大孔吸附樹(shù)脂富集天南星總黃酮部位的影響因素

申利娜， 張永太， 王 芹， 張素娟， 朱春赟， 許 玲*， 馮年平*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院， 上海 200032）

大孔吸附樹(shù)脂富集天南星總黃酮部位的影響因素

申利娜1， 張永太1， 王 芹2， 張素娟1， 朱春赟1， 許 玲2*， 馮年平1*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院， 上海 200032）

目的 系統(tǒng)考察各種因素對(duì)大孔吸附樹(shù)脂富集天南星中總黃酮部位的影響，并探討富集工藝各階段的大孔吸附樹(shù)脂表面形態(tài)變化。方法 以吸附率和解吸率為指標(biāo)，采用靜態(tài)吸附法富集黃酮類(lèi)成分，采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮的量；考察樹(shù)脂型號(hào)，洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)，上樣藥液質(zhì)量濃度，吸附時(shí)間，溫度等因素對(duì)富集天南星中總黃酮部位的影響；以環(huán)境掃描電鏡觀察樹(shù)脂吸附前、吸附后、解吸后的表面微觀形態(tài)的變化。結(jié)果 所考察各因素均可對(duì)樹(shù)脂對(duì)總黃酮部位的富集能力產(chǎn)生不同程度的影響， 優(yōu)選的富集條件為： 采用 AB-8 樹(shù)脂， 上樣藥液質(zhì)量濃度為 1 g（生藥） /mL， 在 25 ℃靜態(tài)吸附 6 h， 在 45 ℃下以 60%乙醇為洗脫溶媒 （樹(shù)脂∶洗脫溶媒為 1 ∶5， W/V） 洗脫； 樹(shù)脂吸附藥液后，表面增厚凸起，顏色加深，可觀察到吸附較多物質(zhì)，洗脫后表面凹凸不平，顏色變淡，推測(cè)吸附物質(zhì)被有選擇地洗脫。結(jié)論 大孔吸附樹(shù)脂可有效富集天南星中總黃酮部位。

大孔吸附樹(shù)脂；靜態(tài)吸附；天南星；總黃酮；掃描電鏡

天 南 星 為 天 南 星 科 植 物 天 南 星 Arisaema erubescens（ Wall.） Schott、 異 葉 天 南 星 Arisaema heterophyllum Bl.或東北天南星 Arisaema amurense Maxim.的干燥塊莖［1］。 天 南星性 味苦、 辛、 溫、有毒， 具有抗腫 瘤、 鎮(zhèn) 靜、 鎮(zhèn) 痛 等作用［2-4］， 一般供外用。天南星主要化學(xué)成分有黃酮類(lèi)、苷類(lèi)、生物堿類(lèi)等多種化學(xué)成分。黃酮類(lèi)成分為天南星中有效組分之一［2］， 居羚等［5］應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù) （ LCMS） 研究天南星成分， 發(fā)現(xiàn)天南星中的黃酮組分為一組苷元以芹菜素為主，且相對(duì)分子質(zhì)量與夏佛托苷相同或相近的黃酮碳苷同分異構(gòu)體， 2010 年版 《中國(guó)藥典》 中規(guī)定以芹菜素為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 三乙胺為顯色劑， 在 400 nm處采用紫外分光光度法測(cè)定天南星中總黃酮量， 以此控制藥材質(zhì)量［1］。

