• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    α干擾素增強骨肉瘤細胞對依托泊苷敏感性的實驗研究

    2014-04-10 16:24:16黃秀芳原向偉
    中國醫(yī)藥導報 2014年7期
    關鍵詞:骨肉瘤凋亡干擾素

    黃秀芳+原向偉

    α干擾素增強骨肉瘤細胞對依托泊苷敏感性的

    實驗研究

    黃秀芳1 原向偉2

    1.廣東省江門市中心醫(yī)院病理科,廣東江門 529030;2.廣東省江門市中心醫(yī)院骨科,廣東江門 529030

    [摘要] 目的 探討α干擾素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63細胞中對依托泊苷敏感性的作用及其機制。 方法 采用IFN-α和依托泊苷單獨或聯合處理骨肉瘤U2OS和MG63細胞72 h,應用流式細胞術和DNA Ladder檢測細胞凋亡的變化,Western blot法檢測PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表達。 結果 流式細胞術表明IFN-α在p53正常的U2O啊、胞中明顯增強依托泊苷誘導的凋亡(P < 0.05),卻對依托泊苷誘導p53突變的MG63細胞凋亡無明顯影響(P > 0.05);DNA Ladder表明與單藥組相比,IFN-α與依托泊苷聯用72 h在U2OS細胞出現明顯的DNA梯形條帶,而在MG63細胞中無此現象;Western blot結果表明在U2OS細胞中聯合用藥組出現PARP的明顯裂解活化,并且IFN-α明顯增強依托泊苷引起的p53信號通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表達,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達,而在MG63細胞中則無此現象。 結論 IFN-α能夠通過激活p53依賴性信號通路增強依托泊苷誘導的骨肉瘤U2OS細胞凋亡,聯合應用IFN-α和傳統化療藥物如依托泊苷可能成為提高骨肉瘤化療敏感性的有效途徑。

    [關鍵詞] α干擾素;依托泊苷;骨肉瘤;凋亡;p53

    [中圖分類號] R738.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2014)03(a)-0004-05

    Experimental study of IFN-α for enhancing sensitivity to Etoposide in human osteosarcoma cells

    HUANG Xiufang1 YUAN Xiangwei2

    1.Department of Pathology, Jiangmen Central Hospital, Guangdong Province, Jiangmen 529030, China; 2.Department of Orthopaedic Surgery, Jiangmen Central Hospital, Guangdong Province, Jiangmen 529030, China

    [Abstract] Objective To study effect of IFN-α on the sensitivity to Etoposide in human osteosarcoma U2OS and MG63 cells with its molecular mechanisms. Methods U2OS and MG63 cells were treated with IFN-α and Etoposide, alone or in combination, for 72 h. Flow cytometry analysis and DNA Ladder were used to examine apoptosis. Western blot was used to determine expression of PARP, p53, Bax, Mdm2 and Bcl-2. Results IFN-α enhanced Etoposide-induced apoptosis in p53-wild U2OS cells (P < 0.05), but not p53-mutant MG63 cells (P > 0.05). IFN-α+Etoposide combination result in obvious DNA Ladder in U2OS, but not MG63 cells and activation of PARP in U2OS cells. The enhanced apoptosis was associated with the accumulation of transcriptionally active p53 accompanied with the increased Bax and MDM2, as well as decreased Bcl-2, in U2OS cells, which was not observed in MG63 cells. Conclusion IFN-α enhances Etoposide-induced apoptosis in human osteosarcoma U2OS cells by activation of p53-dependent signal pathway. This work implies that rational combination with IFN-α and chemotherapy including Etoposide may be a useful strategy for enhancing the chemosensitivity of osteosarcoma.

    [Key words] IFN-α; Etoposide; Osteosarcoma; Apoptosis; p53

    骨肉瘤高發(fā)于青少年人群,居于人類骨骼系統惡性腫瘤發(fā)病率第1位,其惡性程度高,發(fā)展快,許多患者在發(fā)現時已存在肺轉移,因此療效不佳。目前主要治療方法包括新輔助化療+外科手術包括保肢或截肢手術,但能否手術及保證手術效果的重要前提是化療有效。臨床上相當患者因為化療耐藥或毒副作用大等問題,引起化療失敗,導致患者無法行保肢手術從而截肢,甚至無法手術而導致死亡[1]。因此,提高化療療效對于骨肉瘤的治療來講具有重大意義。IFN-α屬于Ⅰ型干擾素,具有調節(jié)免疫、抗病毒、抗腫瘤等多種生物學作用[2],IFN-α可直接抑制耐藥骨肉瘤細胞的生長[3],然而其對骨肉瘤化療敏感性的影響目前尚不清楚。因此筆者聯合使用IFN-α與依托泊苷(Etoposide)處理人骨肉瘤U2OS和MG63細胞,探討其對兩種細胞生長抑制和凋亡的影響,并研究其分子機制,以期為提高骨肉瘤對化療藥物敏感性提供依據。

