新疆奎屯部分地區(qū)奶牛球蟲感染現(xiàn)狀調(diào)查

蔣業(yè)慧，王正榮，張艷艷，薄新文

（1.石河子大學動物科技學院，石河子 832000；2.新疆農(nóng)墾科學院 新疆兵團綿羊繁育生物技術(shù)重點實驗室，石河子 832000）

新疆奎屯部分地區(qū)奶牛球蟲感染現(xiàn)狀調(diào)查

蔣業(yè)慧1,2，王正榮2，張艷艷2，薄新文2

（1.石河子大學動物科技學院，石河子 832000；2.新疆農(nóng)墾科學院 新疆兵團綿羊繁育生物技術(shù)重點實驗室，石河子 832000）

為調(diào)查奎屯地區(qū)奶牛球蟲感染與流行現(xiàn)狀，試驗選取奎屯不同地區(qū)的5個規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場，對2～3月齡、6月齡、1～2歲、5～6歲的牛直腸采集糞便共290份進行球蟲檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)被檢5個規(guī)?；膛鼍嬖谇蛳x感染，感染率最高為58.14%；共檢出8種艾美耳屬球蟲，分別是牛艾美耳球蟲(Eimeria bovis)（8.62%）、邱氏艾美耳球蟲(Eimeria zuernii)（9.31%）、橢圓艾美耳球蟲(Eimeria ellipsoidalli)（11.03%）、柱狀艾美耳球蟲(Eimeria cylindrce)（5.86%）、阿拉巴艾美耳球蟲(Eimeria alabamensis)（4.13%）、亞球艾美耳球蟲(Eimeria subspherica)（9.31%）、奧博艾美耳球蟲(Eimeria auburnensis)（5.17%）、加拿大艾美耳球蟲(Eimeria canadensis)（3.44%），且優(yōu)勢蟲種為橢圓艾美耳球蟲(Eimeria ellipsoidalli)、邱氏艾美耳球蟲(Eimeria zuernii)、亞球艾美耳球蟲(Eimeria subspherica)、牛艾美耳球蟲(Eimeria bovis)。

奎屯；奶牛；球蟲；感染率；感染強度

牛球蟲病是由艾美耳屬（Eimeria）的多種球蟲寄生于牛的腸道粘膜上皮細胞內(nèi)引起的以出血性腸炎為主要特征的寄生性原蟲病，主要危害犢牛，引起犢牛腹瀉、貧血、消瘦、發(fā)育緩慢、免疫力低下，甚至死亡。成年牛多為帶蟲者，為主要的傳染源。牛球蟲病給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失[1]。新疆奶牛養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展，為了解與探究奎屯地區(qū)奶牛球蟲感染與流行現(xiàn)狀，并根據(jù)調(diào)查結(jié)果設(shè)計驅(qū)蟲方案，為奶牛球蟲病的防治提供理論依據(jù)，2013年5～6月我們對奎屯地區(qū)5個規(guī)?；膛龅呐Ｇ蛳x種類和感染現(xiàn)狀進行了相關(guān)的調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 分別采自奎屯不同地區(qū)的5個規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場，采樣奶牛的年齡為2～3月齡、6月齡、1～2歲、5～6歲4個階段。直腸采集糞便50 g，置于一次性塑料手套中，并標記地區(qū)、場名、奶牛標號、年齡、體況，置于4 ℃冰箱中待檢。

1.2 方法

1.2.1 樣品的處理方法 每份糞樣取2 g，加自來水40 mL，攪拌混勻；60目銅篩過濾于50 mL的離心管中，以1200×g離心5 min；去上清，沉淀物中加30 mL的飽和蔗糖水，以1200×g離心5 min，用6 mm的鐵絲吊環(huán)蘸取表面液膜并抖落于載玻片中央，覆蓋蓋玻片，以低倍顯微鏡觀察球蟲卵囊[2,3]，記錄結(jié)果。

1.2.2 球蟲卵囊的孢子化培養(yǎng)及蟲種鑒定 取5 g糞便于40 mL的自來水中，攪拌混勻；經(jīng)60目銅篩過濾于50 mL的離心管中，以1200×g離心5 min；去上清，沉淀物中加30 mL的飽和蔗糖水，以1200×g離心5 min；用一直徑為1 cm的紗窗漏網(wǎng)，蘸取表面水膜，抖于另一個裝有適量40 mL自來水的50 mL的離心管中，重復5次；以1400×g離心10 min，去上清，在離心管沉淀物中加入2.5%重鉻酸鉀溶液1 mL，也可以將搜集物置于平皿中，加入適量2.5%重鉻酸鉀，溶液高度不超過2 mm，放置于室溫下培養(yǎng)，培養(yǎng)24 h之后，每6 h觀察鏡檢觀察1次。根據(jù)孢子化所用的時間，卵囊的大小、形態(tài)、顏色等，參照圖譜進行蟲種鑒定[4-6]。