大孔吸附樹(shù)脂 （ macroporous absorption resin ）是由聚合單體和交聯(lián)劑、致孔劑、分散劑等添加劑經(jīng)聚合反應(yīng)制備而成的一類(lèi)有機(jī)高聚物吸附劑，近幾年已廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離純化［6］， 已報(bào)道 的 有 黃 酮 類(lèi)［7］， 生 物 堿 類(lèi)［8］、 萜 類(lèi)［9］， 皂 苷類(lèi)［10］等。 黃酮類(lèi)化合物， 具有多酚結(jié)構(gòu)， 依靠大孔吸附樹(shù)脂與其之間的范德華力進(jìn)行吸附，可取得良好分離純化效果［11］。 本實(shí)驗(yàn)采用大孔吸附樹(shù)脂富集天南星中的總黃酮部位，采用靜態(tài)吸附法，系統(tǒng)考察各種因素對(duì)大孔吸附樹(shù)脂富集效果的影響，優(yōu)選富集工藝，并采用掃描電鏡對(duì)大孔吸附樹(shù)脂的表面進(jìn)行表征，分析富集過(guò)程中，大孔吸附樹(shù)脂表面微觀形態(tài)的變化。

1 儀器與試藥

UN754N型紫外分光光度儀 （上海精密科學(xué)儀器有限公司），HZS-H型水浴振蕩器 （哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）， JA31002 型電子天平（上海精天電子儀器有限公司）， XL30 型環(huán)境掃描電鏡 （荷蘭 Philips公司）；生南星飲片 （上?？禈蛑兴庯嬈邢薰荆?產(chǎn)地為河北， 批號(hào) 110706），經(jīng)我校生藥學(xué)教研室專(zhuān)家鑒定， 為 2010 年版 《中國(guó)藥典》 收載品種［1］， 芹菜素對(duì)照品 （ 中國(guó)藥品生物 制 品 檢 定 所， 批 號(hào) 111901-201102 ）； AB-8、HPD-100、HPD-300 型大孔吸附樹(shù)脂 （上海摩速科學(xué)器材有限公司）； 實(shí)驗(yàn)用試劑均為分析純 （上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 總黃酮檢測(cè)方法學(xué)考察

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［1］精密稱(chēng)取芹菜素對(duì)照品 1.23 mg， 置 100 mL量瓶中， 加 60%乙醇溶解，并稀釋至刻度， 得 12.3 μg/mL對(duì)照品溶液 （母液）。 精密移取對(duì)照品溶液 1、2、3、4、5 mL， 分別置10 m L量瓶中， 各加60%的乙醇稀釋至5 m L，再加1%的三乙胺水溶液至刻度， 搖勻， 以相應(yīng)的試劑為空白， 在 400 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度， 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 y=0.017+0.128x， r=0.999 8， 即芹菜素在 1.23 ～6.15 μg范圍內(nèi)， 待測(cè)物質(zhì)進(jìn)樣量與吸光度之間有良好的線性關(guān)系。

2.1.2 精密度試驗(yàn) 精密移取 2.0 mL芹菜素對(duì)照品母液置于10 mL量瓶中， 加60%的乙醇至5 m L。按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法， 自 “加 1%三乙胺水溶液”起，依法測(cè)定吸光度，連續(xù)5次。測(cè)得的吸光度的 RSD為 0.17%， 表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取 “2.2” 項(xiàng)下制備的天南星提取液的稀釋液 5 份， 每份 2 mL， 置 10 mL量瓶中。按 “2.1.1” 項(xiàng)下 “自加 60%的乙醇至 5 mL” 起， 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 其 RSD為 0.14% （n=5），說(shuō)明天南星總黃酮的測(cè)定方法重復(fù)性較好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取 “2.2” 項(xiàng)下制備的天南星提取液2 mL， 置10 mL量瓶中。 按 “2.1.1” 項(xiàng)下 “自加 60%的乙醇至 5 mL” 起， 制備樣品， 分別于 0.5、 1、 2、 4、 8 h 測(cè)定吸光度。 其 RSD為0.17%，說(shuō)明8 h 內(nèi)待測(cè)樣品穩(wěn)定性較好， 可以滿(mǎn)足實(shí)際實(shí)驗(yàn)中的樣品檢測(cè)時(shí)間要求。

2.1.5 回收率試驗(yàn) 取 10 m L量瓶 5 只， 1 號(hào)加提取液2 mL， 2 ～4號(hào)加2 mL提取液和2 m L對(duì)照品母液， 5 號(hào)加2 mL對(duì)照品母液。按 “2.1.1” 項(xiàng)下操作， 求得的回收率分別為 99.64%、 99.88%、97.85%， 其 RSD為 0.95%， 表明方法的回收率較好。