    1 材料與方法

    1.1 細胞培養(yǎng)

    人骨肉瘤細胞U2OS(p53基因野生型)和MG63(p53基因突變型)購自中山大學病理教研室,培養(yǎng)液為DMEM(GIBCO產品),其中含10%胎牛血清(GIBCO產品)、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素,培養(yǎng)于37℃的5%CO2培養(yǎng)箱(Forma,美國)。

    1.2 藥物處理

    IFN-α購自Peprotech公司,批號300-02A,Etoposide購自Sigma公司,批號E1383,稀釋分裝凍存-20℃,使用時采用DMEM培養(yǎng)液稀釋成工作濃度,處理分為四組:對照組(加入與等量于其余組的DMEM培養(yǎng)液)、IFN-α(加入含工作濃度藥物的DMEM培養(yǎng)液使終濃度為5000 U/mL)組,Etoposide(終濃度在U2OS細胞為2.5 μg/mL、MG63細胞為0.625 μg/mL)組和IFN-α+Etoposide(終濃度同上)組。

    1.3 流式細胞術檢測

    細胞經處理后,消化離心,收集細胞;PBS洗兩次,離心;70%乙醇固定過夜;細胞經10 μmol/L的碘化丙啶(PI)染色5 min,4℃避光30 min;上FCM流式細胞儀(BD,美國)用488 nm激發(fā)光檢測細胞DNA含量,LYSIS軟件分析凋亡率。

    1.4 DNA Ladder檢測

    細胞經各處理后,消化離心,收集細胞;PBS洗兩次;加入0.8 mL的DNAzol(Invitrogen產品,批號:10503-027),室溫放置數分鐘;4℃離心15 min;將上清移入新EP管,加入0.4 mL的無水乙醇;4℃離心10 min;棄上清,加入75%乙醇洗2次,加入適量TE溶解基因組DNA,在含有EB的1.8%瓊脂糖凝膠電泳(水平電泳槽為北京六一廠產品),紫外線激發(fā),凝膠成像分析儀(Bio-Rad,美國)采集DNA梯形條帶。

    1.5 Western blot

    收集細胞,PBS清洗離心,加入蛋白裂解液,定量蛋白(BCA法),SDS-PAGE電泳(垂直電泳儀為美國Bio-Rad產品),然后電轉至PVDF膜(電轉儀為美國Bio-Rad產品),將膜封閉于含5%脫脂奶粉的TBST,4℃過夜;鼠抗人p53、MDM2、Bax、Bcl-2、GAPDH單克隆抗體和兔抗人PARP多克隆抗體均為SantaCruz公司產品,稀釋后室溫封膜3 h或4℃過夜,二抗稀釋后室溫封膜1 h或4℃過夜,暗室ECL化學發(fā)光,膠片顯影,定影。

    1.6 統計學方法

    采用SPSS 14.0軟件進行統計分析,計數資料以率表示,組間比較采用q檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

    2 結果

    2.1 IFN-α在U2OS和MG63細胞對Etoposide引起凋亡的影響

    U2OS和MG63細胞經IFN-α(5000 U/mL)和etoposide(U2OS細胞為2.5 μg/mL、MG6細胞為0.625 μg/mL)單獨或聯合處理72 h后進行流式細胞術檢測凋亡率,流式細胞術結果顯示,U20S細胞在對照組、IFN-α組、Etoposide組和IFN-α+Etoposide的細胞凋亡率分別為:(5.1±2.3)%、(5.7±2.7)%、(15.3±3.8)%和(45.5±5.2)%(圖1A),結果表明IFN-α單獨并不誘導明顯的U2OS細胞凋亡,卻明顯增強了Etoposide誘導的U2OS細胞凋亡,Etoposide組與IFN-α+Etoposide比較,差異有統計學意義(P < 0.05)。然而同樣處理MG63細胞后結果顯示,MG63細胞在對照組、IFN-α組、Etoposide組和IFN-α+Etoposide組的細胞凋亡率分別為:(2.2±0.8)%、(2.5±1.1)%、(23.8±4.6)%和(24.9±5.3)%(圖1B),表明IFN-α不僅單獨不誘導明顯的MG63細胞凋亡,也無增強Etoposide誘導的MG63細胞凋亡的作用,Etoposide組與IFN-α+Etoposide比較,差異無統計學意義(P > 0.05)。

    A:U2OS;B:MG63

    圖1 流式細胞術檢測α干擾素對依托泊苷誘導的U2OS和MG63細胞凋亡的影響

    2.2 IFN-α在U2OS和MG63細胞中對“DNA梯形條帶”的影響

    U2OS和MG63細胞經IFN-α(5000 U/mL)和etoposide(U2OS細胞為2.5 μg/mL,MG6細胞為0.625 μg/mL)單獨或聯合處理72 h后進行DNA Ladder電泳。DNA Ladder是凋亡的特征性表現,結果顯示,與其他各組相比,IFN-α/Etoposide組的U20S細胞出現明顯的梯形條帶(圖2A);而在MG63細胞,各組均未出現明顯梯形條帶(圖2B)。表明IFN-α可明顯增強Etoposide誘導的骨肉瘤細胞凋亡,并且這種效應僅出現在p53功能正常的U2OS細胞中,而在因突變導致p53功能喪失的MG63細胞中無此效應,提示了p53可能參與此效應。

