改變胱抑素C實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響分析

張雙元

[摘要] 目的 檢驗(yàn)通過(guò)適當(dāng)改變胱抑素C試驗(yàn)參數(shù)對(duì)試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。方法 收集覆蓋試劑盒線性范圍的標(biāo)本在改變參數(shù)前后分別檢驗(yàn)一次，并對(duì)前后兩次結(jié)果分別進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)和線性相關(guān)與回歸分析，對(duì)常數(shù)a與斜率b進(jìn)行單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)前后結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，t=1.81，P >0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，線性回歸方程為Y=0.9981X-0.0364，r=0.9982，對(duì)常數(shù)a斜率b進(jìn)行單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)結(jié)果為ta=0.70633< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；tb=0.151802< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 胱抑素C適當(dāng)改變?cè)囼?yàn)參數(shù)前后對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)影響，不影響試劑盒線性。

[關(guān)鍵詞] 胱抑素C；改變?cè)囼?yàn)參數(shù)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）10-0054-02

胱抑素C 是一種小分子蛋白[1]，也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，其血中濃度由腎小球?yàn)V過(guò)決定，而不依賴任何外來(lái)因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球?yàn)V過(guò)率變化的理想同源性標(biāo)志物[2，3]。胱抑素C 能夠自由通過(guò)腎小球， 并且由腎小管重吸收后降解，生理情況下幾乎沒(méi)有影響胱抑素C穩(wěn)定的因素。胱抑素具有產(chǎn)生速率恒定、只能通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)排泄，在腎小管內(nèi)完全被重吸收降解[4]，這一特點(diǎn)使得血清胱抑素 C成為引人注目的腎臟腎小球?yàn)V過(guò)率的替代標(biāo)志物[5，6]，是衡量早期腎功能損害的重要指標(biāo)[7-10]。最近本科室也開(kāi)展了此項(xiàng)目，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)R1試劑消耗多R2試劑消耗少，隨著累積檢驗(yàn)次數(shù)的增加，這種現(xiàn)象更加明顯，造成試劑大量浪費(fèi)，本研究就是通過(guò)改變?cè)噭?shí)驗(yàn)參數(shù)使試劑R1與試劑R2消耗量相互匹配，并對(duì)改變參數(shù)前后的標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1材料與方法

1.1檢測(cè)系統(tǒng)

奧林巴斯AU640全自動(dòng)生化分析儀，某膠乳增強(qiáng)免疫比濁胱抑素C試劑盒。原試劑參數(shù)，R1 250 μL，R2 50 μL、吐水10 μL；改為R1 220 μL，R2 50 μL、吐水10 μL。實(shí)驗(yàn)所需所有試劑均在有效期內(nèi)，在改變?cè)囼?yàn)參數(shù)前后分別定標(biāo)，質(zhì)控在控。

1.2 樣本收集與處理

收集2013年5月22日～6月18日在試劑線性范圍內(nèi)低、中、高濃度標(biāo)本血清24例放置于超低溫冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆?，?shí)驗(yàn)時(shí)取出室溫復(fù)溶，然后對(duì)24例標(biāo)本分別在改變?cè)噭﹨?shù)前后各測(cè)試一次。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

通過(guò)EXCEL2003首先對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)；再以改變參數(shù)前數(shù)據(jù)為橫坐標(biāo)，改變參數(shù)后數(shù)據(jù)為縱坐標(biāo)，繪制散點(diǎn)圖，并得到回歸方程與回歸系數(shù)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法驗(yàn)證回歸曲線與Y=X的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料以（x±s）表示，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)方法采用配對(duì)t檢驗(yàn)和直線相關(guān)線性與回歸分析，單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，P <0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

改變參數(shù)前實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（3.66±2.01），改變參數(shù)后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（3.60±1.99）。改變參數(shù)前后實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)比較，t=1.81，P=0.08 >0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。線性相關(guān)與回歸分析：實(shí)驗(yàn)前后結(jié)果呈正相關(guān)R2=0.9966，r=0.9982接近1，回歸方程Y=0.9981X-0.0364。如圖1。對(duì)-0.0364（a）與0，0.9981（b）與1進(jìn)行單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，ta=0.706330.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；tb=0.1518020.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 改變參數(shù)前實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