2.2 天南星提取液的制備 稱(chēng)取天南星飲片 600 g， 加6 倍量 （m/V） 的 80%的乙醇回流提取3 次，每次 1.5 h， 過(guò)濾， 合并濾液， 減壓濃縮， 回收乙醇至無(wú)醇味，置 100 mL量瓶中， 加蒸餾水溶解，并稀釋至刻度， 得 6 g（生藥） /mL藥液， 使用時(shí)以蒸餾水稀釋至適當(dāng)濃度。

2.3 樹(shù)脂的預(yù)處理 取一定量的樹(shù)脂， 用 95%的乙醇浸泡 24 h， 充分溶脹， 用蒸餾水洗至無(wú)醇味，吸干表面水分，備用。

2.4 樹(shù)脂型號(hào)對(duì)天南星總黃酮富集的影響 取已處理好的 AB-8、 HPD-100、 HPD-300 3 種型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂各 3 份， 每份 3 g， 置 50 mL具塞錐形瓶中， 加入 15 mL生藥質(zhì)量濃度為 0.4 g/mL的天南星提取液， 在 25 ℃下振搖 12 h， 靜置 12 h， 使其達(dá)到飽和吸附，吸取上層液，水浴濃縮，按藥典法測(cè)定總黃酮的量，計(jì)算各樹(shù)脂的吸附量。上述經(jīng)靜態(tài)吸附總黃酮后濾出的樹(shù)脂，用濾紙吸干表面水分， 稱(chēng)取2 g， 加入30%乙醇 10 mL， 同法振搖 12 h， 靜置 12 h， 濾出， 測(cè)定洗脫液中總黃酮的量。

2.5 洗脫溶媒對(duì)天南星總黃酮解吸的影響 稱(chēng)取處理好的 AB-8 樹(shù)脂， 每份 3 g， 加入質(zhì)量濃度為0.4 g/mL的提取液 15 m L。 25 ℃振搖 12 h， 靜置12 h使其達(dá)到飽和吸附， 分離樹(shù)脂， 吸干表面水分。稱(chēng)取2 g含藥樹(shù)脂，對(duì)應(yīng)加入體積分?jǐn)?shù)分別為10%、 30%、 40%、 50%、 60%、 80% 的 乙 醇10 mL， 平行3 份， 同法振搖、 靜置，測(cè)定洗脫液中總黃酮量，計(jì)算洗脫率。將洗脫液水浴揮干，干浸膏稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算洗脫純度。取上樣藥液水浴揮干，計(jì)算上樣藥液所得干浸膏中總黃酮含量，比較吸附前后的純度 （純度 =干浸膏中總黃酮量/干浸膏質(zhì)量×100%， 純度比 =樹(shù)脂純化后純度/純化前純度。

2.6 藥液質(zhì)量濃度對(duì)天南星總黃酮吸附的影響稱(chēng)取9份處理好的樹(shù)脂， 每份3 g，分別加入生藥質(zhì)量濃度為 1、 0.4、 0.2 g/mL的提取液， 各平行操作3份，同法振搖靜置，測(cè)定上層液中藥物質(zhì)量濃度， 計(jì)算吸附量和吸附率。 取含藥樹(shù)脂 2 g， 加10mL 60%的乙醇洗脫， 測(cè)定洗脫液的吸光度計(jì)算洗脫率。

2.7 溫度和吸附時(shí)間對(duì)總黃酮吸附的影響 稱(chēng)取3 份處理好的樹(shù)脂， 每份 3 g， 分別加入 15 m L生藥質(zhì)量濃度為 1 g/mL的提取液， 25 ℃下振搖， 分別于 2、 4、6、 8、12、 24 h 取上層液 2 mL，并補(bǔ)入同等體積的蒸餾水， 上層液用 0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后，照藥典法測(cè)定吸光度，計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的上層液中總黃酮?dú)埩袅?，?jì)算吸附量和吸附率，同法測(cè)定在 35、 45、 55 ℃下不同時(shí)間的吸附率。