    A:U2OS;B:MG63

    圖2 DNA梯形條帶分析α干擾素對依托泊苷誘導的U2OS和MG63細胞凋亡的影響

    2.3 IFN-α在U2OS細胞中對Etoposide引起PARP活化的影響

    U2OS細胞經IFN-α(5000 U/mL)和etoposide (2.5 μg/mL)單獨或聯合處理72 h后進行western blot檢測PARP蛋白活化。采用Western blot法檢測凋亡關鍵酶PARP的裂解,結果表明,在U2OS細胞,對照組、IFN-α組和Etoposide組均未出現PARP的活化,在聯合用藥組可見116 KD的無活性PARP前體明顯裂解為85 KD的活化片段(圖3)。提示聯合用藥明顯增強PARP活化,從而觸發(fā)U2OS細胞凋亡。

    圖3 α干擾素在U2OS細胞中增強依托泊苷誘導的

    PARP裂解活化(Western blot法)

    2.4 IFN-α對Etoposide活化p53凋亡通路的影響

    為進一步驗證IFN-α對Etoposide的增敏作用與野生型p53的功能有關,筆者進一步檢測了p53凋亡通路相關基因p53、Bax、Bcl-2、Mdm2等的表達。如圖4所示,在U2OS細胞中,IFN-α單獨對p53及其靶基因MDM2的表達無明顯影響,而Etoposide可明顯增強二者的表達,聯合用藥則進一步增高二者的表達。Bax和Bcl-2均是p53的下游調控基因,促凋亡的Bax的表達被Etoposide增高,并被IFN-α+Etoposide進一步增強;與對照組相比,抗凋亡的Bcl-2的表達雖然在Etoposide組無變化,卻被聯合用藥明顯減弱。因此p53、Bax、MDM2和Bcl-2的表達變化與凋亡保持同步,提示了在IFN-α通過激活p53凋亡通路增強Etoposide誘導U2OS細胞凋亡。然而在MG63細胞中,上述基因的蛋白表達均無明顯變化,與MG63細胞中的陰性結果相符合。

    圖4 IFN-α在U2OS、MG63細胞中對Etoposide誘導p53,Bax,Mdm2和Bcl-2表達的影響(Western blot法)

    3 討論

    干擾素是一類多功能細胞因子,具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節(jié)等多種生物學作用[1],包括Ⅰ型和Ⅱ型,其中IFN-α屬于Ⅰ型干擾素,可與細胞表面的IFN-α/β受體結合,從而引起JAK1和TYK的活化,活化的JAK1和TYK可分別使STAT1發(fā)生和酪氨酸位點(Tyr701)和絲氨酸位點(Ser727)的磷酸化,磷酸化的STAT1蛋白形成同源或異源二聚體,進入細胞核與其靶基因啟動子上的干擾素刺激反應元件或者γ活化序列結合,進而調控下游基因表達[4]。IFN-α也是臨床治療腫瘤的第一種細胞因子,已用于膀胱癌、腎癌、肝癌、白血病的臨床治療[5]。

    以依托泊苷、阿霉素、順鉑等DNA損傷性藥物為代表的傳統化療藥物已廣泛用于人類骨肉瘤的新輔助化療,并獲得一定療效,但因其無腫瘤靶向特異性,常常在殺滅腫瘤細胞的同時也破壞正常組織細胞,從而帶來嚴重的毒副作用,最終導致化療的失敗并影響骨肉瘤的最終療效[6-7]。有研究表明IFN-α本身即可抑制多藥耐藥的骨肉瘤細胞生長[3],那么IFN-α聯合化療藥物對骨肉瘤細胞的生長是否存在協同作用,筆者對此進行了一系列研究。