1.2.3 感染強度的確定 采用麥克馬斯特氏法進行感染強度的檢測[7]，取1 g糞便于50 mL的離心管中，加入29 mL的飽和鹽水；在麥氏計數(shù)板上加滿液體，靜置10 min，顯微鏡下觀察，記10×10的方格內(nèi)所有的卵囊數(shù)，記兩次，取平均值，此值乘200，即為每克糞便中的卵囊數(shù)（OPG值）。

2 結(jié)果

2.1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強度5個牛場均存在球蟲感染，分別為20.97%、37.10%、36.92%、24.14%和58.14%，平均感染率為34.14%（見表1），由此可見奎屯地區(qū)存在奶牛球蟲感染，廣大養(yǎng)殖戶應(yīng)給予足夠的重視。

表1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強度Table 1 Infection rate and infection intensity in different farms

2.2 不同年齡奶牛球蟲感染率與感染強度各個年齡段奶牛的球蟲感染率均達到30%以上，但平均感染強度偏差幅度較大，其中2～3月齡的犢牛感染強度最高，OPG值達到14 456，與其他年齡段奶牛球蟲的感染強度相比差異性均極顯著；5～6歲經(jīng)產(chǎn)奶牛的感染強度比較低，但感染率并不低，與6月齡、1～2歲奶牛球蟲的感染率、感染強度相比，差異性均不具有顯著性差異（見表2）。各個年齡段的奶牛對球蟲均易感，但2～3月齡的犢牛易感性最高，感染強度最大，臨床癥狀最明顯，成年奶牛多為隱性感染階段，臨床癥狀不明顯，但不斷向外界排出卵囊，為主要的傳染源。

表2 不同年齡奶牛球蟲感染率與感染強度Table 2 Infection rate and infection intensity in different ages of dairy cow

2.3 奶牛感染球蟲的種類及形態(tài)描述共觀察到8種牛艾美耳球蟲，分別為牛艾美耳球蟲（Eimeria bovis）、邱氏艾美耳球蟲（Eimeria zuernii）、橢圓艾美耳球蟲（Eimeria ellipsoidalli）、柱狀艾美耳球蟲（Eimeria cylindrce）、阿拉巴艾美耳球蟲（Eimeria alabamensis）、亞球艾美耳球蟲（Eimeria subspherica）、奧博艾美耳球蟲（Eimeria auburnensis）、加拿大艾美耳球蟲（Eimeria canadensis），各種艾美耳球蟲所觀察到的孢子化卵囊數(shù)分別為175、135、192、51、24、216、90和30，共913個孢子化球蟲卵囊。

2.3.1 亞球艾美耳球蟲（Eimeria subspherica） 卵囊為橢圓形或亞球形，大小為（9～11）μm×（8～12）μm，平均：8.5μm×11.5μm。四個孢子囊呈橢圓形，無外殘體，斯氏體明顯，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子。卵囊壁均勻的薄，光滑、透明，無卵膜孔。孢子化時間為4～5 d（見圖1A）。

2.3.2 橢圓艾美耳球蟲（Eimeria ellipsoidalli） 卵囊為橢圓形或卵圓形，卵囊大小為：（12～27）μm×（11～21）μm，平均大?。?6.9 μm×13 μm。四個孢子囊呈長卵圓形，有內(nèi)殘體和明顯的斯氏體，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子。卵囊壁薄、均勻、透明，無卵膜孔。孢子化時間為48～72 h（見圖1B）。

2.3.3 邱氏艾美耳球蟲（Eimeria zuernii） 卵囊為球形、亞球形或橢圓形。大小為：（15～22）μm×（13～18）μm，平均為：17.8 μm×15.6 μm。卵囊壁薄、均勻、透明、無色、無卵膜孔。四個孢子囊呈長卵圓形或橢圓形，無內(nèi)殘體，有斯氏體，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含兩個子孢子。孢子化時間為24～48 h（見圖1C）。