2.8 溫度對(duì)總黃酮解吸的影響 稱(chēng)取 12 份處理好的樹(shù)脂， 每份 3 g， 分別加入 15 mL生藥質(zhì)量濃度為 1 g/mL的提取液， 25 ℃振搖 12 h，靜置 12 h，分離樹(shù)脂， 吸干表面水分。 稱(chēng)取 12份含藥樹(shù)脂，每份 2 g， 加入 10 mL 60%的乙醇， 分別在 25、35、 45、 55 ℃洗脫， 計(jì)算洗脫率。

2.9 吸附及洗脫對(duì)樹(shù)脂表面微觀形態(tài)的影響 稱(chēng)取3 g處理好的樹(shù)脂3份，1份置真空干燥箱中烘干， 另2 份置25 mL錐形瓶中， 分別加入15 mL天南星提取液， 水浴震蕩 12 h， 靜置 12 h，分離樹(shù)脂。 其中一份含藥樹(shù)脂同法烘干， 另一份加 60%乙醇洗脫，分離洗脫后的樹(shù)脂，同法烘干。3份干樹(shù)脂分別經(jīng)環(huán)境掃描電鏡掃描，分析表面形態(tài)變化。

2.10 數(shù)據(jù)分析方法 結(jié)果以均值 ±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示， 采用 SPSS 19.0 對(duì)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，P ＜0.05 時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異； P＜0.01 時(shí)認(rèn)為差異極顯著。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 樹(shù)脂型號(hào)對(duì)天南星總黃酮富集的影響 結(jié)果顯示 （表1）， 3 種樹(shù)脂吸附率均較高，直觀分析以 AB-8 和 HPD-100 樹(shù)脂對(duì)天南星總黃酮吸附率幾乎無(wú)差異， 且均高于 HPD-300 樹(shù)脂， 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示， AB-8 樹(shù)脂與 HPD-100 樹(shù)脂相比， 吸附率差異不明顯 （P＞0.05）， 而與 HPD-300 樹(shù)脂相比具有顯著性差異 （P＜0.05）； HPD-100 樹(shù)脂解吸率最低，與其余兩種型號(hào)樹(shù)脂相比均有顯著性差異（P＜0.05）， 以 AB-8 樹(shù)脂對(duì)總黃酮的解吸率最高。綜合分析， 優(yōu)選 AB-8 樹(shù)脂進(jìn)行天南星中總黃酮部位的富集工藝研究。

表1 樹(shù)脂型號(hào)對(duì)天南星中總黃酮富集的影響 （， n=3）Tab.1 Effects of macroPorous resin tyPes on the enrichm ent of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma （， n=3）

表1 樹(shù)脂型號(hào)對(duì)天南星中總黃酮富集的影響 （， n=3）Tab.1 Effects of macroPorous resin tyPes on the enrichm ent of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma （， n=3）

注： 與 HPD-300 樹(shù)脂相比，**P＜0.01吸附率 = （初始藥液質(zhì)量濃度 -吸附后藥液質(zhì)量濃度） /初始藥液質(zhì)量濃度 ×100%； 洗脫率 =洗脫液藥物質(zhì)量濃度 ×洗脫液體積/吸附量 ×100%

樹(shù)脂型號(hào) 吸附量/μg 吸附率/% 解吸量/μg 解吸率 /% AB-8 57.65 ±0.35 94.05 ±0.57** 29.31 ±0.64 50.85 ±1.40**HPD-100 58.07 ±0.45 94.75 ±0.73** 26.70 ±1.71 46.00 ±3.29**HPD-300 55.35 ±0.34 90.31 ±0.56 19.11 ±1.83 34.51 ±3.28