    CAD(caspase activated DNAase)是細胞中一種能切割染色質的核酸酶,可被caspase-3激活,CAD可識別DNA序列中的特定位點,將細胞基因組DNA在核小體單位之間的連接處剪斷,從而形成180~200 bp或其整數倍大小的寡核苷酸片段,經瓊脂糖凝膠電泳會出現梯形電泳條帶,是凋亡的特征性表現,因而成為鑒定凋亡的經典指標[8]。筆者從流式細胞術和形態(tài)學兩方面證明IFN-α對U2OS細胞無明顯影響,卻明顯增強Etoposide誘導凋亡,提示二者聯用比化療藥物單用具有更好的抗癌作用。并且,在U2OS細胞中,聯合用藥可明顯增強PARP[poly(ADP-ribose) polymerase]的活化。實際上,PARP是反映凋亡的經典指標,受到促凋亡信號的刺激后,細胞內蛋白酶Caspases家族成員caspase 8、9被激活,繼而激活下游效應性caspase 3,最終裂解其底物PARP發(fā)生活化,最終導致細胞凋亡[9]。上述變化在p53基因突變而喪失功能的MG63細胞中卻沒有發(fā)生,這提示此效應可能與p53有關。p53是一個經典的抑癌基因,在超過50%的惡性腫瘤包括骨肉瘤中都存在缺失或突變,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切[10],作為凋亡調控的主要靶點,激活的p53可通過調節(jié)其下游基因如MDM2,Bax、Bcl-2等的轉錄和表達,誘導細胞走向凋亡[10]。目前,p53已被認為是眾多化療藥物(包括Etoposide)抗癌作用的主要介導者[7]。不僅如此,最近研究表明,p53也參與了IFN-α引發(fā)的信號通路[11]。筆者發(fā)現,Etoposide激活了p53及其下游基因如MDM2、Bax等的表達。IFN-α雖然單獨應用對p53通路無明顯影響,卻明顯增強Etoposide引起的p53、Bax和MDM2的表達,同時減弱了Bcl-2的表達,充分說明IFN-α通過激活p53依賴性信號通路增強Etoposide誘導的U2OS細胞凋亡。

    MDM2基因是調節(jié)p53的一個重要因子,它在細胞核中直接與p53結合,抑制其轉錄活性,并通過胞核-胞漿穿梭將p53轉運至胞漿并使其降解,從而降低p53水平;另一方面,p53的上調可激活MDM2轉錄表達,來反饋性抑制p53蛋白的繼續(xù)增高。如此二者形成一個負反饋調節(jié)環(huán),使細胞內MDM2/p53比率保持恒定[12]。本研究發(fā)現聯合用藥引起的p53上調伴隨著MDM2水平的升高,表明p53的上調反饋性地激活了MDM2的表達,使其水平升高。Bax和Bcl-2基因同屬Bcl-2家族,均為p53的靶基因,表達于線粒體,是調控細胞凋亡的重要基因[13]。二者功能相互拮抗,Bax具有促進凋亡的作用,Bcl-2則具有抗凋亡的作用,二者的比例決定了細胞是否走向凋亡[14-16]。而聯合用藥通過激活p53上調Bax和下調Bcl-2,使Bax/Bcl-2比例增高,從而促使細胞發(fā)生凋亡。

    因此,IFN-α可通過誘導p53依賴性凋亡來增強骨肉瘤U2OS細胞對依托泊苷的敏感性,提示IFN-α與骨肉瘤傳統化療藥物聯合應用可望成為提高骨肉瘤化療療效的新方向。

    [參考文獻]

    [1] De Saint SN,Fletcher CD. Soft-tissue sarcomas: a update [J]. Eur J Surg Oncol,1999,25(2):215-220.

    [2] Prejean C,Colamonici OR. Role of the cytoplasmic domains of the type I interferon receptor subunits in signaling [J]. Semin Cancer Biol,2000,10(2):83-92.

    [3] Manara MC,Serra M,Benini S,et al. Effectiveness of Type I interferons in the treatment of multidrug resistant osteosarcoma cells [J]. Int J Oncol,2004,24(2):365-372.

    [4] Stark GR,Kerr IM,Williams BR,et al. How cells respond to interferons [J]. Annu Rev Biochem,1998,67(3):227-264.

    [5] 郭子文,許曉軍.干擾素輔助小劑量HA方案治療慢性粒細胞白血病29例療效觀察[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(3):37-38.

    [6] Bruland OS,Pihl A. On the current management of osteosarcoma. A critical evaluation and a proposal for a modified treatment strategy [J]. Eur J Cancer,1997,33(11):1725-1731.

    [7] Hande KR. Etoposide:four decades of development of a topoisomerase II inhibitor [J]. Eur J Cancer,1998,34(10):1514-1521.

    [8] Gavrieli Y,Sherman Y,Ben S. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation [J]. J Cell Biol,1992,119(3):493-501.

    [9] Smulson ME,Simbulan-Rosenthal CM,Boulares AH,et al. Roles of poly(ADP-ribosyl)ation and PARP in apoptosis, DNA repair, genomic stability and functions of p53 and E2F-1 [J]. Adv Enzyme Regul,2000,40(2):183-215.

    [10] 何均輝,鄒秀玲,李忠楚,等.p53蛋白在胃癌中的表達分析[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(5):86-88.

    [11] Porta C,Hadj SR,Nejmeddine M,et al. Interferons alpha and gamma induce p53-dependent and p53-independent apoptosis, respectively [J]. Oncogene,2005,24(4):605-615.

    [12] Moll UM,Petrenko O. The MDM2-p53 interaction[J]. Mol Cancer Res,2003,1(14):1001-1008.

    [13] Bond J,Haughton M,Blaydes J,et al. Evidence that transcriptional activation by p53 plays a direct role in the induction of cellular senescence [J]. Oncogene,1996,13(10):2097-2104.

