDA content in mice serum（mean±sd）

由表2可知，實驗組與生理鹽水對照組間血清中MDA含量都有顯著差異（F=137.37，df=3，P＜0.05，）中劑量組與高劑量組均顯著高于與低劑量組（P＜0.05）。

2.3 胡楊花序對小鼠肝組織中SOD活性的影響

表3 胡楊花序對小鼠肝組織中SOD活性的影響Table 3 Effect of P.euphratica inflorescence on SOD content in hepatic tissue of mice（mean±sd）

由表3可知，實驗組與對照組間肝臟中SOD活力都有顯著差異（F=304.25，df=3，P＜0.05），中劑量組和高劑量組的肝臟SOD活力均顯著高于生理鹽水對照組，但3個實驗組間的肝臟SOD活力沒有達到顯著差異。

2.4 胡楊花序對小鼠肝組織中MDA含量的影響

表4 胡楊花序對小鼠肝組織中MDA 含量的影響Table 4 Effect of P.euphratica inflorescence on MDA content in hepatic tissue of mice（mean±sd）

由表4可知，實驗組與生理鹽水對照組間肝臟中MDA含量都有顯著差異（F=129，df=3，P＜0.05，）中劑量組與高劑量組均顯著高于與低劑量組，但這3個實驗組肝組織MDA含量均顯著低于生理鹽水對照組。

3 結論

胡楊花序提取物可以顯著增加血清及肝組織蛋白含量，降低血清及組織MDA含量，提高小鼠的血清、肝組織SOD活力，提高老齡小鼠體內抗氧化能力。

胡楊花序屬天然植物，提取物提取過程中環(huán)保無污染，無細胞毒性及其他副作用，因此對其進行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對保障機體健康、預防疾病有重要意義。

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