3.2 洗脫溶媒與解吸溫度對(duì)天南星總黃酮解吸的影響 隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，解吸率增大（圖1）， 以60%及 80%乙醇洗脫所得解吸率較大，與其他組相比均有顯著性差異 （P＜0.01）。 但用高體積分?jǐn)?shù)乙醇洗脫時(shí)，一些脂溶性的成分也被洗脫，影響純度。通過(guò)計(jì)算干浸膏中總黃酮的純度比發(fā)現(xiàn) （圖2）， 60%乙醇洗脫純度比最大， 且與其它組相比差異顯著 （P＜0.01）。

隨著溫度的升高，總黃酮洗脫率增大，至45 ℃時(shí)達(dá)到最高 （圖 3）。 與 45 ℃下所得洗脫率相比， 25 ℃組及 35 ℃組下洗脫率均較小 （P＜0.01）， 而55 ℃下所得洗脫率與 45 ℃組無(wú)明顯差異 （P＞0.05）。

3.3 藥液質(zhì)量濃度對(duì)天南星總黃酮吸附的影響藥液質(zhì)量濃度對(duì)天南星總黃酮吸附率與解吸率均有影響，隨著藥液質(zhì)量濃度的增加，吸附率與解吸率均呈升高趨勢(shì) （表 2）。 當(dāng)藥液質(zhì)量濃度為 1 g/mL時(shí)，吸附率和解吸率均較高。

圖 1 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì) AB-8 樹(shù)脂中天南星總黃酮洗脫率的影響Fig.1 Elu tion rate of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma using macroPorous resin

圖 2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇洗脫對(duì) AB-8 樹(shù)脂中天南星總黃酮純度比的影響Fig.2 Purity ratio （ Purity of enriched extract versus crude extract） of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma using macroPorous resin AB-8 following different concentrations of alcohol solution as eluting solvent

圖 3 以 60%乙醇在不同溫度下洗脫所得 AB-8 樹(shù)脂中天南星總黃酮的洗脫率Fig.3 Elution rate of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma usingm acroPorous resin AB-8 follow ing different elution tem Perature w ith 60% ethanol solution as eluting solvent

3.4 吸附時(shí)間和溫度對(duì)天南星總黃酮吸附的影響

本實(shí)驗(yàn)比較了4個(gè)溫度下吸附時(shí)間對(duì)天南星總黃酮吸附的影響。不同溫度下總黃酮吸附率的變化趨勢(shì)并不一致 （圖 4）， 在 25 ℃與 45 ℃下， 吸附率在2～8 h內(nèi)隨時(shí)間延長(zhǎng)， 呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，繼而變化趨于平穩(wěn)； 而35 ℃與55 ℃組則隨時(shí)間延長(zhǎng)，吸附率增大，8 h后趨于穩(wěn)定，表明已經(jīng)達(dá)到飽和吸附。 綜合比較， 以在 25 ℃吸附 6 h所得吸附率最大， 為 （88.9 ±0.018）%。

綜合以上研究結(jié)果，優(yōu)化的工藝為：采用AB-8 樹(shù)脂， 上樣藥液質(zhì)量濃度為 1 g（ 生藥） /mL，樹(shù)脂質(zhì)量與藥液體積比為 1 ∶5 （ m/V）， 在 25 ℃靜態(tài)吸附 6 h， 在 45 ℃下以 60%乙醇為洗脫溶媒（樹(shù)脂 ∶洗脫溶媒為1 ∶5， m/V） 洗脫。

表2 藥液質(zhì)量濃度對(duì)天南星中總黃酮吸附的影響 （， n=3）Tab.2 Effects of various concentrations of extracting solu tions on the adsorPtion of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma using macroPorous resin AB-8 （， n=3）

表2 藥液質(zhì)量濃度對(duì)天南星中總黃酮吸附的影響 （， n=3）Tab.2 Effects of various concentrations of extracting solu tions on the adsorPtion of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma using macroPorous resin AB-8 （， n=3）