2.3.4 加拿大艾美耳球蟲（Eimeria canadensis） 卵囊為橢圓形，大小為（28～37）μm×（20～26.5）μm，平均：32.5 μm×23.4 μm。四個孢子囊呈長卵圓形，有內(nèi)殘體，有明顯的斯氏體，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子，卵囊壁光滑、透明，棕黃色。有卵囊孔。孢子化時間為96～120 h（見圖1D)。

2.3.5 阿拉巴艾美耳球蟲（Eimeria alabamensis） 卵囊為梨形、橢圓形或不對稱形，大小為：（13～24）μm×（11～16）μm，平均大?。?8.9 μm×13.4 μm，四個孢子囊呈長卵圓形或橢圓形，無內(nèi)殘體，斯氏體不明顯，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子。卵囊壁薄，均勻、透明、幾乎無色，沒有卵膜孔，孢子化時間為96～120 h（見圖1E）。

2.3.6 柱狀艾美耳球蟲（Eimeria cylindrce） 卵囊為圓柱狀、柱狀，或狹窄的柱狀。大小為：（16～27）μm×（12～15）μm，平均：23.3 μm×13.3 μm。四個孢子囊呈長卵圓形，有內(nèi)殘體，斯氏體明顯，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子。卵囊壁薄、無色、光滑、無卵膜孔。孢子化時間為48～72 h（見圖1F）。

2.3.7 牛艾美耳球蟲（Eimeria bovis） 卵囊為卵形的，卵囊大小為：（23～34）μm×（17～23）μm，平均：27.7 μm×20.3 μm。四個孢子囊呈長卵圓形，有內(nèi)殘體，斯氏體明顯，無外殘體和極粒，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子。卵囊壁光滑、均勻、透明，顏色呈褐綠色。有卵膜孔。在室溫條件下孢子化時間：48～72 h（見圖1G）。

2.3.8 奧博艾美耳球蟲（Eimeria auburnensis） 卵囊為卵形，大小為（32～46）μm×（20～25）μm，平均大?。?8.4 μm×23.1 μm，卵囊壁光滑、均勻、透明，淺灰棕色；有時它可能有粗糙的、成顆粒的表面，甚至有乳頭狀突起。四個孢子囊呈長卵圓形，無外殘體，斯氏體不明顯，每個孢子囊內(nèi)含有兩個子孢子，在顯微鏡下在卵囊的窄端可見一個蒼白區(qū)。孢子化時間為48～72 h（見圖1H）。

圖1 奶牛感染的各類球蟲卵囊Fig.1 Sporulated oocyst of Eimeria from dairy cow

2.4 各種球蟲在整個奶牛場及各個奶牛場的感染情況就整個牛場而言，牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲、亞球艾美耳球蟲為優(yōu)勢蟲種，并且這4種優(yōu)勢蟲種中存在兩種致病性強的牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲（見表3）。各個奶牛場均存在艾美耳球蟲的感染，且各個奶牛場各種奶牛球蟲的感染率不盡相同，各個奶牛場的優(yōu)勢蟲種也有所差異：牧場1的優(yōu)勢蟲種為邱氏艾美耳球蟲，牧場2、牧場3、牧場4的優(yōu)勢蟲種均為橢圓艾美耳球蟲，牧場5的優(yōu)勢蟲種為耳球蟲牛艾美（見表4）。

2.5 各個年齡段各種球蟲的感染率在此次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)牛艾美耳球蟲的8個種，且各個年齡段的優(yōu)勢蟲種略有差別，其中，在2～3月齡的犢牛中，牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲、柱狀艾美耳球蟲感染率比其余蟲種都偏高，為犢牛球蟲的優(yōu)勢蟲種；在6月齡的犢牛中橢圓艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、亞球艾美耳球蟲的感染率比其余球蟲的感染率較高；在1～2歲的青年牛中，致病性強的牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲的感染率與其感染低月齡犢牛的感染率相比有所下降，而橢圓艾美耳球蟲、亞球艾美耳球蟲的感染比例有所偏高；5～6歲的經(jīng)產(chǎn)牛感染球蟲種類有所減少，僅檢出6種球蟲，在這六種球蟲當中，感染率相對比較高的為邱氏、橢圓、亞球艾美耳球蟲。由此數(shù)據(jù)可知，各個年齡段所感染的球蟲種類及各個年齡段易感的球蟲種類均有所差異，且幼齡牛對致病性較強的牛艾美耳球蟲和邱氏艾美耳球蟲較為敏感（見表5）。

表3 各種球蟲在整個奶牛場的感染率Table 3 The infection rate of every dairy cow coccidiosis in the total farm