    [14] Cory S,Adams JM. The Bcl2 family: regulators of the cellular life-or-death switch [J]. Nat Rev Cancer,2002,2(9):647-656.

    [15] 黃鳳,毛麗松,張佳.Bcl-2、IGF-2蛋白在子宮肌瘤組織中的表達及其相關性研究[J].中國現代醫(yī)生,2013,51(13):13-14.

    [16] 王婷,馬云.Bcl-2在三陰性乳腺癌中的預后價值[J].中國現代醫(yī)生,2012,50(29):44-46.

    (收稿日期:2013-10-19 本文編輯:衛(wèi) 軻)

    [2] Prejean C,Colamonici OR. Role of the cytoplasmic domains of the type I interferon receptor subunits in signaling [J]. Semin Cancer Biol,2000,10(2):83-92.

    [3] Manara MC,Serra M,Benini S,et al. Effectiveness of Type I interferons in the treatment of multidrug resistant osteosarcoma cells [J]. Int J Oncol,2004,24(2):365-372.

    [4] Stark GR,Kerr IM,Williams BR,et al. How cells respond to interferons [J]. Annu Rev Biochem,1998,67(3):227-264.

    [5] 郭子文,許曉軍.干擾素輔助小劑量HA方案治療慢性粒細胞白血病29例療效觀察[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(3):37-38.

    [6] Bruland OS,Pihl A. On the current management of osteosarcoma. A critical evaluation and a proposal for a modified treatment strategy [J]. Eur J Cancer,1997,33(11):1725-1731.

    [7] Hande KR. Etoposide:four decades of development of a topoisomerase II inhibitor [J]. Eur J Cancer,1998,34(10):1514-1521.

    [8] Gavrieli Y,Sherman Y,Ben S. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation [J]. J Cell Biol,1992,119(3):493-501.

    [9] Smulson ME,Simbulan-Rosenthal CM,Boulares AH,et al. Roles of poly(ADP-ribosyl)ation and PARP in apoptosis, DNA repair, genomic stability and functions of p53 and E2F-1 [J]. Adv Enzyme Regul,2000,40(2):183-215.

    [10] 何均輝,鄒秀玲,李忠楚,等.p53蛋白在胃癌中的表達分析[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(5):86-88.

    [11] Porta C,Hadj SR,Nejmeddine M,et al. Interferons alpha and gamma induce p53-dependent and p53-independent apoptosis, respectively [J]. Oncogene,2005,24(4):605-615.

    [12] Moll UM,Petrenko O. The MDM2-p53 interaction[J]. Mol Cancer Res,2003,1(14):1001-1008.

    [13] Bond J,Haughton M,Blaydes J,et al. Evidence that transcriptional activation by p53 plays a direct role in the induction of cellular senescence [J]. Oncogene,1996,13(10):2097-2104.

    [14] Cory S,Adams JM. The Bcl2 family: regulators of the cellular life-or-death switch [J]. Nat Rev Cancer,2002,2(9):647-656.

    [15] 黃鳳,毛麗松,張佳.Bcl-2、IGF-2蛋白在子宮肌瘤組織中的表達及其相關性研究[J].中國現代醫(yī)生,2013,51(13):13-14.

    [16] 王婷,馬云.Bcl-2在三陰性乳腺癌中的預后價值[J].中國現代醫(yī)生,2012,50(29):44-46.

    (收稿日期:2013-10-19 本文編輯:衛(wèi) 軻)

    [2] Prejean C,Colamonici OR. Role of the cytoplasmic domains of the type I interferon receptor subunits in signaling [J]. Semin Cancer Biol,2000,10(2):83-92.

    [3] Manara MC,Serra M,Benini S,et al. Effectiveness of Type I interferons in the treatment of multidrug resistant osteosarcoma cells [J]. Int J Oncol,2004,24(2):365-372.

    [4] Stark GR,Kerr IM,Williams BR,et al. How cells respond to interferons [J]. Annu Rev Biochem,1998,67(3):227-264.

    [5] 郭子文,許曉軍.干擾素輔助小劑量HA方案治療慢性粒細胞白血病29例療效觀察[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(3):37-38.

    [6] Bruland OS,Pihl A. On the current management of osteosarcoma. A critical evaluation and a proposal for a modified treatment strategy [J]. Eur J Cancer,1997,33(11):1725-1731.

    [7] Hande KR. Etoposide:four decades of development of a topoisomerase II inhibitor [J]. Eur J Cancer,1998,34(10):1514-1521.

    [8] Gavrieli Y,Sherman Y,Ben S. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation [J]. J Cell Biol,1992,119(3):493-501.

    [9] Smulson ME,Simbulan-Rosenthal CM,Boulares AH,et al. Roles of poly(ADP-ribosyl)ation and PARP in apoptosis, DNA repair, genomic stability and functions of p53 and E2F-1 [J]. Adv Enzyme Regul,2000,40(2):183-215.