注： 與 1.0 g/mL組相比，**P＜0.01，*P＜0.05

藥液 /（ g·mL-1） 吸附 量 /μg 吸附 率 /% 解吸 量 /μg 解 吸率 /% 1.0 151.96 ±1.42 87.17 ±0.82 125.48 ±3.17 84.32 ±0.82 0.4 55.24 ±0.18 85.62 ±0.28* 45.96 ±1.26 83.21 ±2.15 0.2 27.28 ±0.12 79.95 ±0.35** 20.19 ±1.29 73.99 ±4.59**

3.5 樹(shù)脂表面微觀形態(tài)變化 樹(shù)脂表面結(jié)構(gòu)如圖5 ～7。 吸附前樹(shù)脂表面相對(duì)光滑， 結(jié)構(gòu)緊密， 孔隙清晰。吸附后表面有突起，顏色加深，應(yīng)為藥液被吸附、干燥后所留固形物。洗脫后樹(shù)脂表面顏色變淺，結(jié)構(gòu)疏松且凹凸不平，應(yīng)為洗脫溶媒對(duì)大孔吸附樹(shù)脂吸附的物質(zhì)進(jìn)行有選擇性的洗脫后，未洗脫的物質(zhì)干燥后所留固形物。通過(guò)對(duì)樹(shù)脂表面微觀形態(tài)的展現(xiàn)，可較直觀地觀察大孔吸附樹(shù)脂對(duì)藥物成分的吸附與解吸情形。

4 討論

圖 4 不同溫度下 AB-8 樹(shù)脂對(duì)天南星中總黃酮吸附率隨時(shí)間變化的趨勢(shì)Fig.4 AdsorPtion rate-time Profiles for total flavonoids from Arisaematis Rhizoma using macroPorous resin AB-8 follow ing different temPeratures

圖 5 吸附前 AB-8 大孔吸附樹(shù)脂表面結(jié)構(gòu)Fig.5 Surface structure of AB-8macroPorous resin

圖 6 吸附 天南星提取 液后 AB-8 大孔吸附樹(shù)脂 表面結(jié)構(gòu)Fig.6 Surface structure of extracting solution（ from Arisaematis Rhizoma ） -adsorbed AB-8 macro-Porous resin

大孔吸附樹(shù)脂對(duì)活性成分的吸附主要為樹(shù)脂表面與有機(jī)分子間以范德華力或生成氫鍵實(shí)現(xiàn)，而對(duì)成分的選擇性吸附，一般認(rèn)為是由于樹(shù)脂孔徑、藥物成分的分子量大小及與樹(shù)脂間的吸附力不同引起。大孔吸附樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，如極性、孔徑等，均可對(duì)藥物成分的富集能力有一定影響［12］， 而上樣藥液的質(zhì)量濃度、解吸劑的種類(lèi)，吸附與解吸溫度等吸附處理過(guò)程的操作條件，也是在采用大孔吸附樹(shù)脂富集有效成分時(shí)需要系統(tǒng)考察的因素。

圖 7 以 60%乙醇洗脫后 AB-8 大孔吸附樹(shù)脂表面形態(tài)Fig.7 Surface structure of extracting solution（ from Arisaematis Rhizoma） -adsorbed AB-8 macro-Porous resin after having beeneluted w ith 60% ethanol solution