3討論

首先在EXCEL2003工作表中對(duì)改變參數(shù)前后數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn)前后數(shù)據(jù)分左右各列一列，然后選擇函數(shù)TTEST，分別將兩列數(shù)據(jù)代入，參數(shù)選為雙尾配對(duì)t檢驗(yàn)得到結(jié)果為P=0.08，因此實(shí)驗(yàn)前后結(jié)果沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，利用TINV函數(shù)得到t值，分別將概率值（P=0.08）、自由度（d=23）輸入得到結(jié)果t=1.81。然后進(jìn)行線性相關(guān)與回歸分析，選中兩列數(shù)據(jù)點(diǎn)擊插入選擇圖表選擇XY散點(diǎn)圖點(diǎn)擊完成，散點(diǎn)圖就會(huì)出現(xiàn)在工作表中，選中散點(diǎn)圖在點(diǎn)擊圖表選擇添加趨勢(shì)線，選擇線性，點(diǎn)擊選項(xiàng)選擇顯示公式、顯示R平方值，點(diǎn)擊確定，就會(huì)出現(xiàn)圖一結(jié)果，然后對(duì)Y= 0.9981X-0.0364中的系數(shù)（b）與常數(shù)（a）進(jìn)行單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。

本研究在改變?cè)囼?yàn)參數(shù)過(guò)程中減少了R1 試劑用量，從而使總反應(yīng)體積變小，使抗體濃度相對(duì)增加可能出現(xiàn)免疫反應(yīng)中的“前帶現(xiàn)象”，主要原因可能是抗原抗體比例不合適，而產(chǎn)生抑制反應(yīng)現(xiàn)象，使反應(yīng)信號(hào)弱化，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)嚴(yán)重誤差。因此通過(guò)收集高、中、低濃度的胱抑素C標(biāo)本，在改變實(shí)驗(yàn)參數(shù)前后分別檢驗(yàn)一次，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，t=1.81，P>0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；以及直線相關(guān)與回歸分析，通過(guò)對(duì)回歸方程Y=0.9981X-0.0364與Y=X比較。分別對(duì)a與0、b與1進(jìn)行單樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，ta=0.706330.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；tb=0.1518020.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，也可從經(jīng)驗(yàn)判斷斜率在0.97～1.03之間時(shí)，斜率與1之間無(wú)差異[11，12]。因此可以認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)改變參數(shù)后對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有影響，沒(méi)有出現(xiàn)預(yù)期中可能出現(xiàn)的“前帶現(xiàn)象”，因此不影響試劑的線性。

通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)研究表明適當(dāng)改變胱抑素C的試驗(yàn)參數(shù)可以解決試劑不匹配的問(wèn)題，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯影響。原因有：①本試劑的R1為甘氨酸緩沖液主要是為R2混合后提供抗原抗體反映合適的酸堿環(huán)境，減少R1用量對(duì)對(duì)反應(yīng)體系影響較小。②本次實(shí)驗(yàn)中的胱抑素C測(cè)定試劑盒使用的是膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法（PETIA），是以多克隆抗體為基礎(chǔ)的改良免疫比濁分析法，利用基因工程方法將抗體與膠乳顆粒結(jié)合，當(dāng)抗原抗體相結(jié)合時(shí)便形成了抗原-抗體-膠乳顆粒復(fù)合物，增強(qiáng)了反應(yīng)吸光度，反應(yīng)液在一定波長(zhǎng)處比濁，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，計(jì)算標(biāo)本中抗原的含量，利用生化分析儀進(jìn)行比濁測(cè)定，整個(gè)分析過(guò)程只需幾分鐘，該方法與傳統(tǒng)免疫比濁法比較其靈敏度更高。重要的是此種方法與傳統(tǒng)比濁法相比可能使抗原抗體反應(yīng)的“等價(jià)帶”變寬，因此有更高的靈敏度和更寬的線性范圍，本次試驗(yàn)改變了反應(yīng)的總體積并沒(méi)有對(duì)實(shí)驗(yàn)前后的檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，也充分體現(xiàn)了膠乳增強(qiáng)免疫比濁類(lèi)試劑盒對(duì)胱抑素C測(cè)試的優(yōu)異性。因此在日常工作中對(duì)R1、R2試劑不匹配的項(xiàng)目經(jīng)過(guò)論證適當(dāng)改變?cè)囼?yàn)參數(shù)既產(chǎn)生一些經(jīng)濟(jì)效益也避免了浪費(fèi)，值得我們注意。

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（收稿日期：2013-11-04）endprint

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