    [10] 何均輝,鄒秀玲,李忠楚,等.p53蛋白在胃癌中的表達分析[J].中國醫(yī)藥導報,2012,9(5):86-88.

    [11] Porta C,Hadj SR,Nejmeddine M,et al. Interferons alpha and gamma induce p53-dependent and p53-independent apoptosis, respectively [J]. Oncogene,2005,24(4):605-615.

    [12] Moll UM,Petrenko O. The MDM2-p53 interaction[J]. Mol Cancer Res,2003,1(14):1001-1008.

    [13] Bond J,Haughton M,Blaydes J,et al. Evidence that transcriptional activation by p53 plays a direct role in the induction of cellular senescence [J]. Oncogene,1996,13(10):2097-2104.

    [14] Cory S,Adams JM. The Bcl2 family: regulators of the cellular life-or-death switch [J]. Nat Rev Cancer,2002,2(9):647-656.

    [15] 黃鳳,毛麗松,張佳.Bcl-2、IGF-2蛋白在子宮肌瘤組織中的表達及其相關性研究[J].中國現代醫(yī)生,2013,51(13):13-14.

    [16] 王婷,馬云.Bcl-2在三陰性乳腺癌中的預后價值[J].中國現代醫(yī)生,2012,50(29):44-46.

    (收稿日期:2013-10-19 本文編輯:衛(wèi) 軻)