在本實(shí)驗(yàn)中，所需富集的天南星總黃酮部位為極性較弱的脂溶性部位， 因此弱極性的 AB-8 型樹(shù)脂對(duì)該部位表現(xiàn)出較好的吸附效果， 采用 AB-8 型樹(shù)脂，其對(duì)天南星總黃酮的吸附率與解吸率均較高。大孔吸附樹(shù)脂的表面發(fā)生吸附作用后，樹(shù)脂表面上溶質(zhì)的濃度較高，而溶劑內(nèi)溶質(zhì)的濃度降低，引發(fā)體系內(nèi)放熱和自由能的下降。由于大孔吸附樹(shù)脂的吸附作用主要為物理吸附，在吸附與解吸過(guò)程中，體系溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能有一定影響，因此需要進(jìn)行綜合考察。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)需要，考察了 25 ～55 ℃下大孔吸附樹(shù)脂對(duì)天南星總黃酮的吸附與解吸情況，發(fā)現(xiàn)溫度升高，解吸率增加，而吸附率并不增加，這與文獻(xiàn)報(bào)道的低溫有利于吸附，高溫有利于洗脫相一致，溫度升高，樹(shù)脂膨脹，多酚類(lèi)成 分動(dòng)能增加［13］， 不利于吸附。 在 8 h 前，吸附率隨時(shí)間變化有較大波動(dòng)，8 h后趨于穩(wěn)定，提示吸附作用可能需要較長(zhǎng)時(shí)間的平衡，但物理吸附一般不需要活化能，故吸附和脫附速率都較快，分析本實(shí)驗(yàn)中吸附平衡時(shí)間較長(zhǎng)的原因，可能與上樣藥液為總黃酮水混懸液有關(guān)，黃酮類(lèi)成分需要在水溶液中溶解后以分子形式被有效吸附，大孔吸附樹(shù)脂對(duì)游離黃酮分子的持續(xù)吸附，使混懸液中黃酮類(lèi)成分不斷溶解，而物理吸附對(duì)分子的吸附作用具有多層吸附能力，因此該吸附過(guò)程可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，直至吸附飽和。大孔吸附樹(shù)脂表現(xiàn)出的物理吸附作用，與吸附物質(zhì)的質(zhì)量濃度的大小密切相關(guān)，一般上樣液質(zhì)量濃度越低越利于吸附，但在本實(shí)驗(yàn)所考察的上樣藥液質(zhì)量濃度中，隨著質(zhì)量濃度的增加，吸附率增大，推測(cè)其原因仍可能與上樣藥液為混懸液狀態(tài)有關(guān)，綜合考慮大孔吸附樹(shù)脂的使用效率與生產(chǎn)成本， 確定以 1 g（生藥） /mL的藥液質(zhì)量濃度上樣較為適宜。實(shí)驗(yàn)中考察了不同溫度下吸附率隨時(shí)間的變化，但吸附率變化趨勢(shì)與溫度之間沒(méi)有明顯的規(guī)律，關(guān)于溫度對(duì)吸附率的影響機(jī)理，尚需深入研究。

采用優(yōu)選的富集工藝，所得干浸膏中總黃酮純度較純化前提高 2.6 倍， 純化后所得干浸膏黏度明顯減小，提示可能已除去較多的多糖類(lèi)與蛋白類(lèi)成分，為后期制劑研究奠定基礎(chǔ)。

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Enrichm ent of total flavonoids from Arisaematis Rhizoma usingm acroPorous resin

SHEN Li-na1， ZHANG Yong-tai1， WANG Qin2， ZHANG Su-juan1， ZHU Chun-yun1， XU Ling2*，F(xiàn)ENG Nian-ping1*
（1.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai201203， China； 2.Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 200032， China）

macroporous resin； static adsorption； ArisaematisRhizoma； total flavonoid；scanning electronmicroscope

R944

： A

： 1001-1528（2014）01-0076-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.019

2013-03-17

上海市衛(wèi)生局衛(wèi)生系統(tǒng)新百人 （優(yōu)秀學(xué)科帶頭人培養(yǎng)） 計(jì)劃項(xiàng)目 （XBR2011063）

申利娜 （1988—）， 女， 碩士生， 研究方向： 中藥新型給藥系統(tǒng)。 Tel： （021） 51322684

*通信作者： 馮年平 （1967—） ， 男， 教授， 研究方向： 中藥新型給藥系統(tǒng)。 E-mail： npfeng@hotmail.com許 玲 （1967—） ， 女， 教授， 研究方向： 中醫(yī)內(nèi)科 （ 腫瘤專(zhuān)業(yè)） 。 Tel：（021）33324008-1303， E-mail： xulq67@gmail.com