表4 各個球蟲在各個奶牛場的感染率Table 4 The infection rate of every coccidiosis in every farm

表5 各個年齡段各種球蟲的感染率Table 5 Infection rate of different coccidiosis in different ages

3 討論

奶牛球蟲感染在世界范圍內(nèi)十分普遍，且牛球蟲種類豐富，Levine[8]報道有22種。1992年，黃兵等[9]報道我國存在16種可以感染牛的艾美耳球蟲。在國外，Chibunda等[10]1997年報道在坦桑尼亞奶牛球蟲的感染率為35%，共發(fā)現(xiàn)7個蟲種。Koutny等[11]調(diào)查結(jié)果顯示，在澳大利亞被調(diào)查的牛場中有97.97%的牛場中存在球蟲的感染，樣品的陽性率高達83.67%，共檢出11種球蟲。Cicek等[12]報道，在土耳其所調(diào)查的504個牛糞便排泄物中有20.04%的樣品中檢出11種牛球蟲卵囊。本次調(diào)查共涉及奎屯6個規(guī)?；膛觯鱾€奶牛場均存在奶牛球蟲感染，且各個年齡段的奶牛球蟲感染率均在30%以上，OPG值均在2000以上，且共檢出8種艾美耳球蟲。新疆北部地區(qū)王開勝等[13]報道石河子某牛場曾爆發(fā)過牛球蟲病，陽性率為54.84%，且存在6種球蟲的感染，與本次調(diào)查結(jié)果共同證明新疆北部存在奶牛球蟲的感染，但各個地區(qū)流行的奶牛球蟲種類及感染率有所差異，這可能與不同牛場的飼養(yǎng)管理條件差異有很大的關(guān)系。金蘭梅等[14]對江蘇省部分地區(qū)的9個奶牛場進行了球蟲感染調(diào)查，結(jié)果表明9個場都有球蟲感染，感率最高的為1～6月齡和6～12月齡的奶牛，大部分牛場的OPG低于1000。石冬梅等[15]報道河南省奶牛球蟲的感染率為37.57%，共檢出11種奶牛球蟲。對比各地區(qū)調(diào)查結(jié)果顯示雖然新疆氣候干燥，晝夜溫差大，但依然存在較為嚴重的奶牛球蟲感染。為了降低奶牛球蟲對奶牛業(yè)的危害，各個奶牛場應(yīng)加強奶牛球蟲病的防控，做好疾病監(jiān)測，采用藥物預防，提高整體畜群的抵抗力。當然本次調(diào)查只是對新疆奎屯地區(qū)5～6月奶牛球蟲的感染情況進行了調(diào)查，并未對奶牛球蟲全年的感染情況進行監(jiān)測，同時調(diào)查的數(shù)量不是很多，故這一結(jié)果并不能反應(yīng)整個奎屯地區(qū)全年奶牛球蟲感染情況。鑒于此，本課題組將進一步擴大樣品數(shù)量，并進行全年的感染情況調(diào)查，全面掌握奎屯地區(qū)奶牛球蟲流行規(guī)律，為制定合理的驅(qū)蟲方案提供理論依據(jù)。

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INVESTIGATION INTO THE INFECTION STATUS OF DAIRY COW COCCIDIOSIS IN KUITUN AREA OF XINJIANG PROVINCE

JIANG Ye-hui1,2, WANG Zheng-rong2, ZHANG Yan-yan2, BO Xin-wen2
(1.College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000,China; 2. The Breed and Biotechnology Key Laboratory of Sheep, Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science, Shihezi 832000, China)

To investigate into the infection status of dairy cow coccidiosis in Kuitun area of Xinjiang province, 290 fecal samples were randomly collected from cattle on f ve large scale farms, ranging from 2-3 months, 6 months, 1-2 years old to 5-6 years old. Examination of these samples revealed that all f ve dairy farms were infected with coccidiosis with the highest infection rate at 58.14%. Eight species of parasites were identif ed, including Eimeria bovis (25.25%), Eimeria zuernii (27.27%), Eimeria ellipsoidalli (32.32%), Eimeria cylindrce (17.17%), Eimeria alabamensis (12.12%),Eimeria subspherica(27.27%), Eimeria auburnensis (15.15%) and Eimeria Canadensis (10.10%).

Kuitun; dairy cow; coccidiosis; infection rate; infection intensity

S858.232.723

A

1674-6422（2014）01-0057-06

2013-10-04

國家科技支撐計劃(2012BAD43B02)

蔣業(yè)慧，女，預防獸醫(yī)學專業(yè)

薄新文，E-mail：851661263@qq.com