    猜你喜歡
    骨肉瘤凋亡干擾素
    從中醫(yī)陰陽淺析骨肉瘤微環(huán)境紊亂與免疫失衡的聯系
    毛細血管擴張型骨肉瘤的影像表現和鑒別
    細胞侵襲相關IL—8及IL—18在骨肉瘤患者血清水平及其臨床意義
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協同吉西他濱的抑瘤作用
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關系
    Livin和Survivin在卵巢癌中的表達及相關性研究
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    α-干擾素聯合利巴韋林治療慢性丙型肝炎
    霧化吸入γ干擾素對免疫低下肺炎的療效觀察
    干擾素α-1b治療成人麻疹療效初步觀察
    久久久久久免费高清国产稀缺| 男女下面插进去视频免费观看| 91国产中文字幕| 久久久国产一区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区 | 国产一区二区激情短视频 | 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产欧美在线一区| 久久午夜综合久久蜜桃| 99热全是精品| 国产精品国产av在线观看| 久久中文字幕一级| 一本色道久久久久久精品综合| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲精品在线美女| 国产不卡av网站在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产成人欧美在线观看 | 日韩av不卡免费在线播放| 男人操女人黄网站| 一级毛片 在线播放| 久久热在线av| 男男h啪啪无遮挡| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲三区欧美一区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产一区有黄有色的免费视频| tube8黄色片| 亚洲精品一二三| 国产免费现黄频在线看| 色综合欧美亚洲国产小说| 夫妻午夜视频| 久久久久久久精品精品| 亚洲精品国产av成人精品| 99热全是精品| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 黑丝袜美女国产一区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久青草综合色| 999精品在线视频| 男女床上黄色一级片免费看| 99精品久久久久人妻精品| 我的亚洲天堂| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一区二区三区乱码不卡18| av天堂在线播放| 亚洲人成77777在线视频| bbb黄色大片| 中文字幕av电影在线播放| 妹子高潮喷水视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产成人影院久久av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 黄片播放在线免费| 国产99久久九九免费精品| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品在线美女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产午夜精品一二区理论片| 久久鲁丝午夜福利片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜av观看不卡| 亚洲欧洲国产日韩| 国产成人啪精品午夜网站| av在线播放精品| 国产在视频线精品| 激情视频va一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 精品一区二区三卡| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲七黄色美女视频| 在线av久久热| 午夜激情av网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩大码丰满熟妇| 午夜福利视频精品| 日本欧美视频一区| 十八禁人妻一区二区| 久久热在线av| 乱人伦中国视频| 午夜福利免费观看在线| 日韩大码丰满熟妇| 1024视频免费在线观看| 日本欧美视频一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 黑丝袜美女国产一区| av网站免费在线观看视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 宅男免费午夜| 午夜福利免费观看在线| 日韩大码丰满熟妇| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 搡老乐熟女国产| 午夜福利影视在线免费观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产成人系列免费观看| 国产精品九九99| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲精品乱久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲久久久国产精品| 69精品国产乱码久久久| 9191精品国产免费久久| 在线观看免费视频网站a站| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品第一国产精品| 日本五十路高清| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲少妇的诱惑av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 黄片播放在线免费| 国产成人系列免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 免费看十八禁软件| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 伦理电影免费视频| 国产免费视频播放在线视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲专区中文字幕在线| 深夜精品福利| 十八禁人妻一区二区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 看免费av毛片| 一级黄片播放器| 国产精品久久久av美女十八| 欧美激情极品国产一区二区三区| 满18在线观看网站| 操出白浆在线播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 2021少妇久久久久久久久久久| 婷婷成人精品国产| av欧美777| 国产男女超爽视频在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 精品高清国产在线一区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 麻豆av在线久日| 国产一区二区 视频在线| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲成色77777| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品久久久久成人av| 精品国产一区二区三区四区第35| 十八禁人妻一区二区| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品 国内视频| 麻豆av在线久日| 国产成人免费观看mmmm| 国产一区二区 视频在线| 下体分泌物呈黄色| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 两个人免费观看高清视频| 免费高清在线观看日韩| 超色免费av| 大片电影免费在线观看免费| 91精品国产国语对白视频| 99热全是精品| avwww免费| 香蕉丝袜av| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品国产色婷婷电影| 99国产精品一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 69精品国产乱码久久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 无限看片的www在线观看| 人妻 亚洲 视频| 国产精品偷伦视频观看了| av在线播放精品| 国产野战对白在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 91精品国产国语对白视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产成人影院久久av| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品少妇内射三级| 国产av一区二区精品久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 日本91视频免费播放| 1024视频免费在线观看| av电影中文网址| 亚洲第一青青草原| 亚洲综合色网址| 亚洲欧美激情在线| 黑丝袜美女国产一区| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久99一区二区三区| 91老司机精品| 一区福利在线观看| 99热国产这里只有精品6| 下体分泌物呈黄色| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 久久精品国产亚洲av涩爱| 成人国产av品久久久| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲成人免费av在线播放| 久久99精品国语久久久| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利,免费看| 免费不卡黄色视频| 国产成人欧美| 一级,二级,三级黄色视频| 大片免费播放器 马上看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中文字幕色久视频| 好男人电影高清在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 国产成人免费无遮挡视频| 日本91视频免费播放| 亚洲七黄色美女视频| 91国产中文字幕| 亚洲国产日韩一区二区| 在线观看免费日韩欧美大片| 青春草亚洲视频在线观看| 下体分泌物呈黄色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 电影成人av| 最新在线观看一区二区三区 | 丰满少妇做爰视频| 国产一级毛片在线| 黄色视频不卡| 亚洲人成电影免费在线| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费在线观看影片大全网站 | 亚洲欧美成人综合另类久久久| 黄色毛片三级朝国网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 精品一区在线观看国产| a 毛片基地| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 后天国语完整版免费观看| 亚洲av片天天在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产黄频视频在线观看| 国产av国产精品国产| 丁香六月天网| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久国产精品麻豆| 1024香蕉在线观看| 69精品国产乱码久久久| 国产精品三级大全| 久久 成人 亚洲| 自线自在国产av| 国产精品.久久久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一本大道久久a久久精品| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产男女内射视频| a级毛片黄视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 九草在线视频观看| 久久久国产精品麻豆| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲中文日韩欧美视频| 飞空精品影院首页| 人妻一区二区av| 女人精品久久久久毛片| 丝袜脚勾引网站| www.999成人在线观看| 一区二区av电影网| 亚洲一区中文字幕在线| 人妻 亚洲 视频| 欧美在线一区亚洲| 大码成人一级视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 妹子高潮喷水视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 超碰成人久久| 久热这里只有精品99| 亚洲欧美精品自产自拍| xxx大片免费视频| 国产视频一区二区在线看| 99国产精品免费福利视频| 男人操女人黄网站| 中文字幕精品免费在线观看视频| 赤兔流量卡办理| 精品熟女少妇八av免费久了| av国产精品久久久久影院| 亚洲成色77777| 免费av中文字幕在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久久欧美国产精品| 日本vs欧美在线观看视频| 高清欧美精品videossex| 国产伦理片在线播放av一区| 操美女的视频在线观看| 一本综合久久免费| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲成国产人片在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产又爽黄色视频| 天天操日日干夜夜撸| av一本久久久久| 妹子高潮喷水视频| 亚洲av电影在线进入| 成年女人毛片免费观看观看9 | www.精华液| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产不卡av网站在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲国产看品久久| 大香蕉久久成人网| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产熟女午夜一区二区三区| 人妻人人澡人人爽人人| 另类亚洲欧美激情| 日本一区二区免费在线视频| 超碰97精品在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 一区二区三区激情视频| 久久性视频一级片| 老司机靠b影院| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧美激情在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品自拍成人| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲av国产av综合av卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费看十八禁软件| 在线观看www视频免费| 国产精品国产三级专区第一集| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久99精品国语久久久| 黄色 视频免费看| 日韩大码丰满熟妇| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲国产精品999| 日本一区二区免费在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品成人在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲免费av在线视频| 久久国产精品影院| 在线天堂中文资源库| 久久午夜综合久久蜜桃| 91成人精品电影| 丝袜人妻中文字幕| 精品国产国语对白av| 欧美黑人精品巨大| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 中文字幕精品免费在线观看视频| 蜜桃在线观看..| 精品国产一区二区久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费高清在线观看日韩| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 丝袜喷水一区| av福利片在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲七黄色美女视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本a在线网址| 色婷婷av一区二区三区视频| 又黄又粗又硬又大视频| 热99久久久久精品小说推荐| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品少妇内射三级| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲黑人精品在线| 在线av久久热| 热99国产精品久久久久久7| 蜜桃在线观看..| 国产一区二区在线观看av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费观看av网站的网址| 我的亚洲天堂| 久久亚洲精品不卡| 亚洲综合色网址| 精品一品国产午夜福利视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 免费在线观看日本一区| 久久女婷五月综合色啪小说| 最近手机中文字幕大全| 一级片免费观看大全| 秋霞在线观看毛片| 一区在线观看完整版| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 七月丁香在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成年女人毛片免费观看观看9 | 日本vs欧美在线观看视频| 丝袜喷水一区| 一级毛片电影观看| 久久久久精品人妻al黑| 99久久99久久久精品蜜桃| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美精品人与动牲交sv欧美| 99国产精品99久久久久| 亚洲第一青青草原| 国产精品三级大全| videos熟女内射| 日本av免费视频播放| 国产精品99久久99久久久不卡| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩制服骚丝袜av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 丰满少妇做爰视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美中文综合在线视频| 久久久久久久国产电影| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲国产欧美网| 国产精品二区激情视频| 高清av免费在线| 午夜免费成人在线视频| 国产一区二区三区av在线| 水蜜桃什么品种好| 又大又爽又粗| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久久久久久久免费视频了| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲精品日本国产第一区| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 国产av一区二区精品久久| 777米奇影视久久| 丁香六月天网| 日韩制服骚丝袜av| 国产深夜福利视频在线观看| 日本色播在线视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲欧美精品自产自拍| 大片免费播放器 马上看| 久久av网站| 高清av免费在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品一国产av| 一级黄片播放器| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 我的亚洲天堂| 国产一卡二卡三卡精品| 少妇人妻久久综合中文| 飞空精品影院首页| 久久九九热精品免费| 一级黄色大片毛片| cao死你这个sao货| 91精品伊人久久大香线蕉| 91精品三级在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 美女主播在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美中文综合在线视频| www.999成人在线观看| 午夜91福利影院| 国产免费福利视频在线观看| 精品福利观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日本91视频免费播放| 中文字幕最新亚洲高清| 夫妻性生交免费视频一级片| 久热爱精品视频在线9| 99热国产这里只有精品6| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 我要看黄色一级片免费的| 超色免费av| 日本五十路高清| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| www.av在线官网国产| 日本欧美国产在线视频| 欧美日韩视频精品一区| 免费黄频网站在线观看国产| 9色porny在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久9热在线精品视频| 在线观看一区二区三区激情| 午夜激情久久久久久久| 亚洲国产看品久久| 一级片'在线观看视频| 日韩电影二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 搡老岳熟女国产| 女人精品久久久久毛片| 天堂俺去俺来也www色官网| 免费高清在线观看视频在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 大型av网站在线播放| 亚洲欧美清纯卡通| 性色av乱码一区二区三区2| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 丝袜美腿诱惑在线| 婷婷色综合www| 成年美女黄网站色视频大全免费| 日韩免费高清中文字幕av| 99国产精品免费福利视频| 免费在线观看日本一区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产一区二区 视频在线| a级片在线免费高清观看视频| www.熟女人妻精品国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一本色道久久久久久精品综合| 国产一区有黄有色的免费视频| 99热网站在线观看| 精品人妻1区二区| 亚洲免费av在线视频| 丝袜喷水一区| 色综合欧美亚洲国产小说| 两个人免费观看高清视频| 制服人妻中文乱码| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 色视频在线一区二区三区| 黄色视频不卡| 久久精品国产综合久久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲九九香蕉| 热99国产精品久久久久久7| 伊人亚洲综合成人网| 一级黄片播放器| 两性夫妻黄色片| 亚洲专区中文字幕在线| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 免费看不卡的av| 青青草视频在线视频观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 丁香六月欧美| 久久中文字幕一级| a级毛片黄视频| 亚洲人成电影观看| 欧美 日韩 精品 国产| 国产97色在线日韩免费| 男女床上黄色一级片免费看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产欧美日韩一区二区三 | 99热全是精品| 中文字幕色久视频| 国产在线免费精品| 亚洲五月色婷婷综合| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲久久久国产精品| 亚洲,欧美精品.| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产主播在线观看一区二区 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产精品国产av在线观看| 黄片播放在线免费| videosex国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 麻豆av在线久日| 婷婷成人精品国产| 亚洲国产av新网站| av在线老鸭窝| 欧美精品av麻豆av| 国产三级黄色录像| 欧美性长视频在线观看| 男女边摸边吃奶| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 十分钟在线观看高清视频www| 成年动漫av网址| 久久久久久久精品精品| 午夜福利免费观看在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 十八禁人妻一区二区| 成人国产一区最新在线观看 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久鲁丝午夜